本发明专利技术一方面提供了一种有核红细胞模拟粒子，该粒子为结合了荧光染色抑制剂的白细胞，该抑制剂与细胞内的细胞核或核酸稳定结合，从而降低该粒子在检测时与荧光染料的结合能力。本发明专利技术另一方面提供了一种有核红细胞模拟粒子的制备方法，所述方法步骤包括以下步骤：(a)获得洗涤纯化后的白细胞；(b)将白细胞悬浮于含有荧光染色抑制剂的细胞处理液中，所述抑制剂与细胞内的细胞核或核酸稳定结合；(c)对所得产物进行洗涤。本发明专利技术还提供一种含有有核红细胞模拟粒子的血液质控物。本发明专利技术还提供了有核红细胞模拟粒子及其血液质控物在血液细胞分析仪质控中的用途。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及血液分析质控物。具体地讲，本专利技术涉及有核红细胞模拟粒子，包含所 述有核红细胞模拟粒子的血液质控物，以及它们的制备方法，和所述有核红细胞模拟粒子 和质控物在以荧光-散射光法为检测原理的血液细胞分析仪质量控制上的用途。
技术介绍
人类正常成熟红细胞不含有细胞核。但在特殊情况，包括某些病理情况下，人类外 周血中会出现有核红细胞(nucleated red bloodcell, NRBC，也称为erythroblast)，即一 种幼稚的红细胞。对有核红细胞的检测可以为某些疾病的诊断提供依据。部分高端血液细 胞分析仪配备有核红细胞检测功能，其检测原理包括阻抗法、荧光-散射法等。对配备有核红细胞检测功能的血液细胞分析仪进行质量控制，需要使用含有有核 红细胞模拟粒子的质控物。在有核红细胞模拟粒子的制备方面，已有一些公开的技术方案。美国专利US7176031和US696^17公开了使用人工合成粒子模拟人有核红细胞的 方法。这种方法的缺陷在于合成粒子的生产工艺复杂，成本较高。美国专利US73M767公 开了使用普通哺乳动物红细胞(不含细胞核)制备有核红细胞模拟粒子的方法。这种方法 制备的模拟粒子与人有核红细胞的细胞核大小接近，适用于采用阻抗法检测有核红细胞的 血液细胞分析仪。但这种模拟粒子不含细胞核，不适于模拟人有核红细胞被特定荧光染料 染色后的荧光特性。美国专利US7195919公开的技术方案通过在红细胞表面连接生物大分 子(如核酸、肽链等)，使其能够模拟人有核红细胞的荧光特性。这种方法的不足之处在 于工艺复杂，且作为原料的生物大分子成本较高。美国专利US6723563和US6653137提出用鸟类(如火鸡或鸡)、爬行类(如短吻 鳄)或鱼类(如鲑鱼)的红细胞为原料制备有核红细胞模拟粒子。美国专利US6406915、 US6403377、US6399388、US6221668和US6200500公开了使用火鸡红细胞制备有核红细胞模 拟粒子的方法。美国专利US6448085公开了使用鸡红细胞制备有核红细胞模拟粒子的方 法。美国专利US6187590和US5858790公开了使用火鸡、鸡和鲑鳟类鱼的红细胞制备有核 红细胞模拟粒子的方法。美国专利US7285417、US7135341和US7198953公开了使用短吻 鳄红细胞制备有核红细胞模拟粒子的方法。这些技术方案的共同点是使用带有细胞核的 动物红细胞，包括鸟类、爬行类和鱼类的红细胞模拟人有核红细胞。这种方法的不足之处在 于，绝大多数鸟类、爬行类和鱼类的红细胞呈椭圆形，与近圆形的人类有核红细胞形态差异 较大。因此在某些情况下，这些动物有核红细胞并不能很好的模拟人有核红细胞的特征。例 如，运用流式细胞术对细胞进行检测时，椭圆形细胞通过流动室方向不一致，因而产生大小 差异很大的前向散射光信号，而圆形或近圆形细胞则不会出现这种状况。因此，本领域需要采用简单、经济的方法获得的更好模拟效果的有核红细胞模拟 粒子，特别是适用于荧光-散射光法为检测原理的细胞血液分析仪质量控制的有核红细胞 模拟粒子。
技术实现思路
