一种食品中特丁基对苯二酚的检测方法技术

本发明专利技术公开了食品中特丁基对苯二酚的检测方法。所述检测方法包括如下步骤：(1)利用高效液相色谱法对待测食品中的特丁基对苯二酚进行分离；(2)在流动注射的条件下，步骤(1)的流出液与化学发光试剂进行混合得到一体系，并进行化学发光反应，根据所述体系的化学发光强度值，即得到食品中特丁基对苯二酚的浓度；所述化学发光试剂为鲁米诺-高锰酸钾体系与碱性pH调节剂的混合液。本发明专利技术检测方法具有以下优点：检出限，TBHQ为0.1ng/mL，较以前的方法灵敏度提高1个数量级，线性范围宽；(2)该方法的分析时间在6分钟以内；检测器成本低(<2000$)，条件温和，有利于自动化的分析操作；采用流动注射的方式，方法重现性好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种食品中特丁基对苯二酚的检测方法，属于食品检测领域。
技术介绍
抗氧化剂通常被人们用于油脂和油炸食品中，是一种来阻止或延缓食品氧化变质、提高食品稳定性和延长食品贮存期的食品添加剂。抗氧化剂按来源分为天然抗氧化剂和人工合成抗氧化剂，其中特丁基对苯二酚(TBHQ)是油脂和油炸食品中常用的一种合成抗氧化剂。但是，有研究发现，过量的TBHQ的使用会损伤动物的肝微粒体部分，因此对于它们的使用很多国家都有一定的限量标准，甚至有些国家至今尚不允在食品中使用TBHQ。所以对这些食品中抗氧化剂的测定是必要的。目前，已经有很多测定TBHQ的方法，例如分光光度法、气相色谱法、液相色谱法、毛细管胶束电动色谱法、电化学分析法等。尽管上述方法均有其优点，但也存在步骤繁杂、仪器昂贵、使用有毒溶剂等缺点。因此，建立一种简单、成本低及环境友好型并同时TBHQ的方法迫在眉睫。最近，化学发光分析法由于具有线性范围宽、灵敏度高，仪器简单，并且没有背景光干扰等优点，而被人们广泛运用。鲁米诺是最早也是最常见应用于化学发光中的试剂，鲁米诺-高锰酸钾体系已经被用来检测很多种物质。然而到目前为止，采用鲁米诺-高锰酸钾体系检测TBHQ的相关研究尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种食品中特丁基对苯二酚的检测方法，克服现有测定方法步骤繁杂、仪器昂贵、使用有毒溶剂、分析成本高、灵敏度不能满足需求、线性范围窄、分析测定时间长等缺点，基于TBHQ对鲁米诺-高锰酸钾体系的抑制作用，提供了一种全新的简单灵敏的检测抗氧化剂的方法。本专利技术提供的检测方法，首先利用高效液相色谱的高分离效率对抗氧化剂进行分离，然后柱后流出，再利用TBHQ对化学发光的影响，建立一种简单、灵敏快速测定TBHQ的HPLC-CL方法，本专利技术方法的测定原理是：当无TBHQ存在时，鲁米诺-高锰酸钾体系产生一个很强的化学发光信号；而当TBHQ存在时，由于其会与反应体系中的氧化剂高锰酸钾发生反应，从而导致化学信号降低，从而实现对抗氧化剂的测定。本专利技术所提供的食品中特丁基对苯二酚的检测方法，包括如下步骤：(1)利用高效液相色谱法对待测食品中的特丁基对苯二酚进行分离；(2)在流动注射的条件下，步骤(1)的流出液与化学发光试剂进行混合得到一体系，并进行化学发光反应，根据所述体系的相对化学发光强度值，即得到食品中特丁基对苯二酚的浓度；所述化学发光试剂为鲁米诺-高锰酸钾体系与碱性pH调节剂的混合液：所述鲁米诺-高锰酸钾体系为鲁米诺与高锰酸钾的水溶液。上述的检测方法中，所述食品可为食用油；所述食用油可为棉籽油、花生油和大豆油中至少一种。上述的检测方法中，所述食品中所述特丁基对苯二酚的浓度可为5×10-9g/mL～1×10-5g/mL。上述的检测方法中，步骤(1)中，所述高效液相色谱法的检测条件如下：流动相为甲醇与水的混合液，所述甲醇与所述水的体积比可为70：30；流速可为0.5～1.0mL/min，具体可为1.0mL/min。上述的检测方法中，步骤(2)中，所述化学发光试剂中，所述碱性pH调节剂为氢氧化钠或碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液；所述化学发光试剂中，所述鲁米诺的浓度可为0.1～0.8mmol/L，具体可为0.8mL/min，所述高锰酸钾的浓度可为0.01～0.2mmol/L，具体可为0.2mL/min，所述氢氧化钠的浓度可为0.05～0.5mmol/L，具体可为0.5mL/min；所述化学发光试剂的流速可为1.0～2.95mL/min。上述的检测方法中，步骤(2)中，按照下述步骤实现对食品中特丁基对苯二酚的浓度的检测：1)配制至少3种含有特丁基对苯二酚的标准溶液；2)按照步骤(1)和步骤(2)分别对所述食品标准样品进行处理，得到相应的化学发光强度值，以所述标准样品中特丁基对苯二酚的浓度为横坐标，以与所述标准样品相应的体系的相对化学发光强度值为纵坐标，制作标准曲线；3)根据步骤(2)中测定的相对化学发光强度值和所述标准曲线，即得到食品中的特丁基对苯二酚的浓度。上述的检测方法中，所述食品标准样品中所述特丁基对苯二酚的浓度可为5×10-9～1×10-5g/mL。化学发光试剂在检测食品中特丁基对苯二酚中的应用也属于本专利技术的保护范围；所述化学发光试剂为鲁米诺-高锰酸钾体系(即鲁米诺与高锰酸钾的水溶液)，并包含碱性pH调节剂如氢氧化钠，用于调整酸碱度；所述食品为食用油；所述食用油为棉籽油、花生油和大豆油中至少一种；所述化学发光试剂中，所述鲁米诺的浓度为0.1～0.8mmol/L，所述高锰酸钾的浓度为0.01～0.2mmol/L，所述氢氧化钠的浓度为0.05～0.5mmol/L。由于选择性差是化学发光分析法的固有的缺点，不适合应用于复杂样品的研究，本专利技术通过将化学发光与高效液相色谱分离手段相结合，从而很好的解决了这一问题，基于此，本专利技术成功地建立了以鲁米诺-高锰酸钾体系来测定TBHQ的新分析方法，并以HPLC分离，测定食用油中的TBHQ。本专利技术检测方法具有以下优点：(1)检出限，TBHQ为0.1ng/mL，较以前的方法灵敏度提高1个数量级，线性范围宽；(2)该方法的分析时间在6分钟以内；(3)检测器成本低(<2000$)，条件温和，有利于自动化的分析操作；(4)采用流动注射的方式，方法重现性好。附图说明图1为本专利技术HPLC-CL分析测试方法的示意图。图2为本专利技术检测方法中鲁米诺浓度对化学发光强度影响的示意图。图3为本专利技术检测方法中高锰酸钾浓度对化学发光强度影响的示意图。图4为本专利技术检测方法中氢氧化钠浓度对化学发光强度影响的示意图。图5为本专利技术建立的TBHQ浓度与化学发光强度之间的标准曲线。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例所用的主要仪器设备及试剂：IFFM-E流动注射化学发光分析仪机器配套设备(西安瑞迈分析仪器有限公司)，高效液相色谱仪(安捷伦1100)，F-4500荧光分光光度计。鲁米诺、高锰酸钾、氢氧化钠和TBHQ均购买于Sigma试剂公司(美国)。TBHQ的储备液用甲醇溶解并定容至1mgmL-1，使用时用流动相逐渐稀释。0.01mol/L鲁米诺储备液：准确称取0.1771g鲁米诺，用0.01mol/L的NaOH溶液溶解并定容至1L的容量瓶中；本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种食品中特丁基对苯二酚的检测方法，包括如下步骤：(1)利用高效液相色谱法对待测食品中的特丁基对苯二酚进行分离；(2)在流动注射的条件下，步骤(1)的流出液与化学发光试剂进行混合得到一体系，并进行化学发光反应，根据所述体系的化学发光强度值，即得到食品中特丁基对苯二酚的浓度；所述化学发光试剂为鲁米诺‑高锰酸钾体系与碱性pH调节剂的混合液；所述鲁米诺‑高锰酸钾体系为鲁米诺与高锰酸钾的水溶液。

