一种治疗结肠癌的药物制造技术

本发明专利技术涉及一种药物，具体涉及一种用川芎乙醇提取物制成的药物。川芎乙醇提取物是将川芎粉碎成粉末状后加入乙醇回流提取，冷冻干燥后粉碎所得的粉末状固体。本发明专利技术的作用是：所得药物能够治疗结肠癌。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体的涉及一种用于治疗结肠癌的药物，更具体涉及一种用川芎乙醇提取物制成的药物。
技术介绍
结肠癌（colon cancer）是临床上常见的一种恶性消化系统肿瘤。在我国战国时期就已经有关于结肠癌的记载。近年来，结肠癌的发病率和致死率在全球范围均呈上升趋势。因此，结肠癌的治疗在医学研究中非常重要。恶性肿瘤由于病因复杂和有侵袭性等原因，因此一旦被确诊，通常会很难彻底清除。但是，肿瘤不是在短期形成的，在肿瘤形成这一漫长过程中，利用药物进行有关干预是可行的。因此，寻找纯天然中草药植物阻止有癌变风险的细胞进一步发展成癌细胞，可以使很多高危人群远离癌症。结肠癌的治疗手段主要有手术治疗、放射治疗、化学治疗、生物治疗及中医药治疗等，但手术治疗及放化疗所引发的副作用是不容忽视的。中医认为结肠癌是由机体正气不足、湿毒内结凝滞而致病，因此，在纯天然中草药植物中寻找有效且副作用小的抗肿瘤药物的相关研究，已成为国内外十分重要且有前景的课题。川芎是中医治疗中常用的活血化瘀药物。在《中国药典》（2010年版）的记载中，已有151个成方制剂中把川芎作为药材之一，占所载录的1640个中成药总数的9.21%。中药川芎来源于伞形科藁本属植物川芎（Ligusticum chuanxiong Hort）的干燥根茎，主要产于四川、贵州、云南等地，其中以四川产者质优，为四川的道地药材。在夏季时，当川芎植株茎上的节盘突出显著，并略带紫色时采挖，之后经除去泥沙，晒后烘干，去须根等工序，即得到川芎药材。再经洗净、润透、切片、干燥，可以得到中药饮片。中医认为川芎其味辛微苦、药性温和，归于肝、胆、心包经。川芎活血化瘀、开郁行气、疏风止痛，可治疗月经不调、经闭痛经、胸胁疼痛、头痛眩晕、跌打损伤等症。川芎有效成分的提取方法主要有传统提取法、溶剂提取法和超临界萃取法等。传统提取法主要有水煎法、回馏法、蒸馏法、渗漉法等，其操作简便，对工艺、设备的要求不高，但它们存在提取时间长、耗能大、含杂质多等缺点。超临界萃取等现代提取和分离技术虽然提取物的纯度高、环保节能，但是由于超临界萃取使用的是新技术新设备，目前局限性也比较大，还难以应用于川芎有效成分的工业化大规模生产。经检索发现，乙醇和乙醚是川芎提取有效成分的的常用溶剂，而乙醇因对有效成分的提取较完全而更为常用，是效果较佳的溶剂。因此本专利技术采取的提取川芎有效成分的方法为乙醇提取法（以下简称醇提法）。川芎主要的化学成分有阿魏酸、川芎嗪、蒿本内酯、川芎内酯等。其主要的活性成分为阿魏酸和川芎嗪；主要的挥发油类物质为蒿本内酯、川芎内酯、川芎酚等；主要的酸性成分为阿魏酸、大黄酚、瑟丹酸等；主要的生物碱类为川芎嗪、黑麦草碱、L-β-丙烯酸乙酯-7-醛基-β咔啉等。据有关研究发现，川芎具有一定的抗氧化作用。其中，生物碱类和酚酸类是活血祛瘀的主要活性成分；阿魏酸能抑制血小板的聚集，促进血小板的解聚和抗血栓的形成，解除血管平滑肌的痉挛，抗氧化等。国内外学者在川芎的栽培、加工炮制、化学成分、药理作用以及临床应用等方面进行了相当广泛的研究。体外细胞培养在生物工程研究中占有着不可动摇的地位，可作为代替模型用于药理和环境毒理学的研究。体外研究的优点在于可以减少实验动物的用量、节约实验时间、排除体内其他因素的干扰，同时也可进行多种药物的药理试验。实验室常用来做研究的结肠癌细胞系有HCT116，HCT8，HT29，LS174T，LOVO，SW480，SW620等。徐修礼等研究发现川芎素能够在一定程度上抑制moser大肠癌细胞的增殖、诱导肿瘤细胞凋亡，并且具有可以增强化疗药物作用的功能。韩娇艳研究发现使用不同浓度的盐酸川芎嗪刺激人前列腺癌PC-3细胞与人结肠直肠癌HCT-116 细胞后，发现PC-3细胞与HCT-116细胞增殖明显受到抑制（p<0.05）。