本发明专利技术属于生物技术和医学领域。涉及一种新的乙肝病毒感染者血清标志物。具体涉及可反映乙肝患者脏器炎症反应的血清标志物亲环素Ａ，其血清含量的测定方法，及其在慢性乙肝诊断和治疗中的用途。本发明专利技术通过Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ或ＥＬＩＳＡ方法检测血清ＣｙｐＡ蛋白的含量变化，经实验表明，所述的ＣｙｐＡ蛋白在慢性乙肝病人血清中显著升高，并与肝脏炎症反应相关，可作为一种无创伤性、简便、迅速的乙肝病程发展的血清标志物，进一步制备乙肝诊断试剂盒和抗病毒药物。建立的检测技术可用于乙肝感染者病程与预后的判断、疗效考核以及开发新型抗乙肝病毒药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术和医学领域。涉及一种新的乙肝病毒感染者血清标志物。 具体地说，本专利技术涉及可反映乙肝患者脏器炎症反应的血清标志物亲环素A(CyClophilin A, CypA)，其血清含量的测定方法，及其在慢性乙肝诊断和治疗中的用途。
技术介绍
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是一种常见的传染性疾病。据世界卫生组织统计，全球约有3.5亿人口由于无法清除病毒而发展为慢性携带者。随着病情的 发展，在这些持续性感染患者中，每年有超过100万人死于包括慢性活动性肝炎(chronic active hepatitis)、肝硬化(liver cirrhosis)及原发性肝癌(primary liver cancer)等在内的各类 由乙肝病毒感染引起的肝脏疾病。中国是乙肝病毒最为流行的地区之一，全国有6.9亿人 曾感染过乙肝病毒，其中1.2亿人长期携带乙肝病毒，据估计，目前全国有慢性乙肝病人 2000万人。乙肝病毒感染严重危害了人类的健康，同时也引发一系列社会问题，是我国 现阶段最为突出的公共卫生问题之一。目前国内外对乙肝病毒感染者诊断所采用的血清标志物均为乙肝病毒的蛋白抗 原及抗体(表面抗原及抗体，E抗原及抗体，核心抗体)，以及病毒的DNA。对于患者 的疾病是否活动则采用谷丙转氨酶水平作为指标。此外还根据病情需要可作肝组织活检 及超声波或其他仪器辅助的检测。乙肝病毒感染者血清中，除完整的成熟病毒颗粒外，能检测到大量由乙肝病毒 表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)组成的球形或管状亚病毒颗粒。在多数病 人血清中，HBsAg颗粒含量远远超过成熟病毒颗粒，HBsAg颗粒与病毒颗粒之比能高达 1000 1以上，甚至在检测不到病毒复制的情况下，HBsAg仍能持续大量存在。如此大 量且持续性表达病毒包膜蛋白是乙肝病毒独有的特性，因此目前已被公认为是感染乙肝 病毒的重要诊断指标。病人血清HBsAg持续阳性超过6个月仍未被清除即被认为罹患慢 性肝炎。此外，由于已知HBsAg诱生机体产生的抗体具有保护作用，因此HBsAg又是 制作预防性疫苗的主要组分。亲环素A(cyclophilinA，CypA)是免疫抑制剂环孢菌素(cyclosporing A，CsA)的受体，是免疫亲和素家族(immunophilin，即PPIase酶)中的一员，也是细胞内的一种 伴侣蛋白，可影响细胞蛋白的折叠。研究发现，CypA是一个多功能的细胞蛋白，参与了 多个重要的细胞生理活动，并在肿瘤发生、炎症反应的免疫调节、HIV病毒感染以及心 血管疾病等诸多方面都起到了重要的作用。近年来发现免疫亲和素家族中的CypB可作 用于丙型肝炎病毒NS5B亚基因片段，利用该基因片段作为药靶，已开发研制抗丙型肝炎 药物。HBsAg在细胞内表达具有多种效应。近来有研究发现HBsAg在细胞内的表达和 分泌能显著促进CypA的分泌。迄今，国内外尚无以CypA作为一种乙肝病毒感染者的血 清标志物。与本专利技术有关的文献Braaten, D.，and J.Luban.2001.Cyclophilin A regulates HIV—1 infectivity, asdemonstrated by gene targeting in human T cells.Embo J 20 1300—9.Castro, A.P., T.M.Carvalho, N.Moussatche, and C.R.Damaso.2003.Redistribution of cyclophilin A to viral factories during vaccinia virusinfection and its incorporation into mature particles.J Virol 77 9052-68.Jin, Z.G., M.G.Melaragno, D.F.Liao，C.Yan, J.Haendeler, Y.A.Suh, J.D.Lambeth, and B.C.Berk.2000.Cyclophilin A is a secreted growth factorinduced by oxidative stress.Circ Res 87 789-96Sokolskaja, E., D.M.Sayah, and J.Luban.2004.Target cell cyclophilin Amodulates human immunodeficiency virus type 1 infectivity.J Virol78 12800—8.Watashi, K., and K.Shimotohno.2007.Chemical genetics approach tohepatitis C virus replication cyclophilin as a target for anti-hepatitis C virusstrategy.Rev Med Virol 17 245—52Zhao, C., C.Y.Fang, X.C.Tian, L.Wang, P.Y.Yang, and Y.M.Wen.2007. Proteomic analysis of hepatitis B surface antigen positive transgenic mouseliver and decrease of cyclophilin A.J Med Virol 79 1478-8
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新的乙型肝炎病毒感染者血清标志物。尤其涉及可反 映乙肝患者脏器炎症反应的血清标志物亲环素A(CyClophilinA，CypA)，其血清含量的测定方法。由于CypA蛋白在乙肝病毒表面抗原的作用下可自细胞内分泌至细胞外，进入血 液，从而可以在感染者血清中检测CypA蛋白；鉴于细胞外的CypA蛋白具有吸引炎症细 胞的作用，因此血清中的CypA蛋白可反映感染者肝脏内炎症的严重程度。本专利技术建立 了在乙肝病毒感染机体的血清中检测CypA的方法，并进一步采用以CypA为血清标志物 为判断乙肝病情发展严重程度提供参考标准。本专利技术的进一步目的是提供CypA在研制慢性乙肝诊断制剂和治疗药物中的用途。本专利技术的进一步目的是提供一种慢性乙肝诊断试剂盒，该试剂盒包含针对抗亲 环素A的抗体和应用酶联免疫法(enzyme linked immunosorbant assay, ELISA)检测血清蛋白水平的试剂盒所含的常规组份。本专利技术所述的CypA蛋白，其对应的核苷酸序列以及氨基酸序列均可从公开发布的GenBank数据库中(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)获得，其核苷酸序列的收录号为 NM_021130.3，其氨基酸序列的收录号为NP_066953.1。本专利技术通过Western Blot或ELISA方法检测血清CypA蛋白的含量变化，其包括下述步骤1)采集标本采集慢性乙肝病人血液或者实验动物(小鼠)血液；2)分离血清室温8000转/分钟条件下，离心10分钟分离血清；3)检测血清CypA含量本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种乙型肝炎感染者血清标志物，其特征在于，其具有亲环素Ａ蛋白的氨基酸序列；其对应的核苷酸序列以及氨基酸序列为ＧｅｎＢａｎｋ数据库登录，其核苷酸序列的收录号为ＮＭ＿０２１１３０．３，其氨基酸序列的收录号为ＮＰ＿０６６９５３．１。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：田晓晨，闻玉梅，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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