【技术特征摘要】
1.一种食品中特丁基对苯二酚的检测方法，包括如下步骤：
(1)利用高效液相色谱法对待测食品中的特丁基对苯二酚进行分离；
(2)在流动注射的条件下，步骤(1)的流出液与化学发光试剂进行混合得到一
体系，并进行化学发光反应，根据所述体系的化学发光强度值，即得到食品中特丁基
对苯二酚的浓度；
所述化学发光试剂为鲁米诺-高锰酸钾体系与碱性pH调节剂的混合液；
所述鲁米诺-高锰酸钾体系为鲁米诺与高锰酸钾的水溶液。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述食品为食用油；
所述食用油为棉籽油、花生油和大豆油中至少一种。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于：所述食品中所述特丁基
对苯二酚的浓度为5×10-9g/mL～1×10-5g/mL。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)中，所
述高效液相色谱法的检测条件如下：
流动相为甲醇与水的混合液，所述甲醇与所述水的体积比为70：30；
流速为0.5～1.0mL/min。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的检测方法，其特征在于：步骤(2)中，所
述化学发光试剂中，所述碱性pH调节剂为氢氧化钠或碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液；
所述鲁米诺的浓度为0.1～0.8mmol/L，所述高锰酸钾的浓度为0.01～0.2mmol/L，
所述碱性pH调节剂的浓度为0.05～0.5mmol/L；

【专利技术属性】
技术研发人员：徐双娇，马磊，魏守军，王延琴，周大云，匡猛，方丹，杨伟华，
申请(专利权)人：中国农业科学院棉花研究所，
类型：发明
国别省市：河南;41