一株鹿角灵芝菌株及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一株鹿角灵芝菌株及其应用，本发明专利技术鹿角灵芝菌株命名为NCPSLZ1，菌株NCPSLZ1的保藏编号为CCTCC No.M2015796；保藏单位为中国典型培养物保藏中心；保藏日期为2015年12月29日；保藏地址为中国武汉武汉大学。本发明专利技术鹿角灵芝菌株的菌丝体和发酵液可用于制备抗肿瘤的药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术提供了，具体涉及该菌株在制备抗肿瘤药物中的应用，属于微生物领域。
技术介绍
灵芝别名万年蕈或灵芝草，属于担子菌纲，多孔菌目，多孔菌科，灵芝菌属，其中的鹿角灵芝(Ganoderma amboinense)生长中会形成类似鹿角的形态，属于灵芝中的名贵品种。近代医学研究发现鹿角灵芝有增强免疫，促进新陈代谢，抗肿瘤，延缓衰老等作用，其关键活性成分是灵芝多糖和灵芝三萜。传统人工栽培灵芝，周期长，生产效率低，受环境影响大。而通过灵芝液体发酵技术，不但能短时间内培养出大量菌丝体，缩短生产时间，而且能获得质量好且稳定的目标活性产物，营养和药用价值都不低于子实体，正逐步应用于药物，食品，美容化妆品等领域。灵芝液体发酵技术的关键在于寻找适合的菌株，一方面要有较高的灵芝多糖和灵芝三萜类化合物产量，一方面要能适应简单的培养方法和廉价的培养基成分。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，本专利技术鹿角灵芝菌株采集自山东泰山野生灵芝，命名为NCPSLZ1，菌株NCPSLZ1通过发酵后，含有较高含量的灵芝多糖和灵芝三萜类化合物。灵芝多糖具有广泛的药理活性，能提尚机体免疫力，提尚机体耐缺氧能力，消除自由基，抑制肿瘤、抗辐射，提高肝脏、骨髓、血液合成DNA、RNA、蛋白质能力，延长寿命，灵芝多糖还具有刺激宿主非特异性抗性、免疫特异反应以及抑制移植肿瘤生理活性的特性。对心血管疾病、气喘、过敏、神经衰弱、胃热等有显著效果。还具有降血压、降血脂、降血瘀、改善血液循环、皮肤美容等作用。灵芝三萜类化合物的药理作用为:保肝作用；抗肿瘤作用；抗HIV-1'及HIV-1蛋白酶活性;抑制组胺释放;抑制血管紧张素转化酶(ACE);抑制胆固醇合成;镇痛作用;对血小板聚氯的影响;对蛋白金合欢酯转移酶的抑制作用;抗氧化作用;抑制真核细胞DNA多聚酶活性。本专利技术鹿角灵芝菌株NCPSLZ1的保藏编号为CCTCCN0.M2015796;保藏单位为中国典型培养物保藏中心;保藏日期为2015年12月29日；保藏地址为中国武汉武汉大学，该鹿角灵芝菌株NCPSLZ1 为Ganoderma amboinense NCPSLZ1。本专利技术菌株NCPSLZ1由金唯智生物科技(北京)有限公司进行18sDNA菌种鉴定，结果表明该菌株属于鹿角灵芝(Ganoderma amboinense NCPSLZ1)，并与已公开的鹿角灵芝菌株18sDNA序列有区别，同源性低于100%。本专利技术菌株NCPSLZ1液体培养的方法，具体步骤如下:(I)母种扩增无菌条件下剖取小块鹿角灵芝菌株NCPSLZ1，移接到斜面培养基上，加塞，至恒温培养箱内，25-29°C中培养7天;优选的，菌株NCPSLZ1移接到斜面培养基上，27°C中培养7天；斜面培养基:马铃薯洗净，去皮，称取200g，切成小块，与30g麦麸，加水100mL煮沸，保持30min，过滤，滤液中加入琼脂20g，加热使其全部融化后，加入葡萄糖30g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁Ig，pH为7.0，分装入试管，放入高压灭菌锅灭菌，温度为121°C，时间为30min，制成试管斜面(18_X 180mm)备用；(2)种子液制备在斜面培养基上取Icm2的菌丝体，接种于种子液培养基中，置于摇床中25-29°C、140-160r/min培养7天;优选为，菌丝体接种于种子液培养基中，置于摇床中27°C、150r/min培养7天种子液培养基，按质量分数计:15% 土豆汁，3 %麦麸，3 %葡萄糖，0.2 %磷酸二氢钾，0.1 %硫酸镁，pH为7.0，培养液分装于500mL三角瓶中，每瓶装250mL，121°C灭菌30min，冷却后取出备用。