葡萄籽中原花青素的新用途制造技术

本发明专利技术公开了一种葡萄籽中原花青素的新用途，原花青素作为制备辐射增敏剂的用途。本发明专利技术为葡萄籽中原花青素的应用提供了可能性，为新型辐射增敏剂的开发提供了新的途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种天然产物提取物的用途，特别涉及一种葡萄籽中原花青素的新用途。
技术介绍
原花青素广泛存在于多种植物中，而葡萄籽是原花青素丰富的来源。葡萄籽原花青素(GSPs)具有广泛的用途，比如抗氧化、清除自由基、紫外辐射保护等，而关于其具备的抗肿瘤作用少有报道。少量报道称GSPs可引起细胞凋亡，影响癌细胞的浸润和转移，抑制一些酶的表达、对丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)家族具有抑制作用(参见文献：(1)PLoS One 2011,e21539.(2)Frontiers in Bioscience-landmark 2008,13,887–897.(3)Mol.Cancer Ther.2010,9,569–580.(4)Carcinogenesis 2006,27,1682–1691.(5)Neoplasia 2005,7,24–36.(6)Clinical Cancer Research 2009,15,821–831.(7)Molecular Carcinogenesis 2009,48,232–42.)，而对其具有的针对肺癌细胞的辐射增敏效应没有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种葡萄籽中原花青素的新用途，以拓宽GSPs的应用范围，为GSPs的应用提供更多的可能性。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种葡萄籽中原花青素的新用途，原花青素作为制备辐射增敏剂的用途。作为优选，原花青素作为制备针对人类非小细胞肺癌细胞A549的辐射增敏剂的用途。作为优选，所述针对人类非小细胞肺癌细胞A549的辐射增敏剂中原花青素浓度<30μg/mL。作为优选，所述针对人类非小细胞肺癌细胞A549的辐射增敏剂中原花青素浓度为12μg/mL。专利技术人意外发现GSPs对人类非小细胞肺癌细胞A549具有辐射增敏作用，尤其是在特定的浓度12μg/mL以及特定辐射剂量1Gy下，这为新型辐射增敏剂的开发提供了新的途径。现有技术报道了GSPs对小鼠正常组织或者人类皮肤细胞具有紫外辐射或者γ-辐射保护作用，对癌细胞具有抑制增殖作用，本专利技术则提供了GSPs对人类非小细胞肺癌细胞A549的辐射增敏作用，将GSPs运用于临床既具有潜在的保护正常组织的作用又能增强X射线对肺癌细胞的杀伤作用，既能降低病人的痛苦又能提高治疗效率。本专利技术为新型辐射增敏剂的开发提供了新的途径。该辐射增敏剂是一种新型植物源辐射增敏剂，它由GSPs为活性成分制备而成。本专利技术的有益效果是：提供了葡萄籽原花青素的新用途，拓宽了葡萄籽原花青素的应用范围，为葡萄籽原花青素的应用提供更多的可能性。附图说明图1是原花青素标准曲线(平均值±标准差，n＝3)。图2是GSPs清除自由基能力(平均值±标准差，n＝2)。图3是GSPs对A549、BEAS-2B细胞增殖的影响(平均值±标准差，n＝3)。图4辐射剂量为2Gy条件下GSPs对A549细胞存活数的影响(平均值±标准差，n＝3)。图5辐射剂量为2Gy条件下GSPs对A549细胞存活率的影响(平均值±标准差，n＝3)。图6是不同的剂量条件下GSPs对A549增殖的影响(平均值±标准差，n＝3)。具体实施方式下面通过具体实施例，对本专利技术的技术方案作进一步的具体说明。本专利技术中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。实施例：本专利技术所用的GSPs从葡萄籽中提取的，纯度为73.3％，其提取及纯度测定过程如下：提取过程:称取500g葡萄籽并研碎，以料液比1:10加入5L乙醇40℃超声提取2h，将过滤后的溶液减压浓缩得到葡萄籽粗提物58.4g。