SEMA5B肽和含有SEMA5B肽的疫苗制造技术

本文描述了针对癌症的肽疫苗。具体的说，提供衍生于SEMA5B基因的分离表位肽，其引起CTL，因此适合用于癌症的免疫治疗。所述发明专利技术性的肽包含SEMA5B衍生肽以及其修饰形式，其中一个、两个、或几个氨基酸被取代、缺失、插入或添加，只要这些修饰形式保留了原始序列的必备CTL诱导能力。进一步提供编码此类肽的多核苷酸，以及包括任意此类肽或多核苷酸作为活性试剂的药物组合物。还提供靶向此类肽的抗原呈递细胞和分离的CTL，以及用于诱导所述抗原呈递细胞或CTL的方法。此外，本发明专利技术提供用于治疗和/或预防(例如阻止)癌症(肿瘤)(比如食管癌、NSCLC、RCC和SCLC)和/或阻止其转移或术后复发的方法，以及用于诱导CTL的方法，用于诱导抗肿瘤免疫力的方法，其使用衍生于SEMA5B的肽，编码所述肽的多核苷酸，或呈递所述肽的抗原呈递细胞，或本发明专利技术的药物组合物进行。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及生物科学领域，更具体的涉及癌症治疗领域。特别地，本专利技术涉及作为癌症疫苗有效的新肽，以及用于肿瘤治疗和/或预防任一项或两项的药物。优先权本专利技术要求2012年12月4日提交的美国临时申请号61/733279的权益，其全部内容通过引用并入本文。
技术介绍
CD8阳性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)已被证明识别表位肽，然后杀死肿瘤细胞，所述表位肽衍生自发现于主要组织相容性复合物(MHC)I类分子上的肿瘤相关抗原(TAAs)。自从黑色素瘤抗原(MAGE)家族作为TAAs的第一个例子被发现，主要通过免疫学方法(NPL1-2)已发现多种其它TAAs。这些TAAs的一些作为免疫治疗靶标目前正在进行临床开发。有利的TAAs对于癌细胞的增殖和存活是必不可少的。这些TAAs作为免疫治疗靶标的使用可以最小化有很好描述的癌细胞免疫逃逸风险，其可归于作为治疗驱动的免疫选择(therapeuticallydrivenimmuneselection)结果的TAA缺失、突变或下调。因此，对能够诱导有效的并且特异性的抗肿瘤免疫应答的新TAAs的鉴定保证了进一步的开发。因此，用于各种类型的肿瘤的肽疫苗接种策略的临床应用正在进行中(NPL3-10)。至今，已有使用这些TAA衍生肽的临床试验的数个报告。不幸的是，这些癌症疫苗试验至今只取得了较低的客观应答率(NPL11-13)。因此，对适合用作免疫治疗靶标的新TAAs仍然有需求。SEMA5B是semaphorin蛋白家族的成员，其为一类神经发育期间参与轴突引导的分泌型和膜型蛋白(NPL14)。最近的研究提示，semaphorin家族蛋白的功能不仅涉及神经系统，还涉及器官发生、血管生成和癌症的进展。在使用由23040个基因组成的cDNA微阵列，通过基因表达谱分析来阐明肾细胞癌(RCC)的分子机制的过程中，发现SEMA5B在RCC中频繁上调。在衍生于RCC患者的cDNA样品中对该基因的RT-PCR分析证明，SEMA5B在所有的RCC样品中上调。使用SEMA5BcDNA片段作为探针的后续Northern杂交分析揭示了一种在RCC组织中高表达，但除了胎儿的脑和肾之外，在正常人组织中几乎检测不到的SEMA5B转录物(PTL1)。此外，在RCC细胞系(NPL15)中通过siRNA敲低SEMA5B减弱了RCC细胞的生长。引用表专利文献[PTL1]WO2007/013575非专利文献[NPL1]BoonT,IntJCancer1993,54(2):177-80[NPL2]BoonT&vanderBruggenP,JExpMed1996,183(3):725-9[NPL3]HarrisCC,JNatlCancerInst1996,88(20):1442-55[NPL4]ButterfieldLH等,CancerRes1999,59(13):3134-42[NPL5]VissersJL等,CancerRes1999,59(21):5554-9[NPL6]vanderBurgSH等.,JImmunol1996,156(9):3308-14[NPL7]TanakaF等,CancerRes1997,57(20):4465-8[NPL8]FujieT等,IntJCancer1999,80(2):169-72[NPL9]KikuchiM等,IntJCancer1999,81(3):459-66[NPL10]OisoM等,IntJCancer1999,81(3):387-94[NPL11]BelliF等,JClinOncol2002,20(20):4169-80[NPL12]CouliePG等,ImmunolRev2002,188:33-42[NPL13]RosenbergSA等,NatMed2004,10(9):909-15[NPL14]O'ConnorTP等,NeuralDev.2009,23(4)18[NPL15]HirotaE.等,IntJOncol.2006,29(4):799-827专利技术简述本专利技术至少部分基于对新肽的发现，其可以作为免疫治疗的适合靶标。因为TAAs通常被免疫系统感知为“自身的”，因此通常没有先天免疫原性，对合适靶标的发现仍然具有重要意义。