一种利用果胶酶提取马齿苋多糖的方法技术

本发明专利技术提供一种利用果胶酶提取马齿苋多糖的方法，该方法提取的马齿苋粗多糖具有较好的抗氧化性。该方法包括如下步骤：a、新鲜马齿苋→洗净→50±1℃烘干→粉碎→石油醚脱脂→50±1℃烘干；b、超纯水加酶浸提：取步骤a得到的干燥马齿苋与水混合，调体系pH至4.8‑5.2，加入果胶酶液进行提取，25‑40℃酶解1‑2h，得到酶解液；c、酶解液于100℃的沸水浴下使酶失活，离心分离后得到含有马齿苋多糖的浸提液。本发明专利技术制得的马齿苋多糖具有‑对Fe3+和Ce4+的还原能力强、对羟基和超氧阴离子自由基的清除率高的抗氧化性好，与热水浸提和超声波辅助提取相比具有耗能低的优点，其抗氧化活性优于VC。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种多糖的提取方法，特别涉及一种利用果胶酶提取马齿苋多糖的方法。
技术介绍
马齿苋(Portulaca oleracea L.)为马齿苋科马齿苋属草本植物，作为传统药用植物,马齿苋首见于<本经集注>，后收入<中华人民共和国药典>。本品味酸性寒，归肝、大肠经，具有清热解毒、凉血止血的功效。现代药理学研究表明:本品有降血脂、抗衰老、提高人体免疫力的作用。马齿苋含有约3％的糖类成分，然而相关报道却不多见。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种利用果胶酶提取马齿苋多糖的方法，该方法提取的马齿苋粗多糖具有较好的抗氧化性。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种利用果胶酶提取马齿苋多糖的方法，该方法包括如下步骤：a、新鲜马齿苋→洗净→50±1℃烘干→粉碎→石油醚脱脂→50±1℃烘干；b、超纯水加酶浸提：取步骤a得到的干燥马齿苋与水混合，调体系pH至4.8-5.2，加入果胶酶液进行提取，25-40℃酶解1-2h，得到酶解液；c、酶解液于100℃的沸水浴下使酶失活，离心分离后得到含有马齿苋多糖的浸提液。作为优选，果胶酶与马齿苋的质量比为0.006-0.01：1。进一步的，果胶酶与马齿苋的质量比为0.007-0.008：1。作为优选，所述的酶解时间为75-85min。作为优选，所述的酶解温度为28-32℃。作为优选，步骤b中，干燥马齿苋与水的质量比为1:38-42。本专利技术的有益效果是：本专利技术优化了果胶酶提取马齿苋多糖的工艺，可以高效提取马齿苋多糖。与热水浸提、木瓜蛋白酶解法、纤维素酶解法和超声波提取的多糖相比，果胶酶提取的多糖对超氧阴离子自由基(O2-·)清除能力最强，同这几种方法提取的马齿苋粗多糖对Fe3+和Ce4+的还原能力：热水提取最强，其次是果胶酶。本专利技术制得的马齿苋多糖具有-对Fe3+和Ce4+的还原能力强、对羟基和超氧阴离子自由基的清除率高的抗氧化性好，与热水浸提和超声波辅助提取相比具有耗能低的优点，其抗氧化活性优于VC。附图说明图1是酶用量对多糖得率的影响曲线；图2是酶解pH对多糖得率的影响曲线；图3是酶解时间对多糖得率的影响曲线；图4是酶解温度对多糖得率的影响曲线；图5是Y1＝f(AB)响应曲面图；图6是Y1＝f(AC)响应曲面图；图7是Y1＝f(BC)响应曲面图；图8是Y2＝f(AC)响应曲面图；图9是Y2＝f(AB)响应曲面图；图10是Y2＝f(BC)响应曲面图；图11是马齿苋多糖提和Vc的·DPPH清除率对比曲线；图12是马齿苋多糖和Vc对Ce(IV)的还原能力对比曲线。具体实施方式下面通过具体实施例，对本专利技术的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本专利技术的实施并不局限于下面的实施例，对本专利技术所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本专利技术保护范围。在本专利技术中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。马齿苋采自嘉兴有机农业示范园。葡萄糖、浓硫酸、苯酚、氢氧化钠、无水乙醇、95％乙醇、浓磷酸、浓盐酸、水杨酸、双氧水、硫酸亚铁、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠，铁氰化钾，三氯乙酸，三氯化铁，上海联试化工试剂有限公司；Ce(SO4)2·4H2O，北京康普汇科技有限公司；抗坏血酸，天津博迪化工股份有限公司；三羟甲基氨基甲烷(Tris)，上海伯奥生物科技有限公司；邻苯三酚，遵义林源医药化工有限责任公司；等均为分析纯。果胶酶(含量99％)，无锡百瑞多化工产品有限公司。CP225D型1/10万电子分析天平，德国SATORIOS公司；JP-500B-2型多功能粉碎机，上海市久品工贸有限公司；UV-1102Ⅱ型单光束紫外/可见分光光度计上海天美科学仪器有限公司；DK-S24型恒温水浴锅、DGG-9240BD型电热恒温鼓风干燥箱，上海森信实验仪器有限公司；Millipore超纯水仪、Smartpark DQ3纯水柱，美国。