辛芍提取物中有效成分在Caco-2细胞模型中吸收转运量的测定方法技术
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药检测
，尤其是涉及辛芍提取物中有效成分在Caco-2细胞模型中吸收转运量的测定方法。
技术介绍
辛芍组方，来源于贵州民间验方，由灯盏细辛和赤芍配伍组成在民间以其汤剂煎服用于治疗偏瘫，有较好的临床基础。本方根据风痰流窜经络，血脉痹阻，经隧不通，气不能行，血不能濡，故肢体废而不用成半身不遂的病因病机，采取活血化淤通络之法。以灯盏细辛为君，化淤通络，赤芍凉血热、通经络，治血热淤滞，助君药以达活血化淤、散淤通络之效。同时，课题组通过现代药理学研究表明，辛芍组方具有抗凝血、抗血栓形成、软化扩张血管、改善脑缺血等作用。但辛芍组方的体内过程、吸收机理、吸收影响因素并不是很明确，有待于进一步研究。口服用药是中医药治疗的主要手段，现代研究证明，药物口服后透过胃肠道上皮细胞进入血流，随体循环系统分布到各组织器官或靶点，并在达到一定的血药浓度时才能发挥疗效。因此，研究中药的体内吸收特征及机制，对于合理设计药物剂型，阐明中药起效的作用物质基础，对揭开中药体内过程这一“黑箱”至关重要。由于小肠是主要的吸收部位，科学的肠吸收研究方法可使我们了解肠内酶及其细胞的屏障作...
【技术保护点】
辛芍提取物中有效成分在Caco‑2细胞模型中吸收转运量的测定方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1：制备辛芍提取物供试药液；步骤2：用芍药内酯苷、没食子酸，咖啡酸、灯盏乙素、灯盏甲素制备作为对照品的系列标准溶液；步骤3：以葛根素配制内标溶液；步骤4：建立人源结肠腺癌细胞系Caco‑2细胞模型；步骤5：将步骤1得到的供试药液和步骤2得到的系列标准溶液分别加入Caco‑2细胞模型，用HBSS并快速清洗三遍细胞单分子层，加入空白细胞裂解液反复冻融裂解细胞，裂解细胞后，分别得到供试品和对照品的含药的细胞悬液；步骤6：用UPLC‑MS测定步骤5中得到的含药的细胞悬液中芍药内酯苷、没食子...
【技术特征摘要】
1.辛芍提取物中有效成分在Caco-2细胞模型中吸收转运量的测定方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1：制备辛芍提取物供试药液；步骤2：用芍药内酯苷、没食子酸，咖啡酸、灯盏乙素、灯盏甲素制备作为对照品的系列标准溶液；步骤3：以葛根素配制内标溶液；步骤4：建立人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞模型；步骤5：将步骤1得到的供试药液和步骤2得到的系列标准溶液分别加入Caco-2细胞模型，用HBSS并快速清洗三遍细胞单分子层，加入空白细胞裂解液反复冻融裂解细胞，裂解细胞后，分别得到供试品和对照品的含药的细胞悬液；步骤6：用UPLC-MS测定步骤5中得到的含药的细胞悬液中芍药内酯苷、没食子酸、咖啡酸、灯盏乙素、灯盏甲素5个活性成分的吸收量；步骤7：取步骤5中得到含药的细胞悬液加入内标溶液，加入乙腈沉淀蛋白，涡混和离心处理，取上清液进样分析，测定芍药内酯苷、没食子酸、咖啡酸、灯盏乙素和灯盏甲素的浓度；另取步骤5中得到含药的细胞裂解液以考马斯亮蓝法测定蛋白含量。2.根据权利要求1所述的辛芍提取物中有效成分在Caco-2细胞模型中吸收转运量的测定方法，其特征在于步骤1中辛芍提取物供试药液的制备方法如下：取辛芍提取物，加入适量的PH6的HBSS缓冲溶液，超声10 min，5000 r·min-1离心5 min，取上清液备用，获得10.0 g•L-1的供试液。3.根据权利要求1所述的辛芍提取物中有效成分在Caco-2细胞模型中吸收转运量的测定方法，其特征在于步骤2中系列标准溶液的制备方法如下：精密称取芍药内酯苷、没食子酸，咖啡酸、灯盏乙素、灯盏甲素适量，用甲醇定容至10 mL；获得芍药内酯苷、没食子酸，咖啡酸，灯盏乙素和灯盏甲素的储备液；分别精密量取5种对照品储备液适量，用甲醇按梯度稀释成所需浓度，得混合系列标准溶液，置冰箱保存备用。4.根据权利要求1所述的辛芍提取物中有效成分在Caco-2细胞模型中吸收转运量的测定方法，其特征在于步骤...
【专利技术属性】
技术研发人员：王爱民，兰燕宇，黄勇，巩仔鹏，李月婷，郑林，刘亭，董莉，陈思颖，
申请(专利权)人：贵州医科大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52
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