使用来自母体血液的胎儿细胞捕获的胎儿诊断学制造技术

提供非侵入性胎儿诊断方法。具体而言，提供从母体样品获得富集胎儿细胞的样品的方法以及评估母体样品的胎儿核苷酸序列或胎儿基因的表达的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】使用来自母体血液的胎儿细胞捕获的胎儿诊断学 通过引用任何优先权申请作出的并入本申请依据35U.S.C.§ 119(e)要求于2013年5月16日提交的美国临时申请第61/824，128号的优先权，通过引用的方式将其整体明确并入本文。专利技术背景产前诊断能提供关于胎儿状态的有用信息。通常，使用侵入性技术进行产前诊断，其会对胎儿造成风险。最近，在母体的循环血液内已发现胎儿的遗传物质。这样的胎儿遗传物质来源于胎儿并且穿过胎盘进入母体的循环系统。胎儿DNA的两种主要的非侵入性资源是母体的血浆和循环的胎儿细胞。在怀孕的早期，可在母体血液中检测到胎儿的遗传物质。已通过利用无细胞的胎儿DNA开发了一些非侵入性诊断策略。然而，根据定量分析，在妊娠早期和妊娠晚期，胎儿DNA分别仅占总的血浆DNA的?3.4%和?6.2%。这对精确的分析来说是技术上的挑战，因为胎儿的一半遗传信息来源于父亲，其会被母体的DNA压制。此外，因为胎儿无细胞的DNA没有受到细胞膜的保护，所以与完整的基因组相比，DNA片段短且不完整。至于来自母体血液的胎儿细胞，由于其存在的稀缺性，分离也是困难的，其可低至106?10 7个母体细胞中1个胎儿细胞的量级。为了获得足够用于分析的胎儿细胞，使用富集的技术。由于它们的数量少，从母体血液样品富集并纯化胎儿细胞是技术上的挑战。这些挑战最终使胎儿的诊断方法复杂化。专利技术概述本申请的专利技术人开发了改进的非侵入性胎儿诊断方法。具体而言，提供从母体样品获得富集胎JL细胞的样品的方法，以及评估母体样品的胎JL核昔酸序列或胎JL基因的表达的方法。在某些实施方案中，本文提供从母体样品获得富集胎儿细胞的样品的方法，其包括:提供母体样品；使母体样品与对一种或多种糖具有亲和力的第一固定相接触；将结合第一固定相的母体样品的组分与不结合第一固定相的母体样品的组分分离；保留结合第一固定相的母体样品的组分；使母体样品与对基质金属蛋白酶14具有亲和力的可分离地(isolatably)标记的亲和分子接触；将结合可分离地标记的亲和分子的母体样品的组分与不结合可分离地标记的亲和分子的母体样品的组分分离；并且保留结合可分离地标记的亲和分子的母体样品的组分，从而提供富集胎儿细胞的样品。某些这样的实施方案还包括，在母体样品与所述第一固定相和所述第一固定相接触之前:根据大小和/或密度分离母体样品的组分；并且收集具有有核胎儿红细胞的大小和/或密度的母体样品的分离组分。在某些实施方案中，使用梯度离心，进行根据大小和/或密度进行的母体样品的组分分离。在某些实施方案中，一种或多种糖为半乳糖。在某些实施方案中，第一固定相为凝集素结合的固定相。在某些实施方案中，第一固定相包含磁珠。在某些实施方案中，可分离地标记的亲和分子与磁珠结合。在某些实施方案中，在保留结合第一固定相的母体样品的组分之后，使所保留的结合第一固定相的母体样品的组分与对基质金属蛋白酶14具有亲和力的可分离地标记的亲和分子接触。某些实施方案还包括使母体样品与对除了基质金属蛋白酶14之外的胎儿细胞表面标志物具有亲和力的第二固定相接触；将结合第二固定相的母体样品的组分与不结合第二固定相的母体样品的组分分离；并且保留结合第二固定相的母体样品的组分。在某些实施方案中，胎儿细胞表面标志物选自转铁蛋白受体(CD71)、血型糖蛋白A(GPA)、HLA-G、EGFR、血小板反应蛋白受体(CD36)、CD 34、HbF、HAE 9、FB3-2、H3-3、促红细胞生成素受体、HBE、AFP、AP0C3、SERPINC1、AMBP、CPB2、ITIH1、ΑΡΟΗ、ΗΡΧ、β -hCG、AHSG、APOB、J42-4_d、2，3_ 二憐酸甘油酸(b1phosphoglycerate) (BPG)、碳酸圈1 酶(CA)和胸昔激酶(TK)。在某些实施方案中，胎儿细胞表面标志物为转铁蛋白受体(CD71)。