阿司匹林‑Arg‑Gly‑Asp‑Val缀合物,其合成,纳米结构和作为载药体系的应用。本发明专利技术公开了一种新型阿司匹林‑Arg‑Gly‑Asp‑Val(A‑RGDV)缀合物，还公开了它的制备方法以及它作为抗血栓剂的应用。A‑RGDV的特征在于，在血液中能够以纳米颗粒选择性地转运，到达血栓形成部位之后与被激活的血小板表面的GPIIb/IIIa受体作用，释放阿司匹林。因此，A‑RGDV是阿司匹林的靶向给药体系。A‑RGDV具有强的抗血栓活性，具有良好的临床应用前景。下面是A‑RGDV的结构式。
【技术实现步骤摘要】
阿司匹林-Arg-Gly-Asp-Val缀合物,其合成,纳米结构和作为载药体系的应用
本专利技术涉及一种新型阿司匹林-Arg-Gly-Asp-Val(A-RGDV)缀合物，还涉及它的制备方法以及它作为抗血栓剂的应用。A-RGDV的特征在于，在血液中能够以纳米颗粒选择性地转运，到达血栓形成部位之后与被激活的血小板表面的GPIIb/IIIa受体作用，释放阿司匹林。因此，A-RGDV是阿司匹林的靶向给药体系。A-RGDV具有强的抗血栓活性，具有良好的临床应用前景。本专利技术属于生物医药领域。下面是A-RGDV的结构式。
技术介绍
阿司匹林在临床上被广泛应用已逾百年，用于治疗急性炎症，疼痛，心血管疾病，中风，妊娠并发症，癌症，糖尿病和阿尔兹海默症，这些表明它卓越的疗效。对于不同的适应症，阿司匹林有不同的治疗方案。然而，临床也已经揭示了阿司匹林的严重局限性。最主要的局限性是患者对阿司匹林治疗出现耐药或者丧失疗效。患者对阿司匹林治疗出现耐药或者丧失疗效，一方面表现在阿司匹林不完全地抑制患者的血小板功能，尽管患者服用了足够临床剂量阿司匹林。这种情况严重地降低了阿司匹林的对多种疾病包括二型糖尿病，哮喘，心血管疾病，中风，冠心病和小儿心脏手术的治疗效果。为了克服阿司匹林的不足，人们做出了许多努力。例如，为增强糖尿病人血小板的敏感性，实施代谢控制和服用阿司匹林的交替给药方案；为增强高血浆胆固醇的心血管疾病患者的血小板敏感性，将阿司匹林与脂质过氧化抑制剂联用；为增强动脉粥样硬化血栓患者血小板的敏感性，将阿司匹林与他汀类药物联用；为避免患者对阿司匹林的不良容忍性，将阿司匹林与其它药物交替使用；为增强因阿司匹林致呼吸道疾病加重的病人口服阿司匹林的安全性，使用采用预处理过的白三烯改造的药物。尽管这些工作取得了一些成就，患者对阿司匹林治疗出现耐药或者丧失疗效至少仍然是限制阿司匹林治疗心血管疾病的主要临床障碍。RGD序列肽是整合素识别胶原，纤连蛋白，玻连蛋白，层粘连蛋白，免疫球蛋白超家族成员和血浆蛋白质的触发点。虽然整合素与RGD序列肽的相互作用被广泛用于制备大分子药物载体，但是没有任何研究使用单一的RGD四肽直接输送药物。在RGD四肽与小分子形成的缀合物的生物学研究中，专利技术人发现，当缀合物的RGD四肽部分与活化的血小板表面的GPIIb/IIIa受体相互作用时，缀合物的小分子部分可以分解下来。也就是说，当RGD四肽与小分子形成的缀合物的RGD四肽部分与血栓中活化的血小板表面的GPIIb/IIIa受体相互作用时，缀合物的小分子部分可以分解下来。而在没有活化血小板的血液循环中，RGD四肽与小分子形成的缀合物不发生任何分解。根据这些认识，专利技术人提出了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一个内容是将RGDV与阿司匹林缀合，制备新型阿司匹林-Arg-Gly-Asp-Val(A-RGDV)缀合物。下面是该缀合物A-RGDV的结构式。本专利技术的第二个内容是提供一种制备A-RGDV的方法，该方法包括：1)采用液相合成方法，通过逐步接肽分别合成Arg-Gly的保护中间体和Asp-Val的保护中间体；2)脱去Arg-Gly的保护中间体的C端保护基；3)脱去Asp-Val的保护中间体的N端保护基；4)把N端游离的Asp-Val的保护中间体和C端游离的Arg-Gly保护中间体偶联得到Arg-Gly-Asp-Val的保护中间体；5)脱去Arg-Gly-Asp-Val的保护中间体的N端保护基；6)把N端游离的Arg-Gly-Asp-Val保护中间体和阿司匹林偶联得到A-RGDV的保护中间体；7)把A-RGDV的保护中间体脱去保护基，得到A-RGDV。其中，所述的N端保护基是对多肽的N端进行保护时常用的保护基团，例如可以是叔丁氧羰基(Boc)，所述的C端保护基是对多肽的C端进行保护时常用的保护基团，例如可以是苄氧基(OBzl)。以上所述的液相合成中间体并加以保护的方法是本领域的常规并公知的技术。