免疫刺激剂制造技术

本发明专利技术旨在提供具有免疫刺激作用并用作免疫刺激剂(尤其是佐剂)的化合物、含有该化合物的组合物和含有所述化合物和抗原的疫苗。本发明专利技术涉及免疫刺激剂，其包含至少一种式(I)代表的化合物：其中各符号如本说明书中所定义。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及具有良好的免疫刺激作用和用作免疫刺激剂(尤其是佐剂)的化合物、含有该化合物的组合物和含有该化合物和抗原的疫苗。
技术介绍
疫苗包括活疫苗，其中病原体毒性减弱；全颗粒疫苗(whole particle vaccine)，其中病原体是灭活的；和裂解疫苗，其中病原体被分解且只有特定的成分被提取和纯化。其中，裂解疫苗需要添加称为佐剂的化合物或组合物以增强其免疫刺激能力。此外，近年来研究和开发渐增的粘膜疫苗、癌症疫苗和用于一些过敏的疫苗也需要添加用于其效果表达的佐剂。目前在国内批准的佐剂的实例包括作为沉淀佐剂的铝盐(氢氧化铝凝胶等)、作为油性佐剂的角鲨烷、为脂多糖LPS变体的MPL，其为本质上具有免疫原性的革兰氏阴性细菌细胞壁外膜的组成成分。针对衍生自CpG和Poly I:C等的核酸、活化Toll样受体(TLR)的细菌组成成分的变体、刺激免疫系统等的细胞因子的变体等，在全球范围内佐剂的研究和开发也越来越多。但是，包括在国内已经批准的那些现有佐剂以及正在研究和开发的那些佐剂均具有以下问题。对于为沉淀佐剂的铝盐而言，所述佐剂的作用在一些疫苗中，例如流感HA疫苗、口蹄疫疫苗等中遭到质疑。此外，从安全方面考虑，已知铝盐通常在接种部位显示肉芽形成、造成高免疫球蛋白E血症等。对于油性佐剂，例如角鲨烯等，由于乳化使粘度增加，因此接种有时可能是疼痛的，并且，由于其在体内具有抗分散的性质并滞留在接种部位，因此接种部位有时会硬化。另一方面，由于MPL是具有免疫原性的LPS的变体，因此同时接种疫苗有时会引起剧烈的炎性反应并有时伴有疼痛和发烧。此外，正在研究的佐剂也仍然具有安全问题，例如诱导过敏、剧烈的炎性反应、引起发烧等。对于核酸佐剂，正在面临新的问题，例如作为药物产物合成的问题，例如，难以化学合成达到被认为提供有效的佐剂作用的链长度等等。尽管佐剂被要求要同时表现有效性和安全性，但是国内已经批准的常规佐剂和正在研究和开发中的那些佐剂均无法完全满足这种情况下的要求。与此同时，国立变态反应与传染病研究所(National Institute of Allergy and Infectious Diseases，NIAID)针对疫苗佐剂的安全性指出以下12点。1)不会诱导自身免疫反应，2)无与人抗原具有交叉反应性的抗原，3)不会诱导变应性过敏反应，4)应是化学合成纯的，5)无致癌性，6)不会诱导除目标免疫应答之外的应答，7)应为在体内被快速代谢的物质，8)无论何种接种方法，应为安全的，9)应无致畸性和生殖毒性，10)应具有至少一年的储存稳定性，11)应根据对象进行选择，12)应耐受低频率产生的副作用。此外，在EMEA(欧洲医药局)的准则中，所述EMEA是负责欧洲疫苗检测的组织，列举了1)接种点的组织损伤和肉芽肿形成，2)过敏(hypersensitivity)和过敏性反应(anaphylaxis)，3)致热原性，4)全身毒性，5)生殖毒性，6)遗传毒性(只就合成性佐剂而言)作为单独佐剂的非临床毒性试验。尽管一些部分是共同的或者在美国和欧洲之间不是共同的，但是至少从现在开始所研发的疫苗佐剂应满足这些要求。对于具有免疫调节作用的化合物而言，例如，专利文献1-7和非专利文献1–4中所述的化合物，在之前已经被报道。尽管专利文献1的实施例25描述了一种化合物，其中对应于下式(I)中的R3和R4的基团为十一基(C11烷基)，但是该化合物不同于式(I)代表的化合物且其佐剂活性不足。尽管专利文献2的实施例3描述了一种化合物，其中对应于式(I)中的R3和R4的基团为不饱和烃基(C17链烯基)，但是该化合物也不同于式(I)代表的化合物且其佐剂活性不足。尽管专利文献3的表1和2公开了一种化合物，其中对应于式(I)中的R3和R4的基团为被酮基或羟基取代的长链烷基(C35烷基)，但是该化合物也不同于式(I)代表的化合物，且该化合物在盐水等中的分散性根本没有进行研究，且没有任何报道关于通过将所述化合物与α-环糊精结合来提高分散性从而增强其效果。专利文献7公开了N,N’-双(十六烷酰基)-L-胱氨酸二叔丁酯(化合物，其中对应于式(I)中的R3和R4的基团为C15烷基)，其为可用于疫苗佐剂的化合物的合成中间体；但是，其免疫调节作用并未报道，且没有报道指明其作为免疫刺激剂或佐剂的用途。