一种化橘红的组培快繁方法技术

本发明专利技术属于植物组培技术领域，具体涉及一种化橘红的组培快繁方法，包括外植体的建立、启动培养、继代培养、生根培养、炼苗和移栽等步骤，本发明专利技术针对化橘红这一品种进行研究，于不同阶段采用了最适合的培养基组成，繁殖系数高，生根率高，该方法操作简便，成本低，能有效、方便的在短时间内获得大量化橘红组培苗，而且所获得的组培苗成活率高，苗木能够保持优树的优良遗传性状，采用本发明专利技术的化橘红的组培快繁方法可以获得大量整齐一致，遗传性状稳定的再生植株，试验结果稳定，重复性良好，可应用于大规模商品化育苗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物组培
，具体涉及一种化橘红的组培快繁方法。
技术介绍
“化橘红”是广东省化州市的地理标志产品。2006年12月，国家质检总局批准对化橘红实施地理标志产品保护。化橘红，【别名】化皮、化州橘红、柚皮橘红、柚类橘红、兴化红、毛柑、毛化红、赖橘红，为芸香科植物化州柚Citus grandis Tomentosa或 Citrus grandis （L.）Osbecd的未成熟或近成熟的干燥外层果皮。【性状】药材呈对折的七角或展开的五角星状，单片呈柳叶形。完整者展开后直径15～28cm，厚0.2～0.5cm。外表面黄绿色至黄棕色，有皱纹及小油室；内表面黄白色或淡黄棕色，有脉络纹。质脆，易折断。气芳香，味苦、微辛。【功能主治】散寒，燥湿，利气，消痰。用于风寒咳嗽，喉痒痰多，食积伤酒，呕恶痞闷。化橘红的药用价值：1、【化痰止咳、风寒咳嗽】橘红首要功效，无论寒咳或干咳，服用橘红均可见效，咳嗽分为热咳和寒咳两种：热咳，是由肺热造成的反复咳嗽，例如过量食用上火食品，如煎炸、烧烤类等食品，表现为喉咙干痒、干咳少痰或痰色黄质黏稠；寒咳，多由受寒引起，表现为咽痒咳频，痰液稀薄如泡沫状。2、【久咳、气管炎、哮喘】中老年人长年久咳或哮喘服用橘红为首选。对久咳、哮喘者必须坚持服用并逐渐适应方可起效。一般建议使用2-3个月以上。3、【食积伤酒、化普理气】抽烟喝酒人士之佳品，烟酒对肺胃肝及喉咙损伤最大，同时居住在城市汽车及工业废气居多，长久吸入过量后容易导致习惯性呼吸道感染发炎。常服用化橘红便能减轻酒精及废气对这些人体器官的损害。4、【呕吐呃逆、饮食积滞】经常饭局应酬等人士应常服用化橘红，化橘红对肠胃的消滞有良好功效，饭后服用可令缓解胃中消化压力。在实际栽培中，化橘红大多采用嫁接和圈枝的方法进行繁育，但是采取嫁接苗的方式会受到受砧木资源的限制，采用嫁接的方法繁育繁殖率很低，生长速度慢，弱病苗比例高，费工费时，成苗率较低，且易侵染各种植物病毒，难以大规模的发展苗木，也不能进行周年生产，远远不能满足市场的大量需求。因而影响了其大面积的推广。圈枝方法虽然生长快，结果快，但是因为其没有主根，导致病虫害多，扩台风能力差，树的寿命短，非常不给力。在此形势下，采用化橘红组织培养技术则成了快速培育良种苗木的有效途径。组织培养（Tissue Culture）是在无菌条件下，分离并在培养基中培养离体植物组织的技术，用组织培养方法快速繁殖，具有整株的遗传一致性，生长健壮，根系发达、移栽成活率高，果品品质好，产量高等优点。对于化橘红树的组培方法也有相关文献报道，如：1、【题名】化州橘红茎尖微芽嫁接技术研究，【作者】徐雪荣，黎思娜，李映志；【刊名】热带作物学报 2013，34 (7 ) ：1237-1241；摘要：以柚、柠檬、红江橙等作砧木，化州橘红作接穗。 研究了激素处理砧木、接穗灭菌和培养基配方、砧木苗龄等因素对化州橘红茎尖嫁接成活率的影响。柚作砧木时，任何激素处理的成活率均高于对照，以 0.1m g/ L的GA3 处理 10 min 的成活率最高，为31％。不同砧木其成活率不同，成活率最高的为柚，达19.0%，最低的为宽皮橘，为 5.0%。灭菌方法对成活率和污染率也有影响，污染率最低的是 0.1%升汞灭菌 10 min，为 5. 7 % ，成活率最高的是 0.15%升汞灭菌 8 min，为 25.0%。培养基配方对嫁接苗的成活率也有影响，MS 基本培养基最有利于嫁接苗的成活，添加6-BA、A d和 NAA 都会降低成活率。16 d 苗龄的砧木最有利于嫁接苗的成活，成活率可达36.5%。2、中国专利技术专利，申请号：201410241319.3；申请人：广东橘乡农业开发有限公司；专利技术名称：一种嫁接橘红种苗方法；摘要：本专利技术涉及一种嫁接橘红种苗方法，属于植物嫁接
