一种蜜蜂人工授精的缓冲液及其制备方法技术

本发明专利技术属于动物遗传育种领域，公开了一种蜜蜂人工授精的缓冲液、其制备方法以及利用所述的缓冲液进行蜜蜂人工授精的方法。本发明专利技术所述蜜蜂人工授精的缓冲液包括氯化钠、氯化钾、氯化钙、葡萄糖和水，配方简单、稳定性好，且流动性好不易堵塞吸头，对精子活力影响小。本发明专利技术所述蜜蜂人工授精的缓冲液取氯化钠、氯化钾、氯化钙和葡萄糖，加水溶解后定容即得，配制方法简单，配置成本低、时间短。采用本发明专利技术所述缓冲液进行人工授精可以降低缓冲液对精子活力的影响，有效保证雄蜂精液在注射期间的活力不下降，提高蜜蜂人工授精的成功率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于动物遗传育种领域，具体涉及蜜蜂人工授精的缓冲液，同时还涉及了 利用所述蜜蜂人工授精的缓冲液进行蜜蜂人工授精的方法。
技术介绍
蜜蜂是社会性昆虫群体，蜜蜂群体中具有同一性别但有不同的形态、身体结构、智 能和行为的个体类型，称为级型分化。在蜜蜂生物学上的级型指同属于雌性的蜂王和工蜂 两种类型。蜜蜂雌性的不同级型与其主要的职能分工有关，蜂王专司产卵，工蜂负责护理幼 虫、供给食物，但是没有生育能力。蜂王是由受精卵发育而成的生殖器官发育完全的雌蜂， 具有二倍染色体，在蜂群中专司产卵。但是蜜蜂还具有孤雌生殖的能力，未经交配的蜂王可 以产生雄性后代，即雄蜂。处女王是羽化后但未经交配的蜂王，即蜂王未交配前称为处女 王。而雄蜂是由未受精卵发育而成的蜜蜂，具有单倍染色体。雄蜂无采集能力，食物都是巢 内已有的，它的职能主要是在巢外空中与婚飞的处女王交配。 根据蜜蜂生物遗传育种原理，利用人工的方法诱导蜂群，在蜜粉源丰富、气候温暖 的季节，可以有计划、大规模地培育优质雄蜂，采集雄蜂精液，进行保存。除蜂王雄蜂自然交 配外，可以大量采集雄蜂精液进行人工授精，通过雄蜂精液的保存，在非蜜粉季进行处女王 的人工授精工作，或是在不同的地区采集雄蜂精液，返回驻地为特定地区的处女蜂王进行 人工授精，达到优良蜜蜂遗传物质的传递及融合。 蜜蜂人工授精技术在1927年取得成功，中国开展该项技术的研究始于1959年，20 世纪80年代后，已达到国际先进水平，利用该技术取得了单雄受精、单雄多雌受精和自体 受精的新突破。当前，蜜蜂的人工授精技术，在原种保纯、杂交制种乃至工程育种中起到了 不可替代的作用。 目前蜜蜂人工授精分为两种：1 :直接受精法，即累计采集多只雄蜂精液进行人工 授精注射；2 :漂洗受精法，即将累计采集的雄蜂精液置于缓冲液进行稀释、漂洗后进行人 工授精注射。目前通常采用第一种方法，即直接受精法。采用该方法无需将雄蜂精液置于 缓冲液进行稀释、漂洗，注射的精液为全部的采集精液，缓冲液的作用相对下降，缓冲液对 精液中精子的活力的影响大大减少。但在直接受精法中仍需要缓冲液用于清洗针管、吸头， 隔离空气与吸头内的精液接触，以免吸头内的精液干涸。 目前蜜蜂人工授精的缓冲液配方较多且各有不同，但都容易迅速变干，稳定性差， 且较为粘稠，容易发生吸头堵塞，影响精液的活力及蜜蜂人工授精的成功率。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于针对现有技术存在的缺陷提供一种蜜蜂人工授精的 缓冲液及其制备方法。为实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案： -种蜜蜂人工授精的缓冲液，包括氯化钠、氯化钾、氯化钙、葡萄糖和水。 本专利技术所述蜜蜂人工授精的缓冲液，配方简单、稳定性好，且流动性好不易堵塞吸 头，对精子活力影响小。 在一些实施方案中，本专利技术所述的缓冲液，每100ml缓冲液中含有： NaCl 0J g -2 g KCi 0.01 g -0.05 g CaCI2 0.01 g -0.05 g 葡萄糖 ：0.2g-0:Jg 水： 余量s 在一些优选实施方案中，本专利技术所述的缓冲液，每100ml缓冲液中含有： NaCl 0.850 g KCI 0.025 g CaCI2 0.030 g 葡萄糖 0.500 g 水 余量。. 本专利技术还提供了所述蜜蜂人工授精的缓冲液的制备方法，分别称取氯化钠、氯化 钾、氯化钙和葡萄糖，加水溶解后定容。 