一种快速修复损伤DNA的试剂、及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种快速修复损伤DNA的试剂、及其制备方法与应用。所述快速修复损伤DNA的试剂包含10×NEB缓冲液2、寡核苷酸、三磷酸碱基脱氧核苷酸、大肠杆菌DNA聚合酶I和T4 DNA连接酶。所述快速修复损伤DNA试剂的制备方法包括：将10×NEB缓冲液2、寡核苷酸、三磷酸碱基脱氧核苷酸、大肠杆菌DNA聚合酶I和T4 DNA连接酶混合，之后用超纯水定容。本发明专利技术提供的快速修复损伤DNA的试剂能大大提高DNA的修复成功率，而使用本发明专利技术的快速修复损伤DNA的试剂及方法，与市面上的修复试剂盒相比，将成本降低50％，将操作时间由1.5小时以上缩短至40分钟以内，与常规DNA修复方法相比，修复率提高2倍以上，并且操作时间由5小时以上缩短至40分钟以内。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学
，更具体地，涉及用于DNA
，特别是指一种快速修复损伤DNA的试剂、及其制备方法与应用。
技术介绍
DNA是人类遗传的物质基础，为了弄清DNA在人类遗传和发育过程中的功能和结构，DNA序列的检测成为了研究DNA最重要的手段。1977年Sanger专利技术了具有里程碑意义的末端终止测序法，同年A.M.Maxam和W.Gilbert专利技术了化学降解法。Sanger法因为既简便又快速，并经过后续的不断改良，成为了第一代DNA测序的主流。随着科学技术的不断革新，第一代DNA测序技术(Sanger)已无法满足测序的需求，1990年，美国正式启动跨世纪的\人类基因组计划\，计划历时15年，斥资30亿美元，破译人类自身遗传秘密，人类步入了后基因组时代。随着对DNA信息的海量需求，二代测序诞生了，该技术基于一项边合成边测序技术，代表公司有Roche(454)，Illumina(Solexa)，ABI(SOLID)。二代测序技术最基本的技术就是二代测序文库的构建，文库构建起始首先将待测样本的基因组DNA进行破碎和片段化，主要手段有剪切力，超声波，氮气，酶切等，在获得片段化DNA之后，为了方便加上不对称的测序接头，必须先将片段化DNA做末端补平和尾端加单个腺嘌呤，经典文库构建流程中末端补平和尾部加腺嘌呤的步骤是独立完成的。随着二代测序技术的飞速发展，该技术也被广泛用于遗传性突变，疾病发病机理，遗传机理等多种医学，遗传学等医疗领域。在医疗领域中，科研人员需从各种不同的组织标本中提取DNA，但新鲜组织标本来源有限，所以通常临床样本都采用石蜡包埋方式处理组织，导致获得的DNA都会产生于RNA及蛋白质的交联反应，并且产生很多氧化及切断损伤，而DNA质量往往是文库构建成功的一个关键影响因素，所以损伤的DNA进行文库构建一般会导致失败，因此福尔马林处理导致的DNA损伤成为了影响二代测序技术应用于临床样本处理的关键制约因素之一，因此将损伤的DNA进行修复也就成为了迫在眉睫的需要解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的主要目的就是针对以上现状，解决限制二代测序技术在临床样本处理上的关键问题，提供一种快速修复损伤DNA的试剂、及其制备方法与应用，该试剂成分简单，制备操作方便，成本低廉，不需特殊设备，并能显著提高修复成功率和降低成本消耗。为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：本专利技术实施例提供了一种快速修复损伤DNA的试剂，其包含10×NEB缓冲液2、寡核苷酸、三磷酸碱基脱氧核苷酸、大肠杆菌DNA聚合酶I和T4DNA连接酶。在一些实施方案之中，所述的快速修复损伤DNA的试剂，其包含：10×NEB缓冲液2 5-25体积份，浓度为10mM的寡核苷酸溶液 1-5体积份，浓度为100mM的三磷酸碱基脱氧核苷酸溶液 0.5-2.5体积份，大肠杆菌DNA聚合酶I溶液 2-5体积份，T4DNA连接酶溶液 2.5-7.5体积份。在一些较为优选的实施方案之中，所述的快速修复损伤DNA的试剂包含：10×NEB缓冲液2 10体积份，浓度为10mM的寡核苷酸溶液 2.5体积份，浓度为100mM的三磷酸碱基脱氧核苷酸溶液 1.5体积份，大肠杆菌DNA聚合酶I溶液 3体积份，T4DNA连接酶溶液 5体积份。在一些实施方案之中，所述的快速修复损伤DNA的试剂包含：10×NEB缓冲液2 5-25体积份，浓度为10mM的寡核苷酸溶液 1-5体积份，浓度为100mM的三磷酸碱基脱氧核苷酸溶液 0.5-2.5体积份，大肠杆菌DNA聚合酶I溶液 2-5体积份，T4DNA连接酶溶液 2.5-7.5体积份，超纯水 47-77体积份。在一些较为优选的实施方案之中，所述的快速修复损伤DNA的试剂包含：10×NEB缓冲液2 10体积份，浓度为10mM的寡核苷酸溶液 2.5体积份，浓度为100mM的三磷酸碱基脱氧核苷酸溶液 1.5体积份，大肠杆菌DNA聚合酶I溶液 3体积份，T4DNA连接酶溶液 5体积份，超纯水 68体积份。