尽管N,N’-双(十六烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯(化合物，其中对应于式(I)中的R3和R4的基团为C15烷基，CAS登记号：73793-92-7，描述于非专利文献1)和N,N’-双(十八烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯(化合物，其中对应于式(I)中的R3和R4的基团为C17烷基，CAS登记号：121074-91-7和896442-54-9，描述于非专利文献2)是已知的化合物；但是，它们的免疫调节作用并未被报道，且没有任何报道指出其作为免疫刺激剂或佐剂的用途。另一方面，非专利文献4报道了评估叶绿醇及其衍生物的佐剂活性的结果。该文献描述β-环糊精用于在细胞增殖抑制测试中溶解叶绿醇；但是，未使用β-环糊精来评估抗原特异性抗体的产生。此外，在非专利文献4中未描述或暗示α-环糊精。文献列表专利文献专利文献1：JP-A-4-230359专利文献2：JP-A-59-219262专利文献3：JP-A-63-264444专利文献4：JP-A-62-63600专利文献5：JP-A-5-507705专利文献6：JP-A-11-302250专利文献7：JP-A-5-186419非专利文献非专利文献1：Cybulla，J.等人，Biochemical and Biophysical Research Communications 1980，92(4)，1389-96非专利文献2：Zeelen，F.J.等人，Recueil des Travaux Chemiques des Pays-Bas et de la Belgique 1958，77(3)，267-72非专利文献3：Roth，A.等人，Bioconjugate Chem.，2004，15，541-553非专利文献4：Y.Aachoui等人，Cellular Immunology 271(2011)308-318
技术实现思路
本专利技术所解决的问题本专利技术的目的是提供具有免疫刺激作用并用作免疫刺激剂，尤其是用作佐剂的化合物和含有该化合物的组合物，和含有所述化合物和抗原的疫苗。解决问题的方式为了解决上述问题，本专利技术人已进行了深入研究并发现下式(I)所代表的化合物(下文有时称为本专利技术化合物或化合物(I))具有良好的免疫刺激作用，其可增强抗原-特异性IgG1亚类抗体的产生而不会诱导IgE抗体的产生。此外，本专利技术人已经对化合物(I)进行了进一步研究，并发现其在盐水中的溶解性和分散性随着酰基链长度的增加有下降的趋势。本专利技术人已经进行了深入研究，以改善下降的分散性，并发现通过加入α-环糊精，该分散性可被显著提高，并且，令人意料不到的是，甚至其增强抗原特异性IgG1亚类抗体产生的作用(免疫刺激作用)也可得到提高。本专利技术人基于这些发现进行了进一步研究并完成了本专利技术。因此，本专利技术提供了以下内容。[1]免疫刺激剂，其包括至少一种式(I)代表的化合物：其中R1和R2相同或本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫刺激剂，其包含至少一种式(I)代表的化合物：其中R1和R2相同或不同且各自为C1‑6烷基；R3和R4相同或不同且各自为C12‑37烷基；X1为‑O‑、‑NR5‑或‑S‑，其中R5为氢原子或C1‑6烷基；和X2为‑O‑、‑NR6‑或‑S‑，其中R6为氢原子或C1‑6烷基。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.04.25 JP 2014-091142;2015.02.27 JP 2015-039591.一种免疫刺激剂，其包含至少一种式(I)代表的化合物：其中R1和R2相同或不同且各自为C1-6烷基；R3和R4相同或不同且各自为C12-37烷基；X1为-O-、-NR5-或-S-，其中R5为氢原子或C1-6烷基；和X2为-O-、-NR6-或-S-，其中R6为氢原子或C1-6烷基。2.根据权利要求1的免疫刺激剂，其中R1和R2各自为甲基。3.根据权利要求1或2的免疫刺激剂，其中X1和X2各自为-NH-。4.根据权利要求1-3中任一项的免疫刺激剂，其中R3和R4相同或不同且各自为C12-35烷基。5.根据权利要求1-4中任一项的免疫刺激剂，其中R3和R4相同或不同且各自为C12-30烷基。6.