胚胎植入制造技术

本发明专利技术涉及通过在受精或胚胎植入之前提供免疫许可的子宫环境，改善雌性中胚胎植入的成功率和怀孕率的成功率的方法和组合物，所述组合物包括细胞因子。本发明专利技术的方法用于使得子宫更易于接受或较不排斥，例如，转移的胚胎、精子或其他异源移植的组织。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】胚胎植入本专利技术涉及通过在受精或胚胎植入之前提供免疫许可的子宫环境，改善雌性中胚 胎植入的成功率和妊娠成功率方法和组合物。本专利技术的方法用于使得子宫更易于接受或较 不排斥，例如，转移的胚胎、精子或其他异源移植的组织。本专利技术尤其也包括用于本专利技术的 方法的组合物和制剂。 背景 子宫环境，其如果是排斥的/非接收的，可造成人类和动物等中良好质量胚胎的差 植入率。拒信，从失败的植入和自然流产角度，不适当的致敏子宫环境也可能是繁殖障碍的 许多病例的原因。类似地，子宫致敏障碍被视为人类中妊娠并发症，比如先兆子痫和通过阻 止适当的胎盘发育的胎儿生长受限的病因。 基因改变或修饰的动物提供了用于体内测试新的基因和药物疗法的有价值的模 型，并且是在过去十年中动物实验的数量逐渐增加的主要原因。在英国，与1995年相比，在 2011年使用基因修饰的动物进行的许多科学程序超过四倍。基因修饰的动物的使用现在代 表在动物上超过50%的所有科学程序。使用的最大类别是饲养（以产生基因修饰的动物）， 仅2012年在英国啮齿动物占几乎180万个程序，该数量的背景趋势是每年增加。啮齿动物中 的胚胎转移支撑了转基因方法的发展、具体品系的再衍生，并且促进动物系跨长距离的转 运。典型地，胚胎转移需要在受体雌性中诱导假妊娠。该现象准备了用于植入胚胎的子宫， 但是，尽管诱导假妊娠，转移基因修饰的胚胎的成功率仍相对较低。 小鼠是自发排卵的并且在发情期之后可假妊娠，其中在发情期中雌性与遗传上不 育的雄性比如可获得自Harlan Laboratories Inc的T145H-Re品系（其由于染色体易位是 不育的）或结扎输精管的雄性交配。两组雄性都射出没有功能精子的精浆。但是，遗传上不 育的和结扎输精管的小鼠都相对昂贵。在结扎输精管的雄性的情况下，不育不能确保100% 有效并且需要测试每个雄性，而产生遗传上不育的雄性产生了不需要的过剩雌性。 可选地，假妊娠可通过由用人工机械刺激模拟交配获得的正常的阴道刺激诱导， 例如通过振动的刻纹工具（engraving tool) (Kenney等；J ReprocLFert · 1977,49,305-309)。发现进入的次数和速度对繁殖成功具有重要作用(Diamond; Science，1970，169，4， 995-997)。尽管该方法已经在大鼠和小鼠中有一些成功，但是机械刺激对诱导金地鼠 (Golden Hamster)的假妊娠没有作用(Diamond等J · Reprod .Fert · 1968，17，165-168)。当雌 性和不育的雄性交配或机械刺激时，黄体持续而没有胚胎，导致假妊娠。雌性在假妊娠状态 下，将使乳腺发育，分泌乳汁（lactate)和筑巢。需要改善诱导实验室测试动物的假妊娠状 态的方法。 尽管用于在许多啮齿动物物种中胚胎转移的方案是相对成熟的，但是它们较差的 优化意味着存在大量的动物损耗，其在全世界动物单位中造成许多经济和伦理问题。现有 技术标准方法目前依靠使受体雌性与结扎输精管的雄性交配以诱导假妊娠，而不是机械刺 激，其中交配活动和精液暴露于母体的生殖系(reproductive tract)触发神经内分泌和涉 及复杂的细胞因子级联的局部的（主要位于子宫）炎症应答和准备在子宫中产生免疫许可 环境的前列腺素介导的事件，从而利于胚胎植入前的发育和/或胚泡植入和建立妊娠。即使 在没有受精的情况下，支持黄体发育和孕酮产生，并且母体的生理机能协同使得子宫易于 接受转移的胚胎多达10-13天。该技术常规用于支持正常的(冷藏保存品系再生/再衍生)或 基因修饰的(转基因/嵌合/克隆的)胚胎的发育。 但是，该方法的效力是受限的。典型地，为了该程序，与怀孕的那些雌性相比，准备 了四倍多的雌性。当植入新鲜的或冷冻的胚胎时，这表示大量有价值的生物材料和努力的 耗费。而且，伴随着前瞻性受体，也需要维持大量年幼的结扎输精管的雄性:这些一周可仅 仅交配2-3次并且通常每6-9个月更换，以便维持性能。 交配主要在当受体雌性在发情期时进行。在小鼠和大鼠中，发情周期持续4-5天 (等同于女人平均28天的月经周期），其导致需要依靠大量潜在的受体雌性，以参与潜在的 与结扎输精管的或以其他方式不育的雄性的交配。典型地，在随机循环群体中，75%的受体 不在发情期，导致保持大量的雌性和结扎输精管的或以其他方式不育的雄性，并且在前者 的情况下，通常不用作代孕者（surrogate)，以便保证足够数量的受体用于定时转移。这在 待转移的胚胎非常有价值的情况下尤其明显。该方法的改良已经依靠经受体雌性中惠顿效 应（Wh i 11 e n e f f e c t)的定时发情期诱导。该策略依靠信息素刺激（ph e r emona 1 stimulation)受体雌性，其通常使得它们暴露于种畜雄性的尿-污染的草垫之后3天进入发 情期。但是，在信息素暴露时雌性的周期阶段、受体与种畜笼子的距离和受体的年龄都可能 对于该方法的可靠性有不利影响，使得其相对效率低下。 在正确时间雌性处在发情期(接受交配的）的几率是1:4,原因是它们周期的长度 (4天）。因此，如果需要4个受体，16个雌性将与16个雄性交配，其转化成25%的成功率。但一 些雌性拒绝与它们的同伴交配时，该数字可能甚至更低。关键是尽管大部分饲养员选择在 发情期的雌性，或在与不育雄性交配之前诱导发情期，但是仍仅仅相对较低百分数(通常约 50%-但是在一些场所中低至15%)的发情期雌性被'交配(plugged)'并且如此认为是假妊 娠。此外，雌性作为胚胎转移受体，也具有数月龄非常有限的功能寿命。雌性随着它们成熟， 快速积聚腹部脂肪，使得腹部手术胚胎转移(最常用和成功的方法)技术上太过有挑战性。 通过本专利技术的组合物和方法，可以想到对于结扎输精管的或以其他方式不育雄性 小鼠的需要可明显下降，以及显著减少雌性小鼠的使用。 本专利技术的目的是从阳性妊娠角度和/或人工或自然受精之后或移植新鲜的或冷冻 的或以其他方式保存的胚胎之后增加的幼崽数量角度提高哺乳雌性的怀孕率。
技术实现思路
根据本专利技术，提供了一种物质组合物，其包括选自下述的任何一种、两种、三种或 四种细胞因子:TNF-α、TGFi3、嗜酸性粒细胞趋化因子和RANTES，所述组合物用于提高怀孕率 和/或用于降低母体针对精液/精子或胚胎或其他异源移植组织的同种异体反应性和/或用 于在胚胎植入之前或受精之前在雌性中提供免疫许可的子宫环境。 因此，组合物可包括TNF-a与TGF0、嗜酸性粒细胞趋化因子和RANTES的一种或多 种，或TGFP与嗜酸性粒细胞趋化因子和RANTES的一种或多种，或嗜酸性粒细胞趋化因子和 RANTESo 在本专利技术的一些实施方式中，组合物可包括选自下述的细胞因子的任何两种、三 种或四种的组合:TNF_a、TGFi3、嗜酸性粒细胞趋化因子和RANTES。将认识到，因此本专利技术的 组合物可包括2至4种选自上述列举的指定细胞因子的许多不同组合。 优选地，IL-12是IL-12 p40或IL-12p70。 优选地，MIP 是 MIP-Ia 或 MIP-Ib。 优选地，组合物进一步包括选自下述的任何一种、两种、三种、四种、五种或六种另 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包括选自TNF‑α、TGFβ、嗜酸性粒细胞趋化因子和RANTES的任何一种、两种、三种或四种细胞因子的物质组合物，用于提高怀孕率和/或用于降低母体针对精液/精子或胚胎或其他异源移植组织的同种异体反应性和/或用于在胚胎植入之前或受精之前在雌性中提供免疫许可的子宫环境。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·高皮山德兰，N·M·奥斯，D·A·布鲁克，
申请(专利权)人：奥斯塔拉生物医学公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB