GnRH Ⅱ型拮抗剂在抑制孕激素耐药子宫内膜癌细胞增殖中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种GnRH Ⅱ型拮抗剂在抑制孕激素耐药子宫内膜癌细胞增殖中的应用。通过试验证明：GnRH Ⅱ型拮抗剂单独使用或者与MPA联合应用，可抑制子宫内膜癌细胞尤其是孕激素耐药子宫内膜癌细胞的生长，且可以通过上调PR表达，抑制PI3K信号通路等机制，逆转孕激素耐药，增加孕激素耐药子宫内膜癌细胞株对孕激素的敏感性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及GnRH Ⅱ型拮抗剂在抑制孕激素耐药子宫内膜癌细胞增殖中的应用。
技术介绍
子宫内膜癌是女性生殖道三大恶性肿瘤之一，占女性全身恶性肿瘤的7％，生殖道恶性肿瘤的25～30％。近10～20年中子宫内膜癌发生率约为上世纪70年代早期的两倍，并且发病具有年轻化趋势。约75％为早期，诊断时病变尚局限于子宫。子宫内膜癌的治疗，除了常规的手术治疗、放疗和化疗以外，内分泌治疗也成为一种重要的辅助治疗手段。目前在国内外内分泌治疗多被用于晚期、复发子宫内膜癌患者以及要求保留生育能力的早期子宫内膜癌患者的治疗中。临床最常用的内分泌治疗药物为孕激素。但长期孕激素治疗可造成PR表达下调从而导致子宫内膜癌孕激素耐药。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供GnRH Ⅱ型拮抗剂的新用途。本专利技术提供了GnRH Ⅱ型拮抗剂在制备预防和/或治疗子宫内膜癌的产品中的应用。其中的子宫内膜癌可以是无耐药性的子宫内膜癌，也可以是有耐药性的子宫内膜癌，耐药具体可为耐孕激素。本专利技术还提供了GnRH Ⅱ型拮抗剂在制备具有如下(1)-(5)中至少一种功能的产品中的应用：(1)促进子宫内膜癌细胞孕激素受体mRNA的表达；(2)抑制子宫内膜癌细胞增殖；(3)抑制子宫内膜癌细胞AKT的磷酸化水平；(4)抑制子宫内膜癌细胞的PI3K/AKT信号通路的激活；(5)抑制子宫内膜癌细胞的成瘤能力。上述应用中，所述抑制子宫内膜癌细胞的成瘤能力具体体现在减小子宫内膜癌细胞肿瘤体积和/或降低子宫内膜癌细胞瘤体重量。上述应用中，所述GnRH Ⅱ型拮抗剂为Trptorelix-1。本专利技术的另一个目的是提供一种预防和/或治疗子宫内膜癌的物质。本专利技术提供的预防和/或治疗子宫内膜癌的物质的活性成分为如下1)或2)：1)GnRH Ⅱ型拮抗剂；2)由GnRH Ⅱ型拮抗剂和醋酸甲地孕酮组成的组合物。上述物质中所述GnRH Ⅱ型拮抗剂为Trptorelix-1。上述物质中，所述2)中，所述GnRH Ⅱ型拮抗剂和所述醋酸甲地孕酮的摩尔比为1:1。上述物质在制备具有如下(1)-(6)中至少一种功能的产品中的应用：(1)预防和/或治疗子宫内膜癌；(2)促进子宫内膜癌细胞孕激素受体mRNA的表达；(3)抑制子宫内膜癌细胞增殖；(4)抑制子宫内膜癌细胞AKT的磷酸化水平；(5)抑制子宫内膜癌细胞的PI3K/AKT信号通路的激活；(6)抑制子宫内膜癌细胞的成瘤能力。上述应用或上述物质或上述应用中，所述子宫内膜癌细胞可以是无耐药性的子宫内膜癌细胞，也可以是有耐药性的子宫内膜癌细胞，耐药具体可为耐孕激素。所述子宫内膜癌细胞具体为孕激素耐药子宫内膜癌细胞。上述应用或上述物质或上述应用中，所述产品或物质为药物。通过试验证明：GnRH Ⅱ拮抗剂(Trptorelix-1)单独使用或者与MPA联合应用，可有效抑制孕激素耐药子宫内膜癌细胞的生长，且GnRH Ⅱ拮抗剂(Trptorelix-1)与MPA联合应用的抑制效果更明显。GnRH Ⅱ拮抗剂(Trptorelix-1)可以通过上调PR表达和抑制PI3K信号通路等机制逆转孕激素耐药，增加孕激素耐药子宫内膜癌细胞株对孕激素的敏感性。附图说明图1为Cetrorelix和Trptorelix-1(培养基中含/不含MPA)对Ishikawa-MPA细胞增殖的影响。图1A和图1B为Cetrorelix和Trptorelix-1(培养基中含/不含MPA)对Ishikawa细胞增殖的影响(生长曲线图)；图1B为Cetrorelix和Trptorelix-1(培养基中含/不含MPA)对Ishikawa-MPA细胞增殖的影响(生长曲线图)；图1C为Cetrorelix和Trptorelix-1(培养基中含/不含MPA)对两种细胞细胞增殖的影响(与生长曲线图相应的柱状图)；图1D为Cetrorelix和Trptorelix-1(培养基中含/不含MPA)对两种细胞抑制率的比较。其中Control为不含任何药物组；M为加MPA组；C为Cetrorelix组；C+M为Cetrorelix和MPA联合用药组；T为Trptorelix-1组；T+M为Trptorelix-1和MPA联合用药组。图2为裸鼠皮下移植瘤的生长曲线。其中，图2A为Ishikawa细胞的裸鼠皮下移 植瘤的生长曲线；图2B为Ishikawa-MPA细胞的裸鼠皮下移植瘤的生长曲线；图2C为不同药物处理后各细胞21天后的瘤体重量(*:P＜0.05)。图3为GnRH拮抗剂单独或者联合MPA使用对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤的体积的影响。图4为Realtime-PCR检测不同子宫内膜癌细胞的PR mRNA表达水平。图4A为Realtime-PCR(实时荧光定量PCR)检测不同子宫内膜癌细胞的PR mRNA表达水平；图4B为Cetrorelix和Trptorelix-1作用于Ishikawa-MPA细胞不同时间后，PR mRNA表达水平的变化(与对照组相比*:P＜0.05；**:P＜0.01)。图5为GnRH拮抗剂在不同时间作用Ishikawa-MPA细胞对p-AKT/AKT信号通路的影响。其中，图5A为Cetrorelix(10μM)在不同时间作用Ishikawa-MPA细胞对p-AKT/AKT信号通路的影响；图5B为Trptorelix-1(10μM)在不同时间作用Ishikawa-MPA细胞对p-AKT/AKT信号通路的影响。图6为Cetrorelix和Trptorelix-1(培养基中含/不含MPA)对Ishikawa-MPA细胞30min后PI3K/AKT信号通路的影响。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中的人子宫内膜腺癌细胞系Ishikawa(ISK)为高分化腺癌，ERα、β和PR均为阳性，来源于日本，在文献“赵丽君,魏丽惠,李小平,王建六.促性腺激素释放激素I型激动剂和II型对不同PTEN基因表达状态子宫内膜癌细胞的作用.中华妇产科杂志.2009,44(1):45-49”中公开过，由北京大学人民医院妇产科实验室保存。下述实施例中的Ishikawa-MPA细胞株(ISK-MPA)是前期诱导获得PR表达下调的孕激素耐药Ishikawa细胞株、长期培养于含MPA(10μM)的DMEM-F12高糖培养基(美国Hyclone公司)中，在文献“人子宫内膜癌耐醋酸甲羟孕酮细胞株的建立，中国妇产科临床杂志，2014,15(4)期:341-344”中公开过，公众可从北京大学人民医院获得。下述实施例中的GnRH I型拮抗剂：西曲瑞克Cetrorelix(Cet)，其氨基酸序列为：Ac-D-Nal(2)-DPhe(4Cl)-D-Pal(3)-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2；由上海紫域有限公司合成。下述实施例中的GnRH Ⅱ型拮抗剂：Trptorelix-1(Trp-1)，其氨基酸序列为：Ac-D-Nal(2)-DPhe(4Cl)-D-Pal(3)-Ser-Tyr-D-Cit-Trp-Tyr-Pro-D-Ala-NH2；由本文档来自技高网...

【技术保护点】
GnRH Ⅱ型拮抗剂在制备预防和/或治疗子宫内膜癌的产品中的应用。

【技术特征摘要】
2015.04.01 CN 20151015183851.GnRH Ⅱ型拮抗剂在制备预防和/或治疗子宫内膜癌的产品中的应用。2.GnRH Ⅱ型拮抗剂在制备具有如下(1)-(5)中至少一种功能的产品中的应用：(1)促进子宫内膜癌细胞孕激素受体mRNA的表达；(2)抑制子宫内膜癌细胞增殖；(3)抑制子宫内膜癌细胞AKT的磷酸化水平；(4)抑制子宫内膜癌细胞的PI3K/AKT信号通路的激活；(5)抑制子宫内膜癌细胞的成瘤能力。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述GnRH Ⅱ型拮抗剂为Trptorelix-1。4.一种预防和/或治疗子宫内膜癌的物质，其活性成分为如下1)或2)：1)GnRH Ⅱ型拮抗剂；2)由GnRH Ⅱ型拮抗剂和醋酸甲地孕酮组成的组合物。5.根据权利要求4所述的物质，其特征在于：所述GnRH...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏丽惠，赵丽君，李小平，李明珠，王建六，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：北京;11