本专利技术的第三个内容是用透射电子显微镜(TEM)，扫描电子显微镜(SEM)和原子力显微镜(AFM)测定A-RGDV的纳米结构。通过ROESY2DNMR图谱，ESl-MS图谱和介观理论计算，考察A-RGDV形成纳米颗粒的机理。本专利技术的第四个内容是研究A-RGDV与GPIIb/IIIa和COX-1的相互作用，说明A-RGDV在血液中保持缀合物分子的完整性，在血栓中释放阿司匹林，以及显示的靶向抗血栓作用。附图说明图1阿司匹林-Arg-Gly-Asp-Val(A-RGDV)的合成路线图。i)二环己基羰二亚胺(DCC)，N-羟基苯并三氮唑(HOBt)，N-甲基吗啉(NMM)；ii)NaOH(1M)；iii)氯化氢-乙酸乙酯(6M)；iv)H2和Pd/C。图2A-RGDV的1HNMR图谱。图3A-RGDV的ROESY2DNMR图谱和4个相关峰。相关峰1表示A-RGDV的构造，相关峰2-4表示A-RGDV的分子间聚集。图4A-RGDV的ESI-MS图谱。图5左图为A-RGDV的透射电镜照片，右图为A-RGDV的扫描电镜照片。图6A-RGDV的原子力显微镜照片。A)A-RGDV在水中的原子力显微镜照片；B)大鼠血浆的原子力显微镜照片；C)A-RGDV在大鼠血浆中的原子力显微镜照片。图7A-RGDV形成四聚体从而形成纳米结构组图。图8A-RGDV在大鼠血浆中孵育30min后的ESI-MS图谱。图9A-RGDV加GPIIb/IIIa在水中孵育30min后的ESI-MS图谱。图10A-RGDV加COX-1在水中孵育30min后的ESI-MS图谱。图11不同剂量阿司匹林，RGDV和不同剂量A-RGDV的体内抗血栓活性。图12A-RGDV对GPIIb/IIIa表达水平的影响。具体实施方式为了进一步阐述本专利技术，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本专利技术进行具体描述，不应当理解为对本专利技术的限制。实施例1制备Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl将10.0g(31.3mmol)Boc-Arg(NO2)用100ml无水四氢呋喃(THF)溶解，冰浴冷却，向得到的溶液中加入4.3g(31.3mmol)N-羟基苯并三氮唑(HOBt)和6.4g(31.3mmol)二环己基羰二亚胺(DCC)，将此反应液冰浴下搅拌10min。加入10.6g(31.3mmol)Tos·Gly-OBzl和3.5g(31.3mmol)N-甲基吗啉(NMM)，室温搅拌24h。反应混合物过滤，滤除二环己基脲(DCU)。滤液减压浓缩，残留物用150ml乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液洗，饱和NaCl水溶液洗，5％KHSO4水溶液洗和饱和NaCl水溶液洗。有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，残留物经柱层析纯化(氯仿/甲醇，30∶1)，得到12.84g(88％)油状标题化合物。ESI-MS(m/e)：467[M+H]+。实施例2制备Boc-Arg(NO2)-Gly将11.85g(25.4mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl溶解在50ml甲醇中，冰浴冷却，加入12ml氢氧化钠-甲醇溶液(1M)，搅拌1小时，反应液用2M盐酸中和至pH＝7，减压浓缩除去甲醇，残留物用2M盐酸酸本文档来自技高网...
【技术保护点】
结构式如下的新型阿司匹林‑Arg‑Gly‑Asp‑Val缀合物(A‑RGDV)。 。
【技术特征摘要】
1.结构式如下的阿司匹林-Arg-Gly-Asp-Val缀合物，2.制备权利要求1的阿司匹林-Arg-Gly-Asp-Val缀合物的制备方法，包括：1)采用液相合成方法，通过逐步接肽分别合成Arg-Gly的保护中间体和Asp-Val的保护中间体；2)脱去Arg-Gly的保护中间体的C端保护基；3)脱去Asp-Val的保护中间体的N端保护基；4)把N端游离的Asp-Val的保护中间体和C端游离的Arg-Gly保护中间体偶联得到Arg-Gly-Asp-Val...
【专利技术属性】
技术研发人员：彭师奇，赵明，吴建辉，王玉记，马海萍，
申请(专利权)人：首都医科大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
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