，其方法包括砧木品种的选择和培育、嫁接苗的培育、砧木及嫁接核心技术、嫁接苗的管理、苗期肥水管理、苗木出圃等六个方面；该方法能在任何季节进行嫁接，有效节约人工费用 50% 以上，而经本技术嫁接的橘红果树产量比传统嫁接橘红果树产量增加 20%-30%，经济效益显著，对大规模种植橘红有很好的推广示范应用作用。目前，在化橘红的繁育上，由于采用传统的圈枝和嫁接等方法进行繁育，存在着繁育繁殖率很低，生长速度慢，远远不能满足市场的大量需求等问题；因此，开发一种针对圈枝的组培快繁方法进行培养繁殖，能够促进优良遗传材料的快速繁殖，实现化橘红树苗的大量繁殖和快速推广，是解决市场需求等问题的有效方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种操作简便，繁殖速度，可应用于大规模商品化育苗的化橘红的组培快繁方法，采用该方法能有效、方便的在短时间内获得大量化橘红组培苗，而且所获得的组培苗成活率高，从而实现化橘红树苗的大量繁殖和快速推广。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种化橘红的组培快繁方法，包括以下步骤：(1)外植体的建立：于春季萌芽前，剪取1年生化橘红头枝，剪去嫩梢段和基部老化部分，留半木质化茎段，用自来水冲洗10分钟后，于质量浓度为0.4%的洗衣粉溶液中浸泡8-12分钟，再用自来水冲洗干净，然后用质量浓度为75%的酒精浸泡35s，无菌水冲洗3-4次，沥干水分，用质量浓度为1.0%的次氯酸钠消毒10-12分钟，然后用无菌水冲洗7-8次，用镊子夹取清洗好的茎段，在无菌操作台上，用灭菌过的滤纸吸干表面水分，剪取1.5-2.5cm 的带芽茎段作为外植体；（2）启动培养：将灭菌后的外植体接种到经高温灭菌的启动培养基中培养，培养条件为温度 25～27℃，光照强度为2400-2500lx，光照时间15-16h/d，在培养室中无菌培养23-25天后，将没有染菌的材料切成带 1～2 个芽的茎段接种于分生培养基中培养，分生培养基的成分为：MS+ N6苄基腺嘌呤（6-BA) 2.1mg/L+萘乙酸（NAA）0.4mg/L +维生素B1 1.6-1.8mg/L+谷氨酸1.7～1.8mg/L +4%糖蜜+琼脂7g/L，培养基pH 值为6.0；在光照强度为2300-2400lx，光照时间14-15h/d，温度为26-27℃的条件下，培养30-35天；（3）继代培养：将植株茎段转接入经高温消毒的继代培养基，在培养温度为25-26℃，光强 2000～2500lx，光照时间为17h/d的条件下培养33-35d；（4）生根培养：在无菌条件下，剪取长2-3cm继代培养得到的带叶茎段，插入生根培养基中进行生根培养；培养温度 26～28℃，光强2000～22001x，光照时间15h/d；（5）炼苗：当经过生根培养后的生根试管苗根长约 1.0～2.0 cm时，将组培苗进行室内炼苗，炼苗温度为：27-28℃，光照强度为5000-6500lx，室内瓶炼5-6天后，敞口炼苗4天；（6）移栽：取出试管苗，洗净根上的培养基，移栽到用0.2%KMnO4消毒过的米糠+黄土+细河沙+草炭按照2-3:5:1:0.5的比例做基质的营养杯中，浇足水，保持空气湿度为85％-90%，温度 25～26℃，避免阳光直射， 35-38 天后，移出温室进行全光照炼苗6-7d，及时浇水，然后移栽大田。