本发明专利技术公开了一种昆虫病原线虫共生菌菌株，其特征在于，该微生物的分类命名为嗜线虫沙雷氏菌的高毒力菌株R187‑2，2016年5月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC M 2016240。本发明专利技术还公开了一种生物杀虫剂及其制备方法和应用。本发明专利技术提供的一种新型昆虫病原线虫共生菌杀虫菌剂，具有生产使用方便的优点，适用于现代生态农业经济中绿色无公害农产品的生产。本发明专利技术对于保护生态环境，提高农产品的附加值具有重要的意义。试验证明，R187‑2菌株的液体菌剂及固体菌剂的杀虫效果良好，各组的死亡率都在85%以上。昆虫病原线虫共生菌菌株R187‑2的杀虫谱广，有很大的市场开发潜力。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种昆虫病原线虫共生菌菌株，属于生物
，是利用生物防治的方法控制农业昆虫的种群数量，适用于现代生态农业经济中绿色无公害农产品的生产。
技术介绍
据不完全统计，全世界农作物每年因病虫害造成的损失约占其总产量的37％，对病虫害的防治一直是人们提高农作物产量和发展农业生产的途径之一，从无机农药到有机合成农药，化学药剂一度成为控制病虫害的有效手段。但化学农药的广泛使用，带来了一系列的环境问题和食品安全问题；严重影响了人类健康和农产品的出口创汇。倡导绿色消费的绿色无公害的生态农业模式是全球农业发展的必然趋势(农业环境与发展,2012,29:49-52)。绿色无公害农业作为一种符合农业发展方向的生产模式，其基本要求是“优质、高产、高效、生态、安全”，开发绿色农药成为趋势(Nature,2010,466:109-11；植物医生,2012,25(12901):12)。生物农药是实现无公害农业的关键环节之一。昆虫病原线虫(Entomopathogenicnematodes，EPNs)因其侵染期幼虫消化道内携带有使寄主昆虫罹患败血症死亡的共生菌而得名。昆虫病原线虫及其共生菌是发展潜力巨大的一类环境友好型生物防治因子：1)高效，昆虫病原线虫侵入寄主血腔后在48h内杀死寄主；2)昆虫不易产生抗性，抗虫机制复杂，共生菌为已知基因组序列的细菌中含有杀虫毒素基因最多的一类细菌(Nature,2013,495:520-523；.NatureBiotechnology.2003,21:1307-1313；Science.1998,280:2129-2132.)；3)环境友好型生态农药，对人畜、植物及有益生物安全，一些品系能显著提高昆虫Bt抗性的适合度代价、延缓靶标害虫对转Bt植物表达毒素的抗性(JEconEntomol.2010,103:1821-1831)；4)抗逆性强，耐盐、可与化学农药混合施用，土壤农药残留不影响其施用(环境昆虫学报,2013,04:458-465；Internationaljournalforparasitology.2016,46:83-95；Nematology,201113:859-867；PNAS.2012,109:E2324-33)；5)对土壤、钻蛀类和隐蔽性害虫的防治有特效，昆虫病原线虫通过嗅觉主动搜索寄主(PNAS.2012,109:E2324-33)。目前，昆虫病原线虫及其共生菌得到了非常广泛的开发和生物防治应用，在欧美国家可以豁免注册生产和释放，世界上该类杀虫剂的年销售额约为160亿美元，并每年以2～3％增长。在昆虫病原线虫-共生菌这类共生体中起主要杀虫作用的是存在于线虫肠道内与其共生的共生菌，共生菌被抑制或去除昆虫病原线虫就会完全或部分失去致病性(JInvertebrPathol.2008,98:153-168；JournalofAppliedEntomology.2014,138(9):644-655；2013,495(7442):520-523)。嗜线虫沙雷氏菌(Serratianematodiphila)是本课题组发现的昆虫病原线虫共生菌新种(IntJSystEvol.Microbiol.2009,59:1603-1608.)，R187-2菌株是其中的杀虫高毒力菌株。
技术实现思路
专利技术目的：针对现有技术问题，本专利技术的目的在于针对当前现代生态农业经济中绿色无公害农产品的生产的实际问题和需求，开发研制出一种新型绿色无公害微生物杀虫菌剂；使用该菌剂可有效控制地下害虫蛴螬、蜂巢害虫大蜡螟和桃蚜的危害，杀虫率在85％以上，具有广阔的开发利用前景。本专利技术的第二个目的是提供了上述的昆虫病原线虫共生菌菌株在制备生物杀虫菌剂中的应用。本专利技术的第三个目的是提供了一种生物杀虫剂及其制备方法。技术方案：为了解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案为：一种昆虫病原线虫共生菌菌株，该微生物的分类命名为嗜线虫沙雷氏菌(SerratianematodiphilaR187-2)的高毒力菌株R187-2，2016年5月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCCM2016240；地址：湖北省武汉市武昌区武汉大学保藏中心(武汉大学第一附属小学对面)，邮编：430072。