房良华研究发现主要成分为川芎内酯，毛蕊异黄酮葡萄糖苷，芒柄花苷洋，毛蕊异黄酮，芒柄花黄素，黄芪甲苷，藁本内酯等的透脓散提取液可抑制人结肠癌LOVO细胞的增殖，诱导细胞凋亡，阻滞细胞停滞在G1期。但暂未发现使用川芎对HT29结肠癌细胞做相关研究的报道。根据川芎活血化瘀、开郁行气、疏风止痛的特征，本专利技术以HT29结肠癌细胞系作为模型，使用不同浓度的川芎醇提物培养HT29细胞进行实验，通过细胞增殖实验、细胞凋亡、细胞迁移等相关实验。结果表明，不使用药物时，HT29结肠癌的细胞存活率为93.59%，凋亡率为1.03%，用200μg/mL川芎醇提物作用于HT29结肠癌的效果是细胞存活率为63.42%，凋亡率为13.27%，结肠癌细胞的迁移能力显著降低，则这种药物组合效果显著，从而验证其有抑制结肠癌的效果。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种药物。本专利技术中的药物为川芎醇提物。作为优选，所述川芎醇提物为将川芎粉碎成粉末状后加入乙醇回流提取，冷冻干燥后粉碎所得的粉末状固体，其终浓度为200μg/mL。本专利技术中的药物可制备用于治疗肿瘤的药物。本专利技术所述的肿瘤为结肠癌。本专利技术的有益效果在于：(1) 获得的药物可抑制结肠癌细胞的增殖、促进其凋亡、抑制其转移；(2) 采用该方法安全可控，并且便于操作、保管、贮存和运输。具体实施方式：为使本领域技术人员详细了解本专利技术的生产工艺和技术效果，下面以具体的生产实例来进一步介绍本专利技术的应用和技术效果。实施例1 川芎提取物的制备首先称取适量川芎药材并将其粉碎成粉末状，然后加入药材重量10倍量的80%乙醇，加热回流提取2次，每次30分钟，合并提取液后，经过200目筛网过滤并且蒸馏浓缩得到膏体，再经冷冻干燥后粉碎即得川芎乙醇提取物。实施例2 不同浓度川芎醇提物孵育HT29结肠癌细胞将HT29结肠癌细胞解冻复苏后加入含有15%胎牛血清（FCS）的DMEM培养基制成细胞悬液，分种于培养瓶中并置于5% CO2，饱和湿度，37℃培养箱中培养。正常培养时约每天更换1次培养液，等到细胞生长融合度达到70%-80%时进行传代培养；传代培养时首先弃去培养瓶中的旧培养液，加入37℃ 磷酸缓冲盐溶液(PBS)洗瓶2次，在25cm2培养瓶中加入2mL约0.25%的胰蛋白酶进行消化。然后在倒置显微镜下仔细随时观察，当发现细胞质回缩、细胞间隙变大时终止消化。接下来弃去胰酶溶液，加入含15%血清的DMEM培养基，之后用吸管轻柔吹打使贴壁细胞悬浮。紧接着将含悬浮细胞的培养液转移至10mL离心管中，1500r离心5min，弃上清液。将细胞重新悬浮于5mL含15%血清的完全培养基中。细胞计数结束，选择合适浓度将细胞分装到新的无菌培养瓶进行培养，6h后可见细胞贴壁，以后每2-3天换液次，待细胞长滿瓶底70%-80%后再次消化传代。取4-6代的生长良好，融合度约为60%-70%的细胞进行细胞实验。呈亚融合状态的细胞，轻柔吹打配成单细胞悬液并接种于96孔培养板，24孔培养板以及Tranwell小室铺板，具体分组情况如下：①空白对照组空白对照组：用无血清DMEM培养液孵育细胞24 h；②处理组（共设3组）：每组加入不同终浓度（100，200，300μg/mL）的川芎醇提物孵育细胞24 h。实施例3 MTT方法检测川芎醇提物对HT29结肠癌细胞增殖活性的作用MTT分析法是一种检测细胞存活本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种药物，其特征在于：所述药物为川芎乙醇提取物。

【技术特征摘要】
1.一种药物，其特征在于：所述药物为川芎乙醇提取物。2.根据权利要求1所述的药物，其特征在于：所述川芎乙醇提取物为将川芎粉碎成粉末状后加入乙醇回流提取，冷冻干燥后粉碎所得的粉末状固...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔晶，周亚楠，钱国庆，许璐，
申请(专利权)人：淮阴工学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32