本专利技术实施例还提供了一种所述快速修复损伤DNA试剂的制备方法，其包括：先将10×NEB缓冲液2、寡核苷酸、三磷酸碱基脱氧核苷酸、大肠杆菌DNA聚合酶I和T4DNA连接酶混合，之后用超纯水定容。在一些较为具体的实施方案中，所述制备方法包括：先将10×NEB缓冲液2、寡核苷酸、三磷酸碱基脱氧核苷酸、大肠杆菌DNA聚合酶I和T4DNA连接酶混合，之后用超纯水定容。本专利技术实施例还提供了一种快速修复损伤DNA的方法，包括：将损伤的DNA和前述的任一种快速修复损伤DNA的试剂混合均匀，之后进行PCR扩增。较为优选的，所述PCR扩增的条件包括：温度为37℃-42℃，时间为3-10min。尤为优选的，所述PCR扩增的条件包括：温度为37℃，时间为3min。较为优选的，所述损伤的DNA与所述的快速修复损伤DNA的试剂的用量比为100ng：90微升。本专利技术实施例还提供了所述的快速修复损伤DNA的试剂于构建基因文库中的应用。本专利技术实施例还提供了一种快速修复损伤DNA的试剂盒，其包括前述的任一种快速修复损伤DNA的试剂。本专利技术实施例还提供了所述快速修复损伤DNA的试剂盒于构建基因文库中的应用。与现有技术相比，本专利技术的优点包括：(1)本专利技术提供的一种快速修复损伤DNA的试剂能够大大提高DNA修复成功率，且使用本专利技术快速修复损伤DNA的方法，与市面上的修复试剂盒相比，将成本降低50％，作时间由1.5小时缩短至40分钟，与常规DNA修复方法相比，修复率提高2倍，并且操作时间由5小时缩短至40分钟。(2)本专利技术提供的快速修复损伤DNA试剂的制备方法的原料廉价易得，有利于推广应用；且配置本专利技术的快速修复损伤DNA试剂只需将上述原料溶于超纯水，制备简单、难度低，无需专门技术培训及特殊仪器设备。附图说明图1是本专利技术中实施例与对照组的修复合格率与实验耗时的示意图；图2是本专利技术中实施例与对照组的成本消耗示意图。具体实施方式下文将对本专利技术的技术方案作更为详尽的解释说明。但是，应当理解，在本专利技术范围内，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。在对实例描述前，有必要提供一些备注说明：采用不同厂家、不同批次的试剂会造成实验结果的差异，属于正常现象。在进行小规模实验室，为保证平行实验间的重复性，建议配置试剂后，充分混匀并分装，以保证每次实验试剂的均一性。本专利技术公开了一种快速修复损伤DNA的试剂，其包含10×NEB缓冲液2、寡核苷酸、三磷酸碱基脱氧核苷酸、大肠杆菌DNA聚合酶I和T4DNA连接酶。在一些实施方案之中所述的快速修复损伤DNA的试剂，其包含：10×NEB缓冲液2 5-25体积份，浓度为10mM的寡核苷酸溶液 1-5体积份，浓度为100mM的三磷酸碱基脱氧核苷酸溶液 0.5-2.5体积份，大肠杆菌DNA聚合酶I溶液 2-5体积份，T4DNA连接酶溶液 2.5-7.5体积份。在一些较为优选的实施方案之中，所述的快速修复损伤DNA的试剂包含：10×NEB缓冲液2 10体积份，浓度为10mM的寡核苷酸溶液 2.5体积份，浓度为100mM的三磷酸碱基脱氧核苷酸溶液 1.5体积份，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速修复损伤DNA的试剂，其特征在于包含10×NEB缓冲液2、寡核苷酸、三磷酸碱基脱氧核苷酸、大肠杆菌DNA聚合酶I和T4DNA连接酶。

【技术特征摘要】
1.一种快速修复损伤DNA的试剂，其特征在于包含10×NEB缓冲液2、寡核苷酸、三磷酸碱基脱氧核苷酸、大肠杆菌DNA聚合酶I和T4DNA连接酶。2.根据权利要求1所述的快速修复损伤DNA的试剂，其特征在于包含：10×NEB缓冲液2 5-25体积份，浓度为10mM的寡核苷酸溶液 1-5体积份，浓度为100mM的三磷酸碱基脱氧核苷酸溶液 0.5-2.5体积份，大肠杆菌DNA聚合酶I溶液 2-5体积份，T4DNA连接酶溶液 2.5-7.5体积份，其余部分包括超纯水。3.根据权利要求2所述的快速修复损伤DNA的试剂，其特征在于包含：10×NEB缓冲液2 5-25体积份，浓度为10mM的寡核苷酸溶液 1-5体积份，浓度为100mM的三磷酸碱基脱氧核苷酸溶液 0.5-2.5体积份，大肠杆菌DNA聚合酶I溶液 2-5体积份，T4DNA连接酶溶液 2.5-7.5体积份，超纯水 47-77体积份。4.根据权利要求3所述的快速修复损伤DNA的试剂，其特征在于包含：10×NEB缓冲液2 10体积份，浓度为10mM的寡核苷酸溶液 2.5体积份，浓度为100mM的三...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏冬凯，吴洁，
申请(专利权)人：苏州贝斯派生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32