在本专利技术的过程中，SEMA5B(典型的氨基酸序列示于SEQID75、78或80；典型的核苷酸序列示于SEQID74、76、77或79(GenBankAccessionNo.NM_001031702,NM_001256346,NM_001256347或NM_001256348))被证明特异性的在癌症中过表达，其例子包括但不限于，食管癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、肾细胞癌(RCC)和小细胞肺癌(SCLC)(表1)。因此，本专利技术致力于SEMA5B作为癌症/肿瘤免疫治疗的候选靶标。为了这个目的，本专利技术至少部分要求，在衍生于SEMA5B的肽中对具有对SEMA5B特异的诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)能力的特异性表位肽的鉴定。如下面更详细讨论的，从健康供体获得的外周血单核细胞(PBMCs)使用衍生自SEMA5B的HLA-A*2402结合候选肽刺激。然后建立了具有特异性细胞毒性的CTL系，所述特异性细胞毒性针对用各种候选肽冲激(plusedwith)的HLA-A24阳性靶细胞。本文的结果证明，这些肽是HLA-A24限制性表位肽，其能够诱导针对表达SEMA5B细胞的有效的且特异性的免疫反应。这些结果进一步表明SEMA5B为强免疫原性，并且其表位是癌症/肿瘤免疫治疗的有效靶标。相应的，本专利技术的一个目的是提供分离的肽，其能够结合HLA抗原，并包括衍生于SEMA5B的氨基酸序列(SEQIDNO:75、78或80)。此类肽预期具有CTL诱导能力，因此可以用于体外或离体诱导CTLs，或直接施用于受试者以诱导针对癌症的体内免疫应答，其例子包括但不限于食管癌、NSCLC、RCC和SCLC。本专利技术的肽通常长度少于15、14、13、12、11或10个氨基酸。优选的肽为九肽和十肽，更优选的为具有选自SEQIDNOs:2至69的氨基酸序列的九肽和十肽。在这些中，特别优选具有选自SEQIDNOs:2、3、4、8、9、10、13、20、40、41、47和54的氨基酸序列的肽。本专利技术也考虑修饰的肽，其具有在选自于SEQIDNOs:2至69的氨基酸序列上取代、缺失、插入和/或添加一个、两个或更多个氨基酸的氨基酸序列，如果所得的修饰肽保留了原始未修饰肽必备的CTL诱导能力和HLA结合能力。在一个实施方案本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有细胞毒性T淋巴细胞(CTL)诱导能力的长度少于15个氨基酸的分离的肽，其中所述肽包含以下氨基酸序列(a)或(b)：(a)选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:41、2、3、4、8、9、10、13、20、40、47和54；(b)在选自下组的氨基酸序列中取代、缺失、插入和/或添加了1个、2个或几个氨基酸的氨基酸序列：SEQ ID NO:41、2、3、4、8、9、10、13、20、40、47和54。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种具有细胞毒性T淋巴细胞(CTL)诱导能力的长度少于15个氨基酸的分离的肽，其
中所述肽包含以下氨基酸序列(a)或(b)：
(a)选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:41、2、3、4、8、9、10、13、20、40、47和54；
(b)在选自下组的氨基酸序列中取代、缺失、插入和/或添加了1个、2个或几个氨基酸的
氨基酸序列：SEQIDNO:41、2、3、4、8、9、10、13、20、40、47和54。
2.权利要求1的肽，其中所述肽具有一个或两个以下特性：
(a)从N端起的第二个氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；和
(b)C端氨基酸是苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸。
3.权利要求1或2的肽，其中所述肽是九肽或十肽。
4.一种分离的多核苷酸，其编码权利要求1至3任一项的肽。
5.一种用于诱导CTL的组合物，其中所述组合物包含至少一种选自下组的活性成分：
(a)权利要求1至3任一项的肽；
(b)权利要求4的多核苷酸；
(c)在其表面上呈递权利要求1至3任一项所述的肽的抗原呈递细胞(APC)；和
(d)在其表面上呈递权利要求1至3任一项所述的肽的外来体。
6.一种用于治疗和/或预防癌症，和/或防止其术后复发的药物组合物，其中所述组合
物包含至少一种选自下组的活性成分：
(a)权利要求1至3任一项的肽；
(b)权利要求4的多核苷酸；
(c)在其表面上呈递权利要求1至3任一项所述的肽的APC；
(d)在其表面上呈递权利要求1至3任一项所述肽的外来体；
(e)CTL，其能够识别呈递权利要求1至3任一项所述的肽的细胞。
7.权利要求6的药物组合物，其中所述药物组合物配制用于施用给其HLA抗原为HLA-
A24的受试者。
8.一种用于诱导具有CTL诱导能力的APC的方法，其中所述方法包含选自下组的步骤：
(a)使APC与权利要求1至3中任一项所述的肽接触；和
(b)将编码权利要求1至3中任一项所述肽的多核苷酸引入到APC中。
9.一种用于诱导CTL的方法，其中所述方法包含选自下组的步骤：
(a)共培养CD8阳性T细胞和在其表面上呈递HLA抗原与权利要求1至3中任...

【专利技术属性】
技术研发人员：角田卓也，大泽龙司，吉村祥子，渡边朝久，
申请(专利权)人：肿瘤疗法科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：日本;JP