本发明专利技术属于生物检测技术领域，具体涉及一种SLCO1B1 521T>C的检测引物，所述检测引物如下：正向外侧引物F3T：SEQ ID NO:1；反向外侧引物B3T：SEQ ID NO:2；正向内侧引物FIPT：SEQ ID NO:3；反向内侧引物BIPT：SEQ ID NO:4；正向外侧引物F3C：SEQ ID NO:5；反向外侧引物B3C：SEQ ID NO:6；正向内侧引物FIPC：SEQ ID NO:7；反向内侧引物BIPC：SEQ ID NO:8。本发明专利技术步骤简单、扩增反应快速、高效、特异性高、鉴定简便，使该技术有着更广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测
，具体设及一种化C01B1 521T乂的检测引物及其 组合物。
技术介绍
由SLC01B1基因编码的有机阴离子转运多肤1B1 (0ATP1B1，又称0ATP-C、0ATP2或 LST1)，在肝细胞摄取和清除内源性和外源性物质如胆汁酸、非结合型胆红素、甲状腺素、他 汀类药物、瑞格列奈、依那普利拉、替莫普利、鄉沙坦、奥美沙坦、甲氨蝶岭和伊立替康活性 代谢产物SN-38等中发挥重要作用。该基因第5外显子521T乂(rs4149056,Vall74Ala) 多态性是亚洲人群中的主要遗传变异，等位基因频率为10~15%，携带521C等位基因的 SLC01B1所编码的0ATP1B1会显著降低其对底物的摄取能力，使他汀类药物如普伐他汀、阿 托伐他汀和罗苏伐他汀等的血药浓度升高。他汀类药物的严重不良反应包括肝功能下降和 横纹肌溶解症等。因此，携带521C等位基因的患者应用辛伐他汀、西立伐他汀时肌病的发 生风险显著增加。为降低他汀类药物严重不良反应的发生风险，《药物代谢酶和药物作用祀 点基因检测技术指南（试行）》中也建议"临床上根据化C01B1基因型选择他汀类药物进行 治疗。" 现阶段用来检测rs4149056位点的方法有很多，主要集中于PCR-直接测序法、 化qman巧光PCR法、HRM法、核酸杂交法等等，运些方法虽然都能W相对较短的时间准确得 检测rs4149056,但是都需要依赖比较昂贵的仪器和/或试剂，其中测序法操作耗时长且 灵敏度低；高分辨率溶解曲线法（HRM法）对设备要求较高，临床推广存在一定的困难；传 统巧光定量PCR法在临床上应用较为广泛，但该方法对样本数量W及多态性分布有一定要 求，样本量少时不能准确检测。CN102021239A公开了一种化C01B1基因SNP检测特异性引 物和液相忍片，然而运种方法不仅操作繁琐，检测耗时较长，还需要昂贵的检测设备。因此 运些方法都比较难W广泛推广开来，尤其是在偏远的经济欠发达地区。然而，从目前来看， 运种检测需求又非常巨大，因此，有必要寻求一种检测方法，既能做到费用低廉，又能实现 快速准确得检测。 环介导的等溫扩增（LAM巧技术是日本科学家于2000年提出的一种等溫扩增技 术，其主要特点是针对祀基因的6个区域设计4条特异引物，在链置换DNA聚合酶度StDNA polymerase)的作用下进行恒溫扩增，仅需15-90分钟即可产生109-10"数量级的产物。具 有敏感性高、特异性好、操作简便、成本低廉且结果易于判定的优点。
技术实现思路
本专利技术为了克服上述方法的缺陷，提供一种化C01B1 521T乂的检测引物及其组 合物，具有敏感性高、特异性好和操作简便等优点。 为达到此专利技术的目的，本专利技术采用W下技术方案： 第一方面，本专利技术提供一种化C01B1基因的检测引物组，所述检测引物组如下： 正向外侧引物F3T:沈QIDNO: 1 :TAAGTAGAATAATTAAGAGTTTACAAGT; 反向外侧引物B3T:沈QIDN0:2 :CCTTCTTTAGCGAAATCATCAA; 正向内侧引物FIPT:SEQIDN0:3:GACCCAGATTCCTTTAMCAACCTATGTGCTAAAATTMT GTTTAAAATGAAACACTC； 反向内侧引物BIPT:SEQIDN0:4:TGGTCATGGGTAATATGCTTCGTGGTMGAAAGCCCCMT GGTACT； 正向外侧引物F3C:沈QIDN0:5 :AGTAGTTAAATTTGTAATAGAAATGCTA; 反向外侧引物B3C:沈QIDN0:6 :CAATTTAATATTTTGTGTACATTACCTAA; 正向内侧引物FIPC:SEQIDN0:7:GCCTATATCCACATGTATGACCCAGATTAAAATGAAACAC TCTCTTATCTACATAGG； 反向内侧引物BIPC:SEQIDN0:8:CTTCGTGGAATAGGGGAGACTCAAGAAGAATGTCCTTCTT TAGCGo 优选地，所述SEQIDN0:l-4所示的序列是用于检测rs4149056 位点的T等位基 因。 