本专利技术一方面提供了一种有核红细胞模拟粒子，所述粒子为结合了荧光染色抑制 剂的白细胞或白细胞亚群，所述抑制剂与细胞的细胞核或核酸稳定结合，降低所述粒子在 检测时与荧光染料的结合能力。所述荧光染色抑制剂选自非荧光的染料，荧光量子产率比检测用荧光染料的荧光量子产率低的荧光染料，荧光光谱与检测用荧光染料的荧光光谱差别大的荧光染料，和能与核苷结合的化合物。本专利技术另一方面提供了一种血液质控物，所述质控物包含本专利技术所提供的有核红 细胞模拟粒子。本专利技术又一方面提供了一种有核红细胞模拟粒子的制备方法，所述方法包括，富集含有白细胞的血液中的白细胞或白细胞亚群，将得到的白细胞或白细胞亚群悬浮于含有荧光染色抑制剂的细胞处理液中，所述 抑制剂与细胞的细胞核或核酸稳定结合，对所得产物进行洗涤。所述荧光染色抑制剂选自非荧光染料、荧光量子产率比检测用荧光染料的荧光量 子产率低的荧光染料、荧光光谱与检测用荧光染料的荧光光谱差别大的荧光染料和能与核 苷结合的化合物。本专利技术还一方面提供了一种血液质控物的制备方法，将本专利技术所提供的有核红细 胞模拟粒子与其他血液细胞模拟物，如白细胞、红细胞、血小板等的一种或几种混合与细胞 保存液中。本专利技术再一方面涉及有核红细胞模拟粒子和质控物在血液细胞分析仪质量控制 中的应用。还涉及了本专利技术所提供的荧光染色抑制剂在制备有核红细胞模拟粒子中的应用。本专利技术所公开的方法采用白细胞或白细胞亚群经荧光染色抑制剂处理后模拟有 核红细胞，更好地模拟人有核红细胞的特征，且不必使用核酸或类似生物多聚物，步骤简 单，成本低廉，可方便地实现血液质控物的工业化生产。附图说明图1是含有有核红细胞的临床血样的散点图(仅提供有核红细胞通道)，图中横轴 表示侧向荧光强度，纵轴表示前向散射光强度。图2是实施例1中未经染色的白细胞散点图(仅提供有核红细胞通道)，A为白细 胞区域。图中横轴表示侧向荧光强度，纵轴表示前向散射光强度。图3是实施例1中经甲苯胺蓝0染色的白细胞散点图(仅提供有核红细胞通道)， A为白细胞区域，B为有核红细胞区域。图中横轴表示侧向荧光强度，纵轴表示前向散射光 强度。图4是实施例2中未经染色的粒细胞散点图(仅提供有核红细胞通道)。图中横 轴表示侧向荧光强度，纵轴表示前向散射光强度。图5是实施例2经瑞氏染色的粒细胞散点图(仅提供有核红细胞通道)。图中横 轴表示侧向荧光强度，纵轴表示前向散射光强度。图6的是实施例2中未经染色的粒细胞和经瑞氏染色的粒细胞混合物的散点图 (仅提供有核红细胞通道)。图中横轴表示侧向荧光强度，纵轴表示前向散射光强度。图7是实施例3中经中性红染色的粒细胞散点图(仅提供有核红细胞通道)。图 中横轴表示侧向荧光强度，纵轴表示前向散射光强度。图8是实施例3中未经染色的粒细胞和经中性红染色的粒细胞混合物的散点图 (仅提供有核红细胞通道)，图中横轴表示侧向荧光强度，纵轴表示前向散射光强度。图9是实施例4中未经染色的粒细胞和经吖啶橙染色的粒细胞混合物的散点图 (仅提供有核红细胞通道)，图中横轴表示侧向荧光强度，纵轴表示前向散射光强度。具体实施例方式本专利技术的其它方面和优点在阅读以下描述和具体实施方案后将变得显而易见。有核红细胞樽拟粒子本专利技术一个实施方案提供了 一种有核红细胞模拟粒子。所述有核红细胞模拟粒子 为结合了荧光染色抑制剂的白细胞或白细胞亚群，细胞的细胞核或核酸与所述抑制剂稳定 结合，降低所述粒子在检测时与荧光染料的结合能力；所述抑制剂选自非荧光的染料、比检 测用荧光染料的荧光量子产率低的荧光染料、与检测用荧光染料的荧光光谱差别大的荧光 染料和能与核苷结合的化合物。所述有核红细胞模拟粒子适用于荧光-散射光法检测有核 红细胞的血液细胞分析仪。一般来说，荧光-散射光法检测有核红细胞的步骤包括用一定的溶血剂和检测 用荧光染料处理血液，使红细胞溶解，而白细胞和有核红细胞与检测用荧光染料结合，被染 色。用流式细胞术对染色后的细胞进行检测，根据荧光强度和散射光强度信号，可以将有核 红细胞同白细胞区分开，实现对有核红细胞的计数。例如，申请号为20081021^67. 2的中 国发本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种有核红细胞模拟粒子，其特征在于：所述粒子为结合了荧光染色抑制剂的白细胞或白细胞亚群，所述抑制剂与细胞的细胞核或核酸稳定结合，降低所述粒子在检测时与荧光染料的结合能力。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：邓橙，徐祖越，刘鹤，
申请(专利权)人：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，
类型：发明
国别省市：94
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