根据权利要求1-3中任一项的免疫刺激剂，其中所述式(I)代表的化合物选自由以下组成的群组：N,N’-双(十六烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯，N,N’-双(2-庚基十一烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯，N,N’-双[5,7,7-三甲基-2-(1,3,3-三甲基丁基)辛酰基]-L-胱氨酸二甲酯，N,N’-双(十三烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯，N,N’-双(十八烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯，N,N’-双(三十烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯，N,N’-双(2-十四烷基十六烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯，N,N’-双(2-十八烷基二十烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯，和N,N’-双(二十二烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯。7.根据权利要求1-6中任一项的免疫刺激剂，其中所述式(I)代表的化合物选自由以下组成的群组：N,N’-双(十六烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯，N,N’-双(2-庚基十一烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯，N,N’-双[5,7,7-三甲基-2-(1,3,3-三甲基丁基)辛酰基]-L-胱氨酸二甲酯，N,N’-双(十三烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯，N,N’-双(十八烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯，和N,N’-双(三十烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯。8.根据权利要求1-7中任一项的免疫刺激剂，进一步包含α-环糊精。9.根据权利要求1-3中任一项的免疫刺激剂，进一步包含α-环糊精，其中R3和R4相同或不同且各自为C29-37烷基。10.根据权利要求1-9中任一项的免疫刺激剂，其中所述免疫刺激剂为佐剂。11.一种疫苗，其包含根据权利要求1-10中任一项的试剂和抗原。12.一种药物组合物，其包含至少一种式(I)代表的化合物和α-环糊精：其中R1和R2相同或不同且各自为C1-6烷基；R3和R4相同或不同且各自为C12-37烷基；X1为-O-、-NR5-或-S-，其中R5为氢原子或C1-6烷基；和X2为-O-、-NR6-或-S-，其中R6为氢原子或C1-6烷基。13.根据权利要求12的药物组合物，其中R1和R2各自为甲基。14.根据权利要求12或13的药物组合物，其中X1和X2各自为-NH-。15.权利要求12-14中任一项的药物组合物，其中R3和R4相同或不同且各自为C29-37烷基。16.权利要求12-14中任一项的药物组合物，其中所述式(I)代表的化合物选自由以下组成的群组：N,N’-双(十六烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯，N,N’-双(2-庚基十一烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯，N,N’-双[5,7,7-三甲基-2-(1,3,3-三甲基丁基)辛酰基]-L-胱氨酸二甲酯，N,N’-双(十三烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯，N,N’-双(十八烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯，N,N’-双(三十烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯，N,N’-双(2-十四烷基十六烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯，N,N’-双(2-十八烷基二十烷酰基)-L-胱氨酸二甲酯，和N,N’-双(二十二烷酰基)...

【专利技术属性】
技术研发人员：栗原重一，田中贤治，黑泽涉，海塩洋，
申请(专利权)人：味之素株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP