鹅膏毒肽衍生物制造技术

本发明专利技术涉及肿瘤的治疗。一方面，本发明专利技术涉及鹅膏毒肽和靶结合基团例如抗体通过特定接头连接的共轭物，其可用于治疗癌症和其它病症和疾病。另一方面，本发明专利技术涉及包括所述共轭物的药物组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及肿瘤治疗。一方面，本专利技术涉及鹅膏毒肽和靶结合基团例如抗体通过 特定接头连接的共辄物，用于治疗癌症和其他病症及疾病。另一方面，本专利技术涉及包括所述 共辄物的药物组合物。
技术介绍
鹅膏毒肽是8个氨基酸组成的环肽。例如，它们可以从鹅膏蕈蘑菇分离或合成制 备。鹅膏毒肽特异性地抑制哺乳动物细胞的DNA依赖性RNA聚合酶II，从而抑制受影响的 细胞的转录和蛋白质的生物合成。细胞的转录抑制导致生长和增殖的停止。虽然不是共价 连接，鹅膏毒肽和RNA聚合酶II能够紧密的连接（KD= 3nM)。因为从酶鹅膏蕈碱的解离是 一个非常缓慢的过程，所以受影响的细胞恢复的可能性不大。当转录的抑制时间过长，细胞 将经历程序性细胞死亡（凋亡）。 在1981年，通过使用连接到色氨酸的吲哚环的接头（氨基酸4;参见图1)，经重 氮化，连接抗Thyl. 2抗体到α-鹅膏蕈，已经探讨了用鹅膏毒肽作为细胞毒性基团用于肿 瘤治疗（Davis&Preston,Science1981，213, 1385-1388)。Davis和Preston确定连接位点 7'。Morris和Venton证明位点7'的替代导致保持细胞毒性的衍生（Morris&Venton,Int. J.PeptideProteinRes1983,21 419-430)〇 专利申请EP1859811Al(2007年11月28日公布）中描述的共辄物，其中，β鹅 膏蕈碱的鹅膏毒肽氨基酸1的yc-原子直接，即不通过接头结构，连接到白蛋白或单克隆 抗体ΗΕΑ125,0ΚΤ3,或PA-1。此外，示出了这些共辄物对乳腺癌细胞（MCF-7)、Burkitt淋巴 瘤细胞（Raji细胞）和T-淋巴瘤细胞（Jurkat细胞）增殖的抑制效果。其提示了接头的 使用，包括这样的接头，所述接头包括例如酰胺，酯，醚，硫醚，二硫化物，脲，硫脲，烃基等元 素，但其没有实际示出这样的构建体，也没有提供更多的细节，如鹅膏毒肽的附着位点。专利申请W0 2010/115629 和W0 2010/115630(均 2010 年 10 月 14 日公布）描述 的共辄物，其中抗体，如抗EpCAM抗体诸如人源化huHEA125,通过（i)所述鹅膏毒肽氨基酸 1的γC-原子（ii)所述鹅膏毒肽氨基酸4的6'C-原子，或（iii)通过δC原子鹅膏毒肽 氨基酸3的δC-原子连接到鹅膏毒肽，在每一种情况下可以直接或通过抗体和鹅膏毒肽之 间的接头连接。提示的接头包含例如酯，醚，氨基甲酸酯，肽键等元素。此外，示出了这些共 辄物对乳腺癌细胞（细胞系MCF-7)，胰癌（细胞系CAPAN-1)，结肠癌（细胞系的C〇1〇205) 和胆管癌（细胞系0Z)增殖的抑制作用。Wieland审查了 鶴膏毒肽的构效关系（T.Wieland,PeptidesofPoisonous AmanitaMushrooms,Springerseriesinmolecularbiology,SpringerVerlagNew York，1986)。假定氨基酸2的羟基基团（羟基脯氨酸）和氨基酸3所述-羟基基团（二羟 基-异亮氨酸）为活性所必需，而在氨基酸1 (天冬氨酸或天冬酰胺）、氨基酸4 (6-羟基色 氨酸）的功能基团和氨基酸3的-羟基基团更耐受化学修饰。这表明，后者是接头附着的 首选位点，而应避免前者的修饰。 已知的是，当连接到大生物分子的载体时，鹅膏毒肽是相对无毒的，，如抗体分 子，而且它们只有在切掉生物分子载体后才发挥它们的细胞毒性。鉴于鹅膏毒肽的毒性， 特别是对肝细胞，最为重要的是，对用于靶向肿瘤治疗的该鹅膏毒肽共辄物施用等离子体 后，它保持高度稳定，并且在靶细胞内化后发生鹅膏毒肽的释放。在这种情况下，共辄稳定 的微小改进可对治疗窗和鹅膏毒肽共辄物治疗方法的安全性产生严重的影响。 专利技术目的 本专利技术目的是进一步提供在血浆中稳定的靶结合基团鹅膏毒肽共辄物，以最小化 对非靶细胞的有害副作用。
技术实现思路