该菌株的主要生物学特性：革兰氏染色反应阴性菌菌株G-，菌体短杆状，大小约1.05×0.65μm，具有1根鞭毛；好氧；有酪蛋白水解酶活性；不能水解淀粉、纤维素、糖原、明胶和密二糖；无脲酶，精氨酸二水解酶活性；有β-半乳糖苷酶，鸟氨酸脱羧酶，和DNA酶活性；有α-甲基-D-糖甙酶苯丙氨酸脱羧酶，赖氨酸脱羧酶活性；可以还原硝酸盐；可从D-麦芽糖、D-果糖、D-葡萄糖、蔗糖、水杨苷、L-岩藻糖、D-核糖、D-山梨醇、木糖醇、D-甘露糖、肌醇、D-甘露醇和D-半乳糖产生酸；但不能从D-乳糖、淀粉、二阿拉伯糖、D-鼠李糖、L-山梨糖、L-棉子糖、L-阿糖醇、纤维二糖、D-松三糖、D-蜜二糖产生酸；不能利用苯丙氨酸和苏氨酸。上述的昆虫病原线虫共生菌菌株在制备生物杀虫菌剂中的应用。一种生物杀虫剂，其含有所述的昆虫病原线虫共生菌菌株。使用上述昆虫病原线虫共生菌杀虫菌剂的生产工艺为：甘油菌原种→试管种→摇瓶种→种子罐→生产罐→产品(菌体菌剂或泥炭吸附固体菌剂)。上述的生物杀虫剂的制备方法，包括以下步骤：1)用接种针取R187-2原种，在NBTA固体培养基上划线培养24小时；2)挑取单菌落划线保存于LB培养基斜面试管；3)将试管种接种于Luria-Bertani培养基的摇瓶中震荡培养至对数期；4)取3)培养的菌种接种于种子罐的培养基中培养至对数期得到种子液；5)将4)得到的种子液接入相同培养基的生产罐中培养；6)在菌株接入种子罐和生产罐培养的过程中通入无菌空气发酵，生产罐发酵完成后培养液直接分装成液体剂型或者用泥炭吸附分装成固体剂型。其中，上述步骤4)和步骤5)中的培养基配方为萄糖0.6-0.8％、酵母膏0.03-0.3％、氯化钠0.2-0.4％、FeCl30.001％、pH值7.2～7.5。其中，上述步骤4)和步骤5)中的接种量为8～11％。其中，上述步骤6)中的通气量为1.0:0.6～1.0。其中，上述搅拌速度为180-220r.p.m.，培养温度为28-35℃，全流程培养时间为60-72h。其中，上述NBTA培养基为牛肉浸膏0.5％，牛肉蛋白胨1％，琼脂2％，红氮四唑0.0025％，溴汾蓝0.004％，pH7.2～7.5。上述的一种生物杀虫剂在昆虫病原线虫杀灭方面的应用。有益效果：本专利技术与现有技术相比，其优点和积极效果表现在：本专利技术提供一种新型昆虫病原线虫共生菌杀虫菌剂，具有生产使用方便的优点，适用于现代生态农业经济中绿色无公害农产品的生产。本专利技术对于保护生态环境，保护人民的身体健康，提高农产品的附加值具有重要的意义。试验证明，R187-2菌株的液体菌剂及固体菌剂的杀虫效果良好，各组的死亡率都在85％以上(表1-3)。昆虫病原线本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种昆虫病原线虫共生菌菌株，其特征在于，该微生物的分类命名为嗜线虫沙雷氏菌(Serratia nematodiphila R187‑2)的高毒力菌株R187‑2，2016年5月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC NO:M 2016240。
【技术特征摘要】
1.一种昆虫病原线虫共生菌菌株，其特征在于，该微生物的分类命名为嗜线虫沙雷氏菌(SerratianematodiphilaR187-2)的高毒力菌株R187-2，2016年5月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCCNO:M2016240。
2.权利要求1所述的昆虫病原线虫共生菌菌株在制备生物杀虫菌剂中的应用。
3.一种生物杀虫剂，其特征在于，其含有权利要求1所述的昆虫病原线虫共生菌菌株。
4.权利要求3所述的生物杀虫剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)用接种针取R187-2菌种，在NBTA培养基上划线培养24小时；
2)挑取单菌落划线保存于LB培养基斜面试管；
3)将试管种接种于LB培养基的摇瓶中震荡培养至对数期；
4)取3)培养的菌种接种于种子罐的培养基中培养至对数期得到种子液；
5)将4)得到的种子液接入相同培养基的生产罐中培养；
【专利技术属性】
技术研发人员：张克云，徐漫，柳李旺，詹成修，林建，严秀文，莫国香，舒自美，徐良，
申请(专利权)人：南京农业大学，南京莱福佳农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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