随后进行大孔树脂柱层析，以EtOH-H2O为洗脱剂，收集50％部分并减压浓缩即得原花青素粗样5.3g。纯度检测：配制不同浓度的原花青素标准溶液，测定各个浓度在546nm下的紫外吸光度，并绘制标准曲线，见图1。测定葡萄籽提取物的吸光度，根据标准曲线计算葡萄籽原花青素的含量为73.3％，见表1。表1是从葡萄籽中提取的原花青素的吸光度以及计算浓度(平均值±标准差，n＝3)。表1 原花青素样品中原花青素的含量cx(mg/mL)。GSPs对X射线的辐射增敏活性测定1.供试细胞：人类非小细胞肺癌细胞(A549)、SV40永生化的人支气管上皮细胞(BEAS-2B)为中国科学院近代物理研究所空间辐射生物实验室提供，X射线照射采用Faxitron RX-650型X-ray生物辐照系统。2.试验方法：2.1GSPs清除自由基实验2.1.1DPPH自由基清除实验取1mgDPPH溶于20mL无水乙醇中，充分溶解后测定吸光度，取1mL该溶液测定519nm下的吸光度，使其值在1.2-1.3之间，避光保存。A0的测量：吸取500μLDPPH工作液加入1.5mL EP管中，然后加入500μL无水乙醇，充分混匀后静置30min测定519nm下的吸光度。A1的测量：吸取500μLDPPH工作液加入1.5mL EP管中，然后加入不同浓度的无水乙醇配制的GSPs溶液，充分混匀后静置30min测定519nm下的吸光度。2.1.2ABTS自由基清除实验7.4mM的ABTS0.2mL与2.6mM的K2S2O80.2mL充分混合后在暗处室温反应12h，然后用无水乙醇稀释40-50倍，使混合液在734nm处的吸光度在0.68-0.72之间即为ABTS+工作液。A0的测量：吸取500μL ABTS+工作液加入1.5mL EP管中，然后加入500μL无水乙醇，充分混匀后静置30min测定734nm下的吸光度。A1的测量：吸取500μLABTS+工作液加入1.5mL EP管中，然后加入不同浓度的无水乙醇配制的GSPs溶液，充分混匀后静置30min测定734nm下的吸光度。2.2MTT法检测GSPs对细胞增殖的影响取对数生长期的细胞，调整细胞密度后接种于96孔无菌培养板中，每孔5×103个细胞，培养24h后，分别加入含有不同浓度(18.8，37.5，75，150，300μg/mL)的GSPs的RPMI1640培养基至100μL，不加药物组作为对照。每个浓度设5个平行孔(重复2次)，培养24h后每孔加入终浓度为5mg/ml的MTT溶液10μL，37℃避光作用4h，弃上清液，加入150μL DMSO，振荡10min至结晶紫完全溶解后上机检测。酶标检测仪570nm波长检测吸光度(OD)。计算细胞生长抑制率[细胞抑制率(％)＝(1-实验组OD值/空白组OD值)×100％]。最后以抑制率为纵坐标，以药物浓度(μg/mL)为横坐标，绘制生长曲线。2.3细胞计数法检测GSPs作用后细胞对X射线的辐射敏感性取对数生长期的细胞，调整细胞密度后接种于35mm的无菌培养皿中，培养24h后，分别加入给予不同的处理：1、加入含有不同浓度(0，10，30，120μg/mL)的GSPs的RPMI1640培养基后给予0Gy或者2Gy的辐照。2、加入12μg/mL的GSPs后给予0Gy，1Gy，2Gy，4Gy，6Gy的X射线辐照。GSPs作用24h后，更换新鲜培养基，然后给予辐照处理。每组实验设置三个平行。继续培本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种葡萄籽中原花青素的新用途，其特征在于：原花青素作为制备辐射增敏剂的用途。

【技术特征摘要】
1.一种葡萄籽中原花青素的新用途，其特征在于：原花青素作为制备辐射增敏剂的用途。2.根据权利要求1所述的葡萄籽中原花青素的新用途，其特征在于：原花青素作为制备针对人类非小细胞肺癌细胞A549的辐射增敏剂的用途。3.根据权利要求2所述的葡萄籽中原花青素的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李亚，高坤，孙萌，焦兴志，魏文君，
申请(专利权)人：兰州大学，
类型：发明
国别省市：甘肃;62