本专利技术基于以下意外的发现：两个氧原子与鹅膏毒肽氨基酸3的γ和sc原 子连接形成的环可以提高靶结合基团鹅膏毒肽共辄物耐受性，而不会干扰鹅膏毒肽与它 们的目标哺乳动物细胞的DNA依赖性RNA聚合酶II相互作用。至今认为羟基基团与鹅膏 毒肽氨基酸3的γ和SC原子的连接对鹅膏毒肽和鹅膏毒肽共辄物的功效是至关重要 的。Wieland(Τ.Wieland,PeptidesofPoisonousAmanitaMushrooms,SpringerSeries inMolecularBiology,SpringerVerlagNewYork, 1986；ffielandT，RempelD，Gebert U,BukuA,BoehringerH.TJbordieInhaltsstoffedesgrlinenKliollenblatterpiizes, XXXII.ChromatographischeAuftrennungderGesamtgifteundIsolierungderneuen NebentoxineAmaninundPhallisinsowiedesungiftigenAmanullins.LiebigsAnn Chem. 1967 ;704:226 - 236)认为天然产生的缺少γ-羟基的鹅膏毒肽毒性显著降低，如一 羟鹅膏毒素酰胺。 一方面，本专利技术涉及式I的鹅膏毒肽 其中： R1选自C= 0,C=S，C=NR6和CR7Rs; R2选自S= 0,S02和S; R3选自NHR5和OR5; R4选自H，OR5,和OC! 6_ 烷基； R6选自Ci6_亚烷基-R5,亚环烷基-R5,杂亚环烷基-R5,亚芳基-R5,和杂亚芳 基-R5; R7和Rs独立地选自H，C16-亚烷基-R5,亚环烷基-R5,杂亚环烷基-R5,亚芳基-R5， 和杂亚芳基-R5; 其中： ⑴每个R5是H; (ii)R5中的一个是-Ln_X，其中L是接头，η选自0和1，X是可与靶向基团连接的 化学基团，并且其余的R5为Η;或 (iii)R5中的一个是-Ln-X*-Y，其中L是接头，η选自0和1，Υ是靶向基团，X*是 X与Υ的官能团连接产生的化学部分，并且其余的R5是Η。 另一方面，本专利技术涉及用作药物的鹅膏毒肽。 又一方面，本专利技术涉及用于治疗患者中的癌症的鹅膏毒肽，其中所述癌症选自乳 腺癌，胃肠道癌，例如组成的组中结肠直肠癌，胰腺癌，胆管癌，肝细胞癌，骨肉瘤，肺癌，前 列腺癌，鳞状细胞癌，卵巢癌，睾丸癌，膀胱癌，胃癌，头颈癌，宫颈癌，肾癌，神经胶质瘤，皮 肤癌，如：恶性黑色素瘤，甲状腺癌，白血病，恶性淋巴瘤。 又一方面，本专利技术涉及药物共辄物，根据本专利技术，其包含的鹅膏毒肽还包括一种或 多种药学上可用的稀释剂，载体，赋形剂，填充剂，粘合剂，润滑剂，助流剂，崩解剂，吸附剂； 和/或防腐剂。 又一方面，本专利技术涉及一种方法，用于合成本专利技术的鹅膏毒肽，其包括以下步骤： 将式II的鹅膏毒肽 其中： R2选自S= 0,SO2和S; R3选自NHR5和OR5; R4选自H，OR5,和OQ6_ 烷基； R6选自Ci6_亚烷基-R5,亚环烷基-R5,杂亚环烷基-R5,亚芳基-R5,和杂亚芳 基-本文档来自技高网...

【技术保护点】
式I的鹅膏毒肽其中：R1选自C＝O,C＝S,C＝NR6和CR7R8；R2选自S＝O,SO2和S；R3选自NHR5和OR5；R4选自H,OR5,和OC1‑6‑烷基；R6选自C1‑6‑亚烷基‑R5，亚环烷基‑R5，杂亚环烷基‑R5，亚芳基‑R5，和杂亚芳基‑R5；R7和R8独立地选自H，C1‑6‑亚烷基‑R5，亚环烷基‑R5，杂亚环烷基‑R5，亚芳基‑R5，和杂亚芳基‑R5；其中：(i)每个R5是H；(ii)R5中的一个是‑Ln‑X,其中L是接头，n选自0和1,X是可与靶向基团连接的化学基团,并且其余的R5为H；或(iii)R5中的一个是‑Ln‑X*‑Y，其中L是接头，n选自0和1，Y是靶向基团，X*是X与Y的官能团连接产生的化学部分，并且其余的R5是H。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：克里斯托夫·米勒，扬·安德尔，维尔纳·西蒙，克里斯蒂安·卢茨，托尔斯滕·赫克勒，
申请(专利权)人：海德堡医药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE