【技术实现步骤摘要】
201610399684
【技术保护点】
一种制备鱼类肠壁黏液菌群DNA的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)在无菌条件下,用75%酒精清洗鱼体表面,用无菌剪刀和镊子解剖取出肠道,所取鱼肠道用75%酒精消毒表面,再用PBS 缓冲液清洗肠道表面3~5遍;(2)用无菌剪刀将所述肠道纵向剪开,使用PBS 缓冲液冲洗肠道内部8~12次,去除肠道中的粪便污水等内容物,得到去除内容物的肠道;(3)用无菌剪刀将所述去除内容物的肠道剪成小段,放入50 mL离心管中,加入PBS‑ET 缓冲液、蓖麻油、石英砂,置于涡旋振荡仪上振荡,得到含肠混合物;(4)将所述含肠混合物依次通过100 µm、20 µm、11 µm、8 µm的滤膜分级过滤,所得滤液即为获得肠壁黏液菌群混合液;(5)直接向所述肠壁黏液菌群混合液中加入裂解液进行细胞裂解;得到含核酸的裂解液;(6)向所述含核酸的裂解液中加入10 µL 10 mg/mL RNase A,37℃水浴处理30~60 min,得到含DNA的处理液1;(7)向所述含DNA的处理液1中加入50 µL 20mg/mL蛋白酶K,70℃水浴处理30~60 min,8000~10000 rpm离心15~30 min,离心 ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:黄薇,宋永康,田宝玉,廖茜,林恬,王超,
申请(专利权)人:福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,福建师范大学,
类型:发明
国别省市:福建;35
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