本专利技术实施例中采用的马齿苋多糖含量测定和羟自由基(·OH)消除率的测定方法如下：①马齿苋多糖含量测定采用苯酚一硫酸法，以葡萄糖作为标准品，分光光度计测定多糖含量。标准曲线准确称取105℃干燥恒重的葡萄糖标准品0.2g,用超纯水溶解至100mL容量瓶中定容,吸取5mL此溶液再定容于100mL容量瓶中,得到浓度为0.1mg·mL-1的标准葡萄糖溶液。准确吸取标准溶液0(空白)、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mL分别置于具塞试管中,加超纯水使体积为2.0mL,再加入体积分数6％的苯酚溶液1mL,摇匀,迅速加入浓硫酸5.0mL，振摇5min，置沸水浴中加热15min，再置冷水中冷却，于490nm处测定吸光度A,以糖浓度(c)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线,得标准曲线的回归方程和相关系数。浸提液中多糖含量的测定取浸提液,按标准曲线项下方法操作,测定吸收值,从回归方程中求出浸提液中葡萄糖的含量,按下式计算样品中多糖含量。粗多糖得率(％)＝C×n×V×100％/(W×103)，C为吸光值对应的葡萄糖标准曲线上质量浓度(mg/mL)；n为稀释倍数；V为多糖溶液体积(mL)；W为样品量(g)。②羟自由基(·OH)消除率的测定本实验采用了水杨酸捕获法，其原理是利用H2O2和Fe2+在水溶液中发生Fenton反应，生成羟自由基(·OH)，反应方程式:H2O2+Fe2+→Fe3++·OH。水杨酸能够高效地捕捉·OH并生成有色物质，该物质在510nm处有最大吸收峰，通过吸光度的变化可以衡量试样清除羟自由基的能力。以·OH氧化水杨酸所得产物的吸光值表示·OH的多少，吸光值越大，·OH越多。本实验在Smironff等报道的方法的基础上进行了改进，以2.0mmol·L-1FeSO4︰3.0mmol·L-1H2O2︰3.0mmol·L-1水杨酸＝1︰1︰1的比例加入到烧杯中，震荡摇匀(FeSO4与H2O2混匀10min后，加入水杨酸混匀。)。取10mL比色管，每支都加入上述溶液9.0mL，然后分别加入不同浓度的样品溶液1.0mL摇匀，放置30min后以超纯水调零，于510nm处测得其吸光度Ai，不加样品只加超纯水的比色管检测吸光度值为A0。以VC作为阳性对照，每个浓度平行测3次，求其平均值。按以下公式计算各试样对羟基自由基(OH·)的清除率:清除率按下式计算：清除率(％)＝[1-(Ai－Aj)/A0]×100％式中：A0为不加样品时溶液的吸光度；Aj为不加过氧化氢溶液时的吸光度；Ai为加样品时溶液的吸光度。实施例11.1单因素试验马齿苋多糖提取工艺如下：新鲜马齿苋→洗净→50℃烘干→粉碎→石油醚脱脂→50℃烘干，得到干燥马齿苋→超纯水加酶浸提(恒温)→100℃灭酶10min→离心分离→上清液→测多糖含量。为考察酶用量、酶解pH、酶解时间、酶解温度和料液比对马齿苋多糖得率的影响，进行如下单因素试验。①酶用量对多糖得率的影响称取六份2.000g马齿苋(干燥)，料液比1∶25，用柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液调pH至5.0，分别加入0.0、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030g的果胶酶液进行提取，40℃酶解1h，酶解后在沸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用果胶酶提取马齿苋多糖的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：a、新鲜马齿苋→洗净→50±1℃烘干→粉碎→石油醚脱脂→50±1℃烘干；b、超纯水加酶浸提：取步骤a得到的干燥马齿苋与水混合，调体系pH至4.8‑5.2，加入果胶酶液进行提取，25‑40℃酶解1‑2h，得到酶解液；c、酶解液于100℃的沸水浴下使酶失活，离心分离后得到含有马齿苋多糖的浸提液。

【技术特征摘要】
1.一种利用果胶酶提取马齿苋多糖的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：a、新鲜马齿苋→洗净→50±1℃烘干→粉碎→石油醚脱脂→50±1℃烘干；b、超纯水加酶浸提：取步骤a得到的干燥马齿苋与水混合，调体系pH至4.8-5.2，加入果胶酶液进行提取，25-40℃酶解1-2h，得到酶解液；c、酶解液于100℃的沸水浴下使酶失活，离心分离后得到含有马齿苋多糖的浸提液。2.根据权利要求1所述的利用果胶酶提取马齿苋多糖的方法，其特征在于：果胶酶与马齿苋的质量比为0....

【专利技术属性】
技术研发人员：陈凌，络卢佳，贾艳，
申请(专利权)人：陈凌，
类型：发明
国别省市：浙江;33