一种松萝中有机酸单体的分离制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种松萝中有机酸单体的分离制备方法及应用，氢氧化钠在利用pH区带逆流色谱法分离制备松萝中的有机酸单体中的应用。石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂体系，所述溶剂系统的上相中加入三氟乙酸作为保留剂，下相中加入氢氧化钠作为洗脱剂。1)将溶剂系统中加入三氟乙酸的上相泵入逆流色谱仪器的分离柱，作为保留剂；3)开启逆流色谱仪，将样品溶液注入逆流色谱仪器中；4)将溶剂系统中加入氢氧化钠的下相，注入逆流色谱仪器中，作为洗脱剂；5)监测洗出液，根据所得的色谱图收集目标组分。本发明专利技术对松萝中的有机酸单体进行分离制备，分离效果好、分离量大、回收率高、有机酸单体的纯度达到92％以上，制备成本远低于现有技术。

【技术实现步骤摘要】
一种松萝中有机酸单体的分离制备方法及应用
本专利技术涉及逆流色谱分离制备方法，具体地说是关于运用pH区带逆流色谱法从松萝粗提物中分离制备有机酸单体的方法。技术背景松萝为松萝科植物长松萝(UsnealongissimaAch.)和破茎松萝(UsneadiffractaVain.)的干燥地衣体，具有清肝、化痰、止血、解毒等功效，可用于治疗头痛、目赤、咳嗽痰多、疟疾、瘰疬、白带，崩漏、外伤出血、痈肿、毒蛇咬伤等。主要有效成分为有机酸类化合物，包括苔色酸、巴尔巴地衣酸、环萝酸和松萝酸。其中，松萝酸是其代表性成分，是一种广谱抗菌素，对多数革兰氏阳性细菌有强大的抑制作用，也能抑制结核菌的生长，用于治疗化脓性创伤、二度烧伤、局部结核等，此外，还有抗癌、抗原虫以及解痉等作用。迟春艳等在《食品科学》(Vol.30,No.03,2009,127～129)发表了“制备型高速逆流色谱分离纯化长松萝中的松萝酸”，研究采用正己烷-乙腈-乙酸乙酯-水(8:7:5:0.8)的两相体系将石油醚(60-90℃)回流浸提的粗提物进行制备型高速逆流色谱的分离纯化，一次进样25mg，可得到松萝酸11.2mg。利用高效液相色谱检测该样品纯度达到99％。冯洁等在《中国中药杂志》(Vol.l34,No.6,2009,708～711)发表了“长松萝化学成分研究”，研究应用硅胶柱色谱、SephadexLH-20柱色谱和HPLC柱色谱法分离纯化化合物，利用IR、UV、MS和NMR数据鉴定化合物结构。结果从松萝中分离鉴定了13个化合物,分别为赤星衣酸乙酯(1)，木栓酮(2)，β-香树脂醇(3)，β-谷甾醇(4)，2,4-二羟基-3,6-二甲基苯甲酸甲酯(5)，坝巴酸(6)，泽屋萜(7)，苔色酸乙酯(8)，3β-羟基-粘霉-5-烯(9)，齐墩果酸(10)，(+)-松萝酸(11)，苔色酸甲酯(12)和4-甲基-2,6-二羟基苯甲醛(13)。WangXiao等在《JournalofChromatographyA》(Vol.1103,2006,166～169)发表了“PreparativeseparationofcichoricacidfromEchinaceaPurpureabypH-zone-refiningcounter-currentchromatography”，研究采用乙醇超声提取，回收乙醇，得菊苣酸浓缩液2.3L。用AB-8大孔吸附树脂的层析柱进行初步纯化，首先用水冲洗大孔吸附树脂柱至洗脱液无颜色，然后用30％乙醇洗脱目标化合物，得14.9g样品粗提物。最后采用叔丁基甲醚-乙腈-水(4:1:5)的溶剂系统，上层有机相加10mmol/L三氟乙酸作为固定相，下层水相加10mmol/L氨水作为流动相，一次进样3g，经过2次分离，得到目标化合物563mg，经过HPLC分析检测得知所得菊苣酸纯度为95.6％。WangXiao等在《Journalofseparationscience》(Vol.30,2007,3214～3217)发表了“Large-scaleseparationofsalvianolicacidBfromtheChinesemedicinalplantSalviamiltiorrhizabypH-zone-refiningcountercurrentchromatography”，研究用95％乙醇回流提取，减压浓缩，得浓缩液；浓缩液加一倍量水，用Na2CO3调pH至7.5，用乙醚萃取；水相用盐酸调pH值至3，用乙醚萃取，回收乙醚，得红色粉末状丹参粗提物57.19g。采用叔丁基甲醚-水(1:1)，上层有机相加三氟乙酸(浓度10mmol/L)作为固定相，下层水相加氨水(浓度10mmol/L)作为流动相。一次进样2.0g，得丹酚酸B524.2mg和少量的迷迭香酸，所得化合物纯度均大于93％。中国专利申请号为201210595556.0的专利技术公开了一种从长松萝中提取松萝酸的生产工艺，该方法为：将原料经粗粉碎后从投料斗投入，提取罐组主机旋转，将物料从机组前端向后缓慢推进，同时提取溶剂从机组末端的进液管进入提取罐内，由罐后端穿过移动的物料向前端流动，固液两相物质在这种逆向运动中充分接触，从而将药材中有效成分提取出来。药渣经出料传送器强制推动至出渣口而排出，专门的挤汁机对药渣进行挤压，将药渣中残留药液挤出药材组织，减少药渣中残留药液含量。提取效率更高、提取更完全。本专利技术同时选用连续萃取罐组萃取并结合硅胶柱层析法纯化，分离效果更佳。可得最高收率为1％，含量为95％以上的松萝酸成品。中国专利申请号为201010236842.9的专利技术公开了一种制备松萝酸的方法。该方法包括如下步骤：1)将长松萝粉碎后与有机溶剂混匀，进行回流提取，得到松萝酸粗提物；2)选择两相溶剂体系，采用高速逆流色谱法，将所述步骤1)得到的松萝酸粗提物进行分离，得到松萝酸。本专利技术采用高速逆流色谱进行松萝酸的分离，与以往的实验室制备技术手段相比具有明显的优点：一次进样量大、分离能力强、分离时间短、样品损失小，以及分离和纯化可同步完成。本专利技术提供的方法适于柱容量325ml的高速逆流色谱仪，利用该方法制备所得松萝酸的纯度高达99％。现有关于松萝中有机酸单体分离纯化的方法主要采用半制备HPLC、反复硅胶柱色谱、SephadexLH-20凝胶柱色谱，其局限性是费时费力、成本高、易产生不可逆吸附、样品回收率低、制备效率低；有报道运用高速逆流色谱法对松萝中有机酸单体进行分离纯化，虽然具有进样量大、分离能力强、分离时间短、样品损失小等特点，但相对于pH区带逆流色谱而言，其仍存在进样量小、实验条件较难优化等缺点；有报道采用连续萃取罐组结合硅胶柱层析法纯化松萝中的有机酸单体的方法，其最高收率为1％，成品为95％以上的松萝酸。上述研究方法多是针对松萝的主要成分松萝酸进行的分离制备和纯化，至于其他有机酸单体并未涉及。也有文献报道运用pH区带逆流色谱技术分离制备中药材提取物中的有机酸单体，所选用的溶剂系统有叔丁基甲醚-水、叔丁基甲醚-乙腈-水、叔丁基甲醚-乙腈-正丁醇-水和叔丁基甲醚-四氢呋喃-水，均以三氟乙酸作为保留剂，氨水作为洗脱剂；也有关于氯仿-甲醇-水溶剂系统的报道，以氨水作为保留剂，三氟乙酸作为洗脱剂；有报道以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水作为溶剂系统，以盐酸作为保留剂，氨水作为洗脱剂。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种松萝中有机酸单体的分离制备方法及应用，该方法具有成本低，操作简单，快速高效，可以从松萝中大量分离制备有机酸单体的优势。为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：氢氧化钠在利用pH区带逆流色谱法分离制备松萝中的有机酸单体中的应用。利用pH区带逆流色谱法分离制备松萝中的有机酸单体的溶剂系统，为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂体系，所述溶剂系统的上相中加入三氟乙酸作为保留剂，下相中加入氢氧化钠作为洗脱剂。优选的，石油醚、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为5:5:(2-3):(8-7)，优选为5:5:3:7。优选的，上相中的三氟乙酸的浓度为10-15mmol/L，优选为10mmol/L；下相中的氢氧化钠的浓度为10-20mmol/L，优选为前1.5小时10mmol/L，之后转换为20mmol/L。所述溶剂系本文档来自技高网...