在某些实施方案中，母体样品为母体血液样品。在某些实施方案中，富集胎儿细胞的样品中至少50%、60 %、70 %、80 %或90 %的细胞为胎儿细胞。某些实施方案还包括提供富集胎儿细胞的样品；并且分析来自富集胎儿细胞的样品的一个或多个细胞中的核酸分子的核苷酸序列或基因的表达。在某些实施方案中，分析核酸分子的核苷酸序列包括对来自富集胎儿细胞的样品的一个或多个细胞的基因组DNA进行测序。在某些实施方案中，对基因组DNA进行测序包括对单个细胞的DNA进行测序，并且其中对来自富集胎儿细胞的样品的一个或多个细胞进行单个细胞的DNA的测序。在某些实施方案中，对来自富集胎儿细胞的样品的至少2、3、4、5、6、7、8、9或10个细胞进行单个细胞的DNA的测序。在某些实施方案中，基因的表达包括使可检测的抗体与来自富集胎儿细胞的样品的一个或多个细胞的表面杂交。在某些实施方案中，分析核酸分子的核苷酸序列包括使可检测的探针与来自富集胎儿细胞的样品的一个或多个细胞的基因组DNA杂交。在某些实施方案中，针对可检测的探针与各个被分析的细胞的基因组DNA的杂交，分析一个或多个个体细胞。在某些实施方案中，针对可检测的探针与各个被分析的细胞的基因组DNA的杂交，分析至少2、3、4、5、6、7、8、9或10个个体细胞。本文还提供评估母体样品的胎儿核昔酸序列或胎儿的基因表达的方法，其包括:提供母体样品；使母体样品与对一种或多种糖具有亲和力的第一固定相接触；将结合第一固定相的母体样品的组分与不结合第一固定相的母体样品的组分分离；保留结合第一固定相的母体样品的组分；使母体样品与对胎儿细胞表面标志物具有亲和力的可分离地标记的亲和分子接触；将结合可分离地标记的亲和分子的母体样品的组分与不结合可分离地标记的亲和分子的母体样品的组分分离；保留结合可分离地标记的亲和分子的母体样品的组分，以提供富集胎儿细胞的样品用于分析；测定富集胎儿细胞的样品的两个或更多个细胞的每个的个体细胞中的核酸分子的核苷酸序列或基因的表达；并且评估对富集胎儿细胞的样品的两个或更多个细胞的每个的个体细胞所测定的核酸分子的核苷酸序列或基因的表达，以鉴定胎儿的核苷酸序列或基因表达。在某些实施方案中，评估对富集胎儿细胞的样品的两个或更多个细胞的每个的个体细胞所测定的核酸分子的核苷酸序列或基因的表达包括:基于所测定的核苷酸序列或基因表达，将每个细胞分类为属于第一细胞群体或第二细胞群体；并且鉴定第一和第二细胞群体为胎儿或母体来源的概率。在某些实施方案中，通过将第一和第二群体的每一个的核酸分子的核苷酸序列或基因的表达与已知的母体细胞的已知核酸分子的核苷酸序列或基因的表达相比较，鉴定第一和第二细胞群体为胎儿或母体来源的概率，其中携带与已知的母体细胞较高的核苷酸序列或基因表达相似性的细胞群体被鉴定为母体来源。在某些实施方案中，通过评估第一和第二细胞群体的大小鉴定第一和第二细胞群体为胎儿或母体来源的概率，其中较大的细胞群体被鉴定为胎儿来源。还提供评估母体样品的胎儿核昔酸序列或胎儿的基因表达的方法，其包括:提供富集胎儿细胞的样品的两个或更多个细胞的每个的个体细胞中的核酸分子的核苷酸序列或基因的表达，其中通过包括以下步骤的方法制备富集胎儿细胞的样品:提供母体样品；使母体样品与对一种或多种糖具有亲和力的第一固定相接触；将本文档来自技高网...

【技术保护点】
从母体样品获得富集胎儿细胞的样品的方法，其包括：提供母体样品；使所述母体样品与对一种或多种糖具有亲和力的第一固定相接触；将结合第一固定相的母体样品的组分与不结合第一固定相的母体样品的组分分离；保留结合第一固定相的母体样品的组分；使所述母体样品与对基质金属蛋白酶14具有亲和力的可分离地标记的亲和分子相接触；将结合可分离地标记的亲和分子的母体样品的组分与不结合可分离地标记的亲和分子的母体样品的组分分离；以及保留结合可分离地标记的亲和分子的母体样品的组分，从而提供富集胎儿细胞的样品。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴涵，陈帆青，
申请(专利权)人：百世嘉上海医疗技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31