优选地，所述SEQIDNO:5-8所示的序列是用于检测rs4149056位点的C等位基 因。[001引本专利技术中，4条引物的外侧引物记为正向外侧引物F3和反向外侧引物B3,内侧引 物记为正向内侧引物FIP和反向内侧引物BIP，其中FIP包含了Flc和F2,BIP包含了Blc 和B2,上述引物均由在线软件PrimerE邱lorerV4设计。本专利技术在普通LAMP的基础上，W 特异性要求最严格的Flc或Blc的5'端针对rs4149056位点设计等位基因特异引物，分别 检测rs4149056的C等位基因和rs4149056的T等位基因。通过分别在BIPT和FIPC的5' 端第Ξ位引进额外突变，进一步降低非特异性扩增的可能性。 第二方面，本专利技术提供一种检测化C01B1基因的反应体系，所述反应体系包括第 一方面所述的引物组，反应缓冲液，dNTPs，径基糞酪蓝，甜菜碱，BstDNA聚合酶，待检样品 基因组DNA和去离子水。 优选地，所述反应缓冲液包括Tris-肥1，KC1，（畑4)25〇4,Μ拆〇4和Tween-20。 优选地，所述Tris-肥1的浓度为10-30mM，例如可W是10mM、llmM、12mM、13mM、 15mM、16mM、18mM、20mM、22mM、23mM、25mM、26mM、28mM或 30mM，优选为 15-25mM，进一步优选 为 20mM。 优选地，所述KCl的浓度为 10-60mM，例如可W是 10mM、llmM、12mM、15mM、18mM、 20mM、23mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM、51mM、52mM、53mM、54mM、55mM或 60mM，优选 为50-55mM，进一步优选为50mM。[002引 优选地，所述（畑4)2504的浓度为5-13mM，例如可W是5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、 或 13mM，优选为 8-12mM，进一步优选为lOmM。 优选地，所述Μ拆〇4的浓度为2-8mM，例如可W是2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM或 8mM，优选为2-6mM，进一步优选为4mM。[002引优选地，所述Tween-20的体积分数为0. 1-1%，例如可W是0. !%、0. 2%、0. 3%、 0. 4%、0. 5%、0. 6%、0. 7%、0. 8%、0. 9%或 1%，优选为 0. 1%。优选地，所述dNTPs的浓度为l-2mM，例如可W是 2mM、l. 3mM、l. 4mM、 1. 5mM、1. 6mM、1. 7mM、1. 8mM、1. 9mM或 2mM，优选为 1. 2-1. 8mM，进一步优选为 1. 4mM。 优选地，所述径基糞酪蓝的浓度为108-130μΜ，例如可W是108μΜ、109μΜ、 110μΜ、111μΜ、112μΜ、115μΜ、116μΜ、118μΜ、120μΜ、122μΜ、125μΜ、126μΜ、128μΜ 或130μΜ，优选为115-123μΜ，进一步优选为120本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种SLCO1B1521T>C的检测引物，其特征在于，所述检测引物组如下：正向外侧引物F3T：SEQ ID NO:1；反向外侧引物B3T：SEQ ID NO:2；正向内侧引物FIPT：SEQ ID NO:3；反向内侧引物BIPT：SEQ ID NO:4；正向外侧引物F3C：SEQ ID NO:5；反向外侧引物B3C：SEQ ID NO:6；正向内侧引物FIPC：SEQ ID NO:7；反向内侧引物BIPC：SEQ ID NO:8。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：汪大为，
申请(专利权)人：北京晋祺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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