本发明专利技术公开了艾滋病感染者HLA-A2特异性CTL细胞的体外培养方法及其专用培养基。本发明专利技术提供的体外扩增艾滋病感染者HLA-A2特异性CTL细胞的成套培养基由培养基1和培养基2组成；培养基1和培养基2均为哺乳动物细胞无血清培养基，培养基1含有氨基酸序列分别如SEQ ID No.1-SEQ ID No.9所示的9种多肽，培养基2含有白细胞介素2。采用本发明专利技术的成套培养基及体外培养方法能够将分离的不同艾滋病感染者HLA-A2特异性CTL细胞成功进行扩增培养，获得的细胞活性比较稳定，细胞总数显著增加，可高效识别和溶解患者自体HIV感染后的CD4+T细胞，对于艾滋病的治疗具有重要的意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及免疫治疗领域中艾滋病感染者HLA-A2特异性CTL细胞的体外培养方 法及其专用培养基。
技术介绍
艾滋病是严重威胁人类生命健康的全球性疾病，尽管抗病毒治疗的出现显著降低 了艾滋病患者的发病率和死亡率，然而，抗病毒治疗要求终身服药，且需达到95%的依从 性，在医疗资源不发达国家和地区可谓是一项沉重的负担。因此，寻找根治艾滋病的脚步从 未停止。 过继性细胞免疫治疗自20世纪80年代开始，过继性细胞免疫治疗在临床上的应 用迅速扩展。近年来，WT细胞为基础的过继性细胞免疫治疗技术已广泛用于恶性肿瘤及 肿瘤转移患者的治疗，具有较好的安全性和有效性。 细胞毒性T细胞（巧totoxicT-lympho^te，CTL)为一种特异T细胞，专口分泌各 种细胞因子参与免疫作用，对某些病毒、肿瘤细胞等抗原物质具有杀伤作用，与自然细胞构 成机体抗病毒、抗肿瘤免疫的重要防线。它的作用特点：可连续杀伤祀细胞，具有高效性，抗 原特异性和自身MHC限制性。HIV特异性CD8+T细胞与HIV病毒载量下降直接相关，尤其是 急性感染期的后期，病毒载量迅速下降的过程中，CD8+T细胞起到最重要的作用，体外实验 中经IFN- 丫分泌实验和tetramer染色可见HIV感染者的CD8巧细胞具有特异的抗病毒作 用。从精英控制者（elitecontroller)和自体免疫力能长期将病毒载量控制在调定点水 平的病人外周血获得的细胞毒性T淋己细胞，在体外实验中，不经HIV抗原预先刺激，即可 高效识别和溶解其自体HIV感染后的CD4巧细胞。CTL细胞免疫传输疗法是利用自身静脉血的淋己细胞，在体外通过祀细胞抗原和 淋己因子的诱导，分化扩增成具有强大杀伤力的CTL细胞，再经静脉回输体内，从而有效的 发挥免疫效应，达到清除病毒和杀伤肿瘤细胞的作用。CTL细胞疗法主要应用于乙肝、丙肝 和肿瘤的治疗。CD3分子分布于成熟T淋己细胞表面，至少由丫、5、e、C和n5种多肤链 组成，与T细胞抗原受体非共价连接。CD3单克隆抗体可诱导CD3多肤和TCR共帽形成 (co-capping)，并诱导T淋己细胞活化。TCR识别外来抗原与自身WIC分子形成的复合物， CD3对于信号的传递具有重要作用。 CD8分子分布于部分T淋己细胞和胸腺细胞，是由a和P两条多肤链组成的穿膜 糖蛋白。作为细胞与细胞间的附粘分子血1CI类抗原是CD8分子的配体，CD8分子与血1CI 类抗原结合可W稳定血1CI类抗原限制的T细胞（主要是CTL)与带有血1CI类抗原与抗原 复合物的祀细胞结合。CD8阳性细胞为抑制性T淋己细胞/杀伤性T淋己细胞（suppressor Tlympho巧te/c}ftotoxicTlympho巧te,Ts/Tc)。CD8分子在T细胞增殖和分化的信号转 导中起重要作用。 干扰素（IFN)是一种广谱抗病毒剂，并不直接杀伤或抑制病毒，而主要是通过细 胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制病毒的复制，其类型分为=类，a-(白细 胞）型、6-(成纤维细胞）型和T-(淋己细胞）型；同时还可增强自然杀伤细胞（NK细 胞）、巨隧细胞和T淋己细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力。干扰素是 一组具有多种功能的活性蛋白质（主要是糖蛋白），是一种由单核细胞和淋己细胞产生的 细胞因子，它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长分化及调节免疫功能等多 种生物活性。 人类白细胞抗原化umanleuko巧teantigen，HLA)是人类的主要组织相容性复合 体，位于6号染色体上，分为HLA-I类分子和HLA-II类分子，与人类的免疫系统功能密切相 关。