本专利技术所述蜜蜂人工授精的缓冲液中含有葡萄糖，无需高温消毒，可以显著缩短 配置时间。 本领域技术人员可以理解，本专利技术所述蜜蜂人工授精的缓冲液中的水优选为超纯 水。 本专利技术所述蜜蜂人工授精的缓冲液优选现用现配。 在某一具体实施例中，本专利技术应用本专利技术所述蜜蜂人工授精的缓冲液进行蜜蜂 人工授精，结果显示本专利技术所述缓冲液可以降低缓冲液对精子活力的影响，有效保证雄 蜂精液在注射期间的活力不下降，减少对蜂王的伤害，有效提高蜜蜂人工授精的成功率 7% -10%。因此，本专利技术还提供了所述蜜蜂人工授精的缓冲液在提高蜜蜂人工授精成功率 中的应用。 本专利技术还提供了一种蜜蜂人工授精的方法，利用本专利技术所述蜜蜂人工授精的缓冲 液与雄蜂精液相接触，形成缓冲液-雄蜂精液-缓冲液三相系统来采集雄蜂精液；然后利用 三相系统中的雄蜂精液对处女王进行人工授精。 所述缓冲液-雄蜂精液-缓冲液三相系统具体是指雄蜂精液在进样器中间，两侧 为本专利技术所述蜜蜂人工授精的缓冲液，雄蜂精液通过本专利技术所述蜜蜂人工授精的缓冲液与 空气隔绝，可以防止精液干涸或受到污染，保证雄蜂精液在注射期间的活力不下降。同时， 本专利技术所述蜜蜂人工授精的缓冲液还可润滑进样器，保证人工受精过程中，精液注射过程 流畅，缩短注射时间，减少针头在蜂王体内停留时间，降低对蜂王的损伤。 在一些具体实施例中，所述采集雄蜂精液的具体操作为先将进样器针头吸入少许 本专利技术所述蜜蜂人工授精的缓冲液和气泡，然后右手操纵进样器，使针头与精液接触后稍 微拉开点距离，但二者并不断开，借助于精液本身的粘滞性把覆盖在白色粘液上的土黄色 精液较完全地抽吸进针头，然后继续采集其它雄蜂的精液，待进样器针头内贮满所需精液 量后，用本专利技术所述蜜蜂人工授精的缓冲液封闭针头。 其中，值得注意的是，在本专利技术所述蜜蜂人工授精的方法中采集雄蜂时精液每2 只雄蜂的精液间应避免出现气泡。 进一步的，在一些实施例中，本专利技术所述蜜蜂人工授精的方法采集完精液的进样 器用浸过抗生素的棉签擦进样器针头，可将针头外侧粘附杂物，避免雄蜂精液以及处女王 受到污染。 本领域技术人员可以理解，本专利技术所述用于人工授精的雄蜂精液采用强迫性成熟 的雄蜂排精获得。 通常雄蜂出房12天后，即达性成熟，便可捕捉采精。性成熟雄蜂的捕捉方法包括： 利用颜色标记雄蜂日龄法、巢内直接选择性成熟雄蜂法、巢门捕捉婚飞雄蜂法和捕捉幽闭 饲养雄蜂法等。目前用于人工授精的雄蜂的标准要求雄蜂种纯、个大、健壮、活跃和性成熟。 而所述强迫雄蜂排精的具体方法为：用左手拇指和食指从腹面捉住胸、腹部两侧， 用右手拇指按压雄蜂的腹部背板1节~3节处，然后三指配合，同时向腹部尾端施加压力， 强迫"阴茎"外翻并射精。在强迫雄蜂排精时需要注意用力适度，以保精液在"阴茎"顶端 形成近球状，以利采集且不易被污染。 本专利技术所述蜜蜂人工授精的方法中所述人工授精的具体操作为打开处女王的螫 针腔，调整处女王和含有雄蜂精液进样器的针头的角度，排除进样器针头尖中的缓冲液和 气泡后，使进样器针尖接近阴道口，用探针压住瓣突，将进样器针尖徐徐推入阴道直至中部 输卵管，取出探针，将精液慢慢注入。 其中，一次性授精通常注入8 μ L精液。两次性授精，每次各注4 μ L~5 μ L精液， 两次间隔24小时~48小时。授精完毕，10秒~15秒后退出针头，取出蜂王，点上标记，待 其复苏后，送回原核心群或框式王笼暂时贮存。 处女王的质量关系到人工授精的效果和新建蜂群的质量。用于人工授精的处女王 要求个体大、腹部硕长、无残损、行动稳健、性成熟。 本专利技术所述蜜蜂人工授精的方法中所述人工授精需要先打开处女王的螫针腔。而 打开处女王的螫针腔的具体方法为：处女王麻醉后，调整显微镜，在镜下移动背腹钩操纵 杆，使背腹钩在探针配合下，分别钩住背腹板顶端的中央位置，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蜜蜂人工授精的缓冲液，包括氯化钠、氯化钾、氯化钙、葡萄糖和水。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘之光，石巍，郭海坤，陈超，陈晓，王慧华，
申请(专利权)人：中国农业科学院蜜蜂研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11