所述的化橘红的组培快繁方法，步骤（2）中的启动培本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种化橘红的组培快繁方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)外植体的建立：于春季萌芽前，剪取1年生化橘红头枝，剪去嫩梢段和基部老化部分，留半木质化茎段，用自来水冲洗10分钟后，于质量浓度为0.4%的洗衣粉溶液中浸泡8‑12分钟，再用自来水冲洗干净，然后用质量浓度为75%的酒精浸泡35s，无菌水冲洗3‑4次，沥干水分，用质量浓度为1.0%的次氯酸钠消毒10‑12分钟，然后用无菌水冲洗7‑8次，用镊子夹取清洗好的茎段，在无菌操作台上，用灭菌过的滤纸吸干表面水分，剪取1.5‑2.5cm 的带芽茎段作为外植体；（2）启动培养：将灭菌后的外植体接种到经高温灭菌的启动培养基中培养，培养条件为温度 25～27℃，光照强度为2400‑2500lx，光照时间15‑16h/d，在培养室中无菌培养23‑25天后，将没有染菌的材料切成带 1～2 个芽的茎段接种于分生培养基中培养，分生培养基的成分为：MS+ N6苄基腺嘌呤（6‑BA) 2.1mg/L+萘乙酸（NAA）0.4mg/L +维生素B1 1.6‑1.8mg/L+谷氨酸1.7～1.8mg/L +4%糖蜜+琼脂7g/L，培养基pH 值为6.0；在光照强度为2300‑2400lx，光照时间14‑15h/d，温度为26‑27℃的条件下，培养30‑35天；（3）继代培养：将植株茎段转接入经高温消毒的继代培养基，在培养温度为25‑26℃，光强 2000～2500lx，光照时间为17h/d的条件下培养33‑35d；（4）生根培养：在无菌条件下，剪取长2‑3cm继代培养得到的带叶茎段，插入生根培养基中进行生根培养；培养温度 26～28℃，光强2000～22001x，光照时间15h/d；（5）炼苗：当经过生根培养后的生根试管苗根长约 1.0～2.0 cm时，将组培苗进行室内炼苗，炼苗温度为：27‑28℃，光照强度为5000‑6500lx，室内瓶炼5‑6天后，敞口炼苗4天；（6）移栽：取出试管苗，洗净根上的培养基，移栽到用0.2%KMnO4消毒过的米糠+黄土+细河沙+草炭按照2‑3:5:1:0.5的比例做基质的营养杯中，浇足水，保持空气湿度为85％‑90%，温度 25～26℃，避免阳光直射， 35‑38 天后，移出温室进行全光照炼苗6‑7d，及时浇水，然后移栽大田。...

【技术特征摘要】
1.一种化橘红的组培快繁方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)外植体的建立：于春季萌芽前，剪取1年生化橘红头枝，剪去嫩梢段和基部老化部分，留半木质化茎段，用自来水冲洗10分钟后，于质量浓度为0.4%的洗衣粉溶液中浸泡8-12分钟，再用自来水冲洗干净，然后用质量浓度为75%的酒精浸泡35s，无菌水冲洗3-4次，沥干水分，用质量浓度为1.0%的次氯酸钠消毒10-12分钟，然后用无菌水冲洗7-8次，用镊子夹取清洗好的茎段，在无菌操作台上，用灭菌过的滤纸吸干表面水分，剪取1.5-2.5cm 的带芽茎段作为外植体；（2）启动培养：将灭菌后的外植体接种到经高温灭菌的启动培养基中培养，培养条件为温度 25～27℃，光照强度为2400-2500lx，光照时间15-16h/d，在培养室中无菌培养23-25天后，将没有染菌的材料切成带 1～2 个芽的茎段接种于分生培养基中培养，分生培养基的成分为：MS+ N6苄基腺嘌呤（6-BA) 2.1mg/L+萘乙酸（NAA）0.4mg/L +维生素B1 1.6-1.8mg/L+谷氨酸1.7～1.8mg/L +4%糖蜜+琼脂7g/L，培养基pH 值为6.0；在光照强度为2300-2400lx，光照时间14-15h/d，温度为26-27℃的条件下，培养30-35天；（3）继代培养：将植株茎段转接入经高温消毒的继代培养基，在培养温度为25-26℃，光强 2000～2500lx，光照时间为17h/d的条件下培养33-35d；（4）生根培养：在无菌条件下，剪取长2-3cm继代培养得到的带叶茎段，插入生根培养基中进行生根培养；培养温度 26～28℃，光强2000～22001x，光照时间15h/d；（5...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷军强，韦颖婷，覃稳梅，李玉秋，莫晓君，韦倩梅，
申请(专利权)人：象州县科学技术局，
类型：发明
国别省市：广西;45