研究认为抗原提呈细胞表面的HLA分子是影响HIV特异性CTL的关键因素，不同的HLA 分子与疾病进展显著相关。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何进行艾滋病感染者HLA-A2特异性CTL细胞的 体外扩增培养。 为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了体外扩增艾滋病感染者HLA-A2特异性 CTL细胞的成套培养基。 本专利技术所提供的体外扩增艾滋病感染者HLA-A2特异性CTL细胞的成套培养基，由 成套使用的培养基1和培养基2组成；所述培养基1和所述培养基2均为哺乳动物细胞无 血清培养基，所述培养基1含有氨基酸序列分别如SEQIDNo. 1-SEQIDNo. 9所示的9种 多肤，所述培养基2含有白细胞介素2。 上述成套培养基中，多肤1的氨基酸序列如SEQIDNo. 1所示；多肤2的氨基酸序 列如SEQIDNo. 2所示；多肤3的氨基酸序列如SEQIDNo. 3所示；多肤4的氨基酸序列如 SEQIDNo. 4所示；多肤5的氨基酸序列如SEQIDNo. 5所示；多肤6的氨基酸序列如SEQ IDNo. 6所示；多肤7的氨基酸序列如SEQIDNo. 7所示；多肤8的氨基酸序列如SEQID No. 8所示；多肤9的氨基酸序列如SEQIDNo. 9所示。 本专利技术所提供的体外扩增艾滋病感染者HLA-A2特异性CTL细胞的成套培养基，分 为便于存放的胆存型培养基和由所述胆存型培养基和水配成的即用型培养基。 上述成套培养基中的所述胆存型培养基可为：所述培养基1中所述9种多肤的含 量满足所述9种多肤中的每种多肤的使用浓度均为2yg/mL;所述培养基2中白细胞介素2 的含量满足白细胞介素2的使用浓度为500U/mL。 上述成套培养基中的即用型培养基可为：所述培养基1中所述9种多肤的每种多 肤的含量均为2yg/mL;所述培养基2中白细胞介素2的含量为500U/mL。 上述成套培养基中，所述培养基1是在MD-CM-STM-N培养基中添加所述9种多肤 得到的液体培养基，所述培养基2是在IMSF100培养基中添加白细胞介素2得到的液体培 养基。 为解决上述技术问题，本专利技术还提供了体外扩增艾滋病感染者HLA-A2特异性CTL 细胞的产品。 本专利技术所提供的体外扩增艾滋病感染者HLA-A2特异性CTL细胞的产品，包括上述 成套培养基和HLA-A2阳性的艾滋病感染者的离体的外周血单个核细胞。 为解决上述技术问题，本专利技术还提供了下述A1或A2的制备方法：A1、上述成套培养基的制备方法，包括如下步骤：分别制备所述培养基1和所述培 养基2,再将所述培养基1和所述培养基2分别进行独立包装，得到所述成套培养基； A2、上述产品的制备方法，包括如下步骤：将上述成套培养基和所述HLA-A2阳性 的艾滋病感染者的离体的外周血单个核细胞分别进行单独包装，得到所述产品。 为解决上述技术问题，本专利技术还提供了体外扩增艾滋病感染者HLA-A2特异性CTL 细胞的组合物。 本专利技术所提供的体外扩增艾滋病感染者HLA-A2特异性CTL细胞的组合物，由SEQ IDNo. 1-SEQIDNo. 9所示的9种多肤组成，所述组合物中所述沈QIDNo. 1-SEQIDNo. 9 所示的9种多肤的质量比为1:1:1:1:1:1:1:1:1。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了体外扩增艾滋病感染者HLA-A2特异性CTL细胞的成套试剂。 本专利技术所提供的体外扩增艾滋病感染者HLA-A2特异性CTL细胞的成套试剂，由上 述组合物和白细胞介素2组成，所述组合物和白细胞介素2配套使用。 上述本文档来自技高网...
【技术保护点】
体外扩增艾滋病感染者HLA‑A2特异性CTL细胞的成套培养基，由成套使用的培养基1和培养基2组成；所述培养基1和所述培养基2均为哺乳动物细胞无血清培养基，所述培养基1含有氨基酸序列分别如SEQ ID No.1‑SEQ ID No.9所示的9种多肽，所述培养基2含有白细胞介素2。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙坚萍，张永宏，孙焕芹，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京佑安医院，
类型：发明
国别省市：北京;11
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