【技术保护点】
氢氧化钠在利用pH区带逆流色谱法分离制备松萝中的有机酸单体中的应用。

【技术特征摘要】
1.利用溶剂系统进行松萝中有机酸单体分离制备的方法，其特征在于：包括如下步骤：将溶剂系统泵入逆流色谱仪中对松萝的有机酸粗提物的样品溶液进行分离，监测洗出液，根据所得的色谱图收集目标组分；所述溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂体系，溶剂系统的上相中加入三氟乙酸作为保留剂，下相中加入氢氧化钠作为洗脱剂；溶剂系统的上相泵入逆流色谱仪器的分离柱的速度为10-20ml/min，溶剂系统的下相注入逆流色谱仪器的速度为2ml/min，松萝的有机酸粗提物样品溶液注入逆流色谱仪器中时，逆流色谱仪的转速为750-1000rpm；所述松萝的有机酸粗提物的样品溶液的制备方法，包括如下步骤；采用乙酸乙酯对松萝进行提取，将提取液浓缩、冷冻干燥后，制得松萝的有机酸粗提物，每克有机酸粗提物用5-10ml加入三氟乙酸的上相和5-10ml未加入氢氧化钠的下相的混合物进行溶解，即得。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述溶剂系统中，石油醚、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为5:5:(2-3):(8-7)；上相中的三氟乙酸的浓度为10-15mmol/L；下相中的氢氧化钠的浓度为10-20mmol/L。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述溶剂系统中，石油醚、...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓，刘峰，孙常磊，耿岩玲，段文娟，王岱杰，
申请(专利权)人：山东省分析测试中心，
类型：发明
国别省市：山东;37