(3)发酵罐发酵将种子液按10%(v/v)接种量接种到发酵罐中，25_29°C恒温培养80h，其中0-36小时菌丝体迟缓期内搅拌速度90-110r/min，36-70小时菌丝体对数生长期内搅拌速度110-130r/min，70-80小时菌丝体生长稳定期内搅拌速度90_110r/min ；优选的，0_36小时菌丝体迟缓期内搅拌速度100r/min ； 36-70小时菌丝体对数生长期内搅拌速度120r/min，70-80小时菌丝体生长稳定期内搅拌速度100r/min。发酵罐培养基(质量分数):20% 土豆汁，3 %的麦麸，3 %葡萄糖，0.2 %磷酸二氢钾，0.1%硫酸镁，pH为7.0。本专利技术鹿角灵芝菌株的菌丝体或者发酵液可用于制备抗肿瘤的药物。本专利技术与现有技术相比具有以下优点:本专利技术鹿角灵芝菌株NCPSLZ1通过发酵后，含有较高含量的灵芝多糖和灵芝三萜类化合物，可用于制备抗肿瘤的药物。在未进行任何优化的情况下，本专利技术鹿角灵芝菌株NCPSLZ1液体发酵产胞外多糖，胞内多糖和三萜类化合物含量也分别达到了4.07g/L，85mg/L和28.8mg/L，在类似灵芝菌株中处于较高水平。优化后，生物量为12.5g/L，胞内多糖为137mg/L，三萜类化合物为55mg/L，产量较未优化前的摇瓶发酵又有了很大的提高。【附图说明】图1为不同碳源对本专利技术鹿角灵芝菌丝体生物量的影响；图2为不同氮源对本专利技术鹿角灵芝菌丝体生物量的影响；图3为本专利技术鹿角灵芝菌丝体生长曲线图；图4为初始pH对本专利技术鹿角灵芝菌丝体生物量的影响；图5为土豆汁浓度对本专利技术鹿角灵芝菌丝体生物量的影响；图6为接种量对本专利技术鹿角灵芝菌丝体生物量的影响；图7为本专利技术鹿角灵芝菌丝球形态图；图8为本专利技术鹿角灵芝在奥林巴斯光电显微镜AH-2油镜下的菌丝形态图。【具体实施方式】下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。实施例1菌种鉴定本专利技术鹿角灵芝菌株NCPSLZ1的保藏编号为CCTCCN0.M2015796;保藏单位为中国典型培养物保藏中心;保藏日期为2015年12月29日；保藏地址为中国武汉武汉大学。本专利技术鹿角灵芝菌株的菌丝体和发酵液可用于制备抗肿瘤的药物。实施例2本专利技术菌株NCPSLZ1液体培养的方法，具体步骤如下:(I)母种扩增无菌条件下剖取小块鹿角灵芝菌株NCPSLZ1，移接到斜面培养基上，加塞，至恒温培养箱内，27 °C中培养7天；斜面培养基:马铃薯洗净，去皮，称取200g，切成小块，与30g麦麸，加水100mL煮沸，保持30min，过滤，滤液中加入琼脂20g，加热使其全部融化后，加入葡萄糖30g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁Ig，pH为7.0，分装入试管，放入高压灭菌锅灭菌，温度为121°C，时间为30min，制成试管斜面(18_X 180mm)备用；(2)种子液制备在斜面培养基上取Icm2的菌丝体，接种于种子液培养基中，置于摇床中27°C、150r/min 培养7天。种子液培养基，按质量分数计:15% 土豆汁，3 %麦麸，3 %葡萄糖，0.2 %磷酸二氢钾，0.1 %硫酸镁，pH为7.0，培养液分装于500mL三角瓶中，每瓶装250mL，121°C灭菌30min，冷却后取出备用。(3)发酵罐发酵将种子液按10% (v/v)接种量接种到发酵罐中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株鹿角灵芝菌株，其特征在于，鹿角灵芝菌株命名为NCPSLZ1，菌株NCPSLZ1的保藏编号为CCTCC No.M2015796；保藏单位为中国典型培养物保藏中心；保藏日期为2015年12月29日；保藏地址为中国武汉武汉大学。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈蕾蕾，陈相艳，赵双枝，裘纪莹，徐慧，张翔，王易芬，孙华，
申请(专利权)人：山东省农业科学院农产品研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37