一种改进的药用高纯胰岛素提取工艺制造技术

本发明专利技术涉及生物制药，公开了一种改进的药用高纯胰岛素提取工艺，包括了粗提取工段和精提取工段通过采用反胶束分离对粗制胰岛素中脂层内含的大量胰岛素进行分离提纯，克服了传统脂层提取胰岛素过程中耗能耗时，对胰岛素变性破坏等缺陷；采用反胶束分离提取率高，并且使用的反胶束分离可以重复回收利用，可以有效节约成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物制药，特别是一种改进的药用高纯胰岛素提取工艺。
技术介绍
近年来,糖尿病的患病率急剧上升,全世界糖尿病患者已由1997年的1.35亿发展到2001年的1.77亿。2006年国际糖尿病联盟(lDF)报告全球糖尿病患者已达2.46亿,预计到2025年全球糖尿病患者将达3.88亿,而增加的这些患者主要来自中国,印度等发展中的人口大国。目前,临床上的胰岛素来源有基因工程人胰岛素,半合成人胰岛素和天然动物胰岛素。基因工程人胰岛素工艺复杂,目前国际上仅极少数公司具备生产能力,产品价格昂贵。半合成人胰岛素是利用酶促反应,将动物胰岛素(一般是猪胰岛素,因其与人胰岛素仅有一个氨基酸的差别)转变成人胰岛素，以避免机体的排异反应。与基因工程生产相比,酶促半合成方法相对简单快速,制备成本低廉的特点,故仍为国内外一些企业所关注，而市场上胰岛素的供应不足,动物胰岛素和半合成人胰岛素在我国临床使用上仍有一定比。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种改进的药用高纯胰岛素提取工艺，在传统酸醇提取减压浓缩法进行改进提高，采用反胶束分离法有效提高了胰岛素产率。为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本专利技术公开了一种改进的药用高纯胰岛素提取工艺，包括了粗提取工段和精提取工段，粗提取工段包括了：原料预处理、氨化和酸化、减压浓缩、反胶束分离，精提取工段包括了：去酸性蛋白、锌胰岛素沉淀、去碱性蛋白、结晶胰岛素、收集封装。各步骤具体为：原料预处理：选用猪、牛、羊的冷冻胰脏经刨胰机刨成微细薄片后，加入乙醇和乙酸混合液进行研磨破碎，离心滤出胰渣，取上清液，胰渣重复上述步骤，合并两次上清液得到预处理液；氨化和酸化：预处理液浓氨水调pH8.0-8.4，常压压滤，得氨化液，用6mol/L硫酸酸化pH3.3-3.8之间，在5℃以下静置4-6小时，取上清液为酸化液；减压浓缩：将酸化液倒入减压蒸馏锅中，滤去下层残渣，减压蒸馏出乙醇溶液，浓缩至为溶液体积为原体积的1/9-1/10；反胶束分离：浓缩液冷却静置4-6小时，分离水-脂层，水层用10％盐酸调pH2.3-2.5，加入27％氯化钠，搅拌盐析，保持温度为20℃，静置3-6小时，收集结晶的粗制胰岛素；脂层中加入pH3-3.5的磺基琥珀酸双酯/异辛烷/水的反胶束体系，180转每分钟搅拌1小时，加入0.8-1.2moL/L的氯化钾180转每分钟搅拌1小时，静置分层后取下层液重复水层步骤得到粗制胰岛素，上层脂层可回收反胶束体系；去酸性蛋白：取湿品粗制胰岛素，加入冷水、冷丙酮，并用2mol/L氨水调节pH值4.2，充分搅拌后，置冰箱或冷库中过夜，使溶液冷至5℃以下，次日在保持此温度下，过滤，将滤液置冰箱过夜，次日再同上方法复滤；锌胰岛素沉淀：向滤液中加入2mol/L氨水使溶液pH值达6.2，加入醋酸锌溶液调节pH6.0，放置冰箱过夜，过滤分离沉淀；去碱性蛋白：将锌胰岛素沉淀物加丙酮脱水制成干粉，加入冰冷20％柠檬酸溶液、6.5％醋酸锌溶液、丙酮、冰水稀释，搅拌溶解，然后将溶液置冰盐浴中，用4mol/L氨水调pH为8.0，过滤；结晶胰岛素：滤液立即用40％柠檬酸溶液调节pH值至6.0，加入丙酮，冷却低速搅拌5小时，3-5℃结晶，丙酮脱水三次，乙醚洗涤一次，五氧化二磷真空干燥即得结晶性胰岛素粉末；收集封装：消毒灭菌封装，遮光密闭，–15℃以下保存。优选的，各步骤中涉及过滤步骤的均采用多孔超细旦聚丙烯无纺布过滤。本专利技术具有以下有益效果：1.本专利技术通过采用反胶束分离对粗制胰岛素中脂层内含的大量胰岛素进行分离提纯，克服了传统脂层提取胰岛素过程中耗能耗时，对胰岛素变性破坏等缺陷；采用反胶束分离提取率高，并且使用的反胶束分离可以重复回收利用，可以有效节约成本。附图说明图1为本专利技术的工艺流程图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。实施例1如图1所示，本专利技术公开了一种改进的药用高纯胰岛素提取工艺，包括了粗提取工段和精提取工段，粗提取工段包括了：原料预处理、氨化和酸化、减压浓缩、反胶束分离，精提取工段包括了：去酸性蛋白、锌胰岛素沉淀、去碱性蛋白、结晶胰岛素、收集封装。各步骤具体为：原料预处理：选用猪、牛、羊的冷冻胰脏，用刨胰机刨成碎片末，每250公斤胰脏，用86％乙醇550公斤、乙酸12.5公斤pH值2.5-3.5、10-15℃、搅拌提取3小时。用离心机分离掉胰渣。胰渣再用68％乙醇250公斤，乙酸1公斤同上条件搅拌提取2小时，离心去渣；氨化和酸化：提取液在不断搅拌下加入浓氨水调pH8.0-8.4，过滤，得氨化液，滤渣为碱性蛋白弃去。及时用6mol/L硫酸酸化pH3.3-3.8之间，在5℃以下静置4-6小时，使酸性蛋白充分沉淀，上清液即为酸化液；减压浓缩：吸取上清酸化液置减压蒸馏锅内，沉淀物为酸性蛋白，可过滤弃去，30℃以下减压蒸去乙醇，直至浓缩液为原体积的1/9-1/10；反胶束分离：浓缩液冷却静置4-6小时，分离水-脂层，水层用10％盐酸调pH2.3-2.5，加入27％氯化钠，搅拌盐析，保持温度为20℃，静置3-6小时，收集结晶的粗制胰岛素；脂层中加入pH3-3.5的磺基琥珀酸双酯/异辛烷/水的反胶束体系，180转每分钟搅拌1小时，加入0.8-1.2moL/L的氯化钾180转每分钟搅拌1小时，静置分层后取下层液重复水层步骤得到粗制胰岛素，上层脂层可回收反胶束体系；去酸性蛋白：取湿品粗制胰岛素，用7倍量冷注射用水溶解，再加入3倍量的冷丙酮，并用2mol/L氨水调节pH值4.2，然后按耗用的氨水量补加3/7丙酮，使溶液中水和丙酮的比例为7：3，充分搅拌后，置冰箱中过夜，使溶液冷至5℃以下，次日在保持此温度下。过滤，然后将滤液置冰箱过夜，次日再同上方法复滤；锌胰岛素沉淀：向滤液中加入2mol/L氨水使溶液pH值达6.2左右，按溶液体积量加入3.6％体积的醋酸锌溶液，再用2mol/L氨水调节，使最终pH为6.0，放置冰箱中过夜，次日过滤，分离沉淀；去碱性蛋白：将锌胰岛素沉淀物加丙酮脱水制成干粉。按鲜胰每公斤制得干品0.125克的比例，算出本批沉淀干品的重量，为理论计算干品重量，再按此干品的重量每克加入冰冷20％柠檬酸溶液50ml、6.5％醋酸锌溶液2ml、丙酮16ml，并用冰水稀释本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种改进的药用高纯胰岛素提取工艺，其特征在于,包括了粗提取工段和精提取工段，所述的粗提取工段包括了：原料预处理、氨化和酸化、减压浓缩、反胶束分离，所述的精提取工段包括了：去酸性蛋白、锌胰岛素沉淀、去碱性蛋白、结晶胰岛素、收集封装。

