一种快速检测芸薹属六倍体新种质倍性的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速检测芸薹属六倍体新种质倍性的方法，包括：(1)从芸薹属新种质上取从心叶往外的第三片叶，装入含有钢珠的离心管中，向离心管中加入提取缓冲液，在‑20～‑10℃下静置5～20min后放入磨样机中进行磨样；(2)将磨碎后的叶片用滤网过滤得滤液，在滤液中加入RNAse溶液，在37℃中孵化20～30min；(3)在孵化后的滤液中加入染色液避光染色得单细胞悬浮液样品；(4)用流式细胞仪对单细胞悬浮液样品进行检测。本发明专利技术采用磨样机对叶片组织进行研磨，产生的单细胞悬浮液中单细胞数量较多，很少产生破碎细胞，同时检测效率高，适合大批量检测。

A method for rapid detection of Brassica germplasm was six times as much as the new times of

The invention discloses a method for rapid detection of Brassica was six times as much as the times of new germplasm including: (1) a new germplasm from the leaves to third leaves from Brassica, packed in steel tube centrifugal, centrifugal tube extraction buffer to join in 20 ~ 10 C standing for 5 ~ 20min in grinding machine for grinding samples; (2) the leaves after grinding with the filter filtrate, RNAse solution is added into the filtrate, at 37 DEG C in hatch 20 ~ 30min; (3) adding staining light staining to single cell suspension samples after hatching the filtrate; (4) to detect the single cell suspension samples by flow cytometry. The invention adopts the grinding machine to grind the blade tissue, and the number of single cells in the single cell suspension is more, and the broken cells are rarely produced.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种快速检测芸薹属六倍体新种质倍性的方法。
技术介绍
芸薹属(Brassica spp.)是十字花科(Brassicaceae，曾名Cruciferae)植物中最为重要的一个属。在我国，芸薹属作物的种植非常广泛，包括许多重要的蔬菜、油料、药用及饲料作物。很多植物多倍化后由于多个染色体组的累积效应使其表现出许多新的表型，更适合农业生产上的需要，如小麦、棉花、烟草、苹果等。芸薹属A、B、C三个基因组被认为是起源于一个古老六倍体的祖先(参考文献：Lysak M A，et al.Chromosome triplication found across the tribe Brassiceae[J].Genome Research，2005，15：516-525)。然而在自然界中，不存在含有A、B和C三个基因组的六倍体芸薹属植物(AABBCC)，Geng X X等人在文献(参考文献：Geng XX，et al.Doubled haploids of novel trigenomic Brassica derived from various intersp本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速检测芸薹属六倍体新种质倍性的方法，其特征在于，包括：(1)从芸薹属新种质上取从心叶往外的第三片叶，装入含有钢珠的离心管中，向离心管中加入提取缓冲液，在‑20～‑10℃下静置5～10min后放入磨样机中进行磨样；(2)将磨碎后的叶片用滤网过滤得滤液，在滤液中加入RNAse溶液，在37℃中孵化20～30min；(3)在孵化后的滤液中加入染色液避光染色得单细胞悬浮液样品；(4)用流式细胞仪对单细胞悬浮液样品进行检测。

【技术特征摘要】
1.一种快速检测芸薹属六倍体新种质倍性的方法，其特征在于，包括：(1)从芸薹属新种质上取从心叶往外的第三片叶，装入含有钢珠的离心管中，向离心管中加入提取缓冲液，在-20～-10℃下静置5～10min后放入磨样机中进行磨样；(2)将磨碎后的叶片用滤网过滤得滤液，在滤液中加入RNAse溶液，在37℃中孵化20～30min；(3)在孵化后的滤液中加入染色液避光染色得单细胞悬浮液样品；(4)用流式细胞仪对单细胞悬浮液样品进行检测。2.根据权利要求1所述的快速检测芸薹属六倍体新种质倍性的方法，其特征在于，从芸薹属新种质上取叶片时，取叶时期为四至六叶期。3.根据权利要求2所述的快速检测芸薹属六倍体新种质倍性的方法，其特征在于，从芸薹属新种质上取叶片时，取叶时期为五叶期。4.根据权利要求1所述的快速检测芸薹属六倍体新种质倍性的方法，其特征在于，步骤(1)中，每1mg叶片加入8～12μL提取缓冲液。5.根据权利要求1所述的快速检测芸薹属六倍体新种质倍性的方法，其特征在于，磨样时，磨样机的振动频率为20～30Hz，磨样时间为20s～4min。6.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨素，周伟军，张康妮，许玲，王尖，葛常青，徐建祥，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33