【技术特征摘要】
1.一种改进的药用高纯胰岛素提取工艺，其特征在于,包括了粗提取工段和
精提取工段，所述的粗提取工段包括了：原料预处理、氨化和酸化、减压浓缩、
反胶束分离，所述的精提取工段包括了：去酸性蛋白、锌胰岛素沉淀、去碱性
蛋白、结晶胰岛素、收集封装。
2.如权利要求1所述的一种改进的药用高纯胰岛素提取工艺，其特征在于：
各步骤具体为：
原料预处理：选用猪、牛、羊的冷冻胰脏，加入乙醇和乙酸混合液进行研
磨破碎，离心滤出胰渣，取上清液，胰渣重复上述步骤，合并两次上清液得到
预处理液；
氨化和酸化：预处理液浓氨水调pH8.0-8.4，常压压滤，得氨化液，用6mol/L
硫酸酸化pH3.3-3.8之间，在5℃以下静置12小时以上，取上清液为酸化液；
减压浓缩：将酸化液真空吸入减压蒸馏锅中，下层残渣弃去，减压蒸馏出
乙醇溶液，最终浓缩至原体积的1/9-1/10；
反胶束分离：浓缩液冷却静置4-6小时，分离水-脂层，水层用10％盐酸调
pH2.3-2.5，加入27％氯化钠，搅拌盐析，保持温度为20℃，静置3-6小时，收
集结晶的粗制胰岛素；脂层中加入pH3-3.5的磺基琥珀酸双酯/异辛烷/水的反
胶束体系，180转每分钟搅拌1小时，加入0.8-1.2moL/L...

【专利技术属性】
技术研发人员：金荣富，薛洪宝，梁丽丽，陈静，刘志祥，陶兆林，
申请(专利权)人：安徽宏业药业有限公司，蚌埠医学院，
类型：发明
国别省市：安徽;34