皮肤与纤维化症候中的RNA干扰制造技术

本发明专利技术涉及皮肤与纤维化症候中的RNA干扰，特别涉及具有改进的组织与细胞吸收特征的RNAi构建体以及在皮肤应用以及纤维化应用方面使用这些复合物的方法。本发明专利技术提供一种包含正义链以及反义链的双链核糖核酸(dsRNA)，其中该反义链是与从表2、5、6、9、11、12、13、14、15、16、17以及23内的序列中选择的一种序列的至少12个连续核苷酸互补，并且其中该dsRNA是一种sd-rxRNA。

【技术实现步骤摘要】
皮肤与纤维化症候中的RNA干扰本申请是申请日为2011年3月24日的题为“皮肤与纤维化症候中的RNA干扰”的中国专利申请No.201180025724.6的分案申请。相关申请本申请根据35U.S.C.§119(e)要求于2010年3月24日提交的题目为“皮肤症候中的RNA干扰”(RNAINTERFERENCEINSKININDICATIONS)的美国临时申请号61/317,252以及于2010年3月25日提交的题目为“皮肤症候中的RNA干扰”(RNAINTERFERENCEINSKININDICATIONS)的美国临时申请号61/317,633的权益，其全部内容以其全文通过引用结合在此。专利
本专利技术涉及RNA干扰(RNAi)领域。本专利技术更具体地涉及具有改进的体内递送特性的核酸分子以及它们对于皮肤与纤维化症候的用途。专利技术背景互补寡核苷酸序列是前景光明的治疗剂以及在阐明基因功能方面的有用研究工具。然而，现有技术中寡核苷酸分子罹受一些问题，这些问题可以阻碍它们的临床开发，并且频繁地使得在体内使用此类组合物难以达到预期的有效的基因表达(包括蛋白合成)抑制。一个主要问题是这类化合物至细胞与组织的递送。常规的双链RNAi化合物(19-29个碱基长)形成一种高度带负电的大约1.5nm乘10-15nm大小的刚性螺旋。这种杆条式分子不能通过细胞膜并且结果是在体外以及体内具有极其有限的效能。结果，所有常规的RNAi化合物都要求某种类型的递送载体以促进其组织分布与细胞吸收。这被认为是RNAi技术的一个主要限制。已经存在许多尝试来对寡核苷酸应用化学修饰以改进其细胞吸收特性。此种修饰之一是将一种胆固醇分子附接至该寡核苷酸上。这种方法首先由Letsinger等人在1989年报道。之后，ISIS制药公司(ISISPharmaceuticals，Inc.)(卡尔斯巴德，加利福尼亚(Carlsbad，CA))报道了在将该胆固醇分子附接至该寡核苷酸方面的更先进的技术(Manoharan，1992)。随着九十年代后期siRNAs的发现，在这些分子上进行了类似类型的修饰以增强其递送特征曲线(profile)。在文献中出现了共轭至轻度修饰(Soutschek，2004)以及重度修饰(Wolfrum，2007)的siRNAs上的胆固醇分子。Yamada等人，2008还报道了进一步改进胆固醇介导的siRNAs吸收的高级连接物化学物质的用途。尽管所有这类努力，在生物流体的存在下这些类型的化合物的吸收似乎受到抑制，导致体内基因沉默的效能高度受限，由此限制了这些化合物在临床环境中的应用。专利技术概述在此描述了sd-rxRNA分子至皮肤的有效体内递送以及此类分子用于基因沉默的用途。这一类别的RNAi比前述RNAi分子具有优异的体外以及体内效能。与本专利技术相关的分子作为跟受损皮肤以及纤维化有关的失调或疾患的疗法具有广泛潜力。本专利技术的多个方面涉及包含正义链以及反义链的双链核糖核酸(dsRNA)，其中该反义链是与从表2、5、6、9、11、12、13、14、15、16、17以及23内的序列中选择的一种序列的至少12个连续核苷酸互补，并且其中该dsRNA是一种sd-rxRNA。本专利技术的另外的方面涉及包含正义链以及反义链的双链核糖核酸(dsRNA)，其中该正义链和/或该反义链包含从表1-27内的序列中选择的一种序列的至少12个连续核苷酸，并且其中该dsRNA是一种sd-rxRNA。本专利技术的另外的方面涉及包含正义链以及反义链的双链核糖核酸(dsRNA)，其中该反义链是与从表2、5、6、9、11、12、13、14、15、16、17以及23内的序列中选择的一种序列的至少12个连续核苷酸互补，并且其中该dsRNA是一种rxRNAori。本专利技术的另外的方面涉及包含正义链以及反义链的双链核糖核酸(dsRNA)，其中该正义链和/或该反义链包含从表1-27内的序列中选择的一种序列的至少12个连续核苷酸，并且其中该dsRNA是一种rxRNAori。在一些实施方案中，该dsRNA是针对CTGF。在一些实施方案中，该dsRNA的反义链是与从表11、12以及15内的序列中选择的一种序列的至少12个连续核苷酸互补。在一些实施方案中，该正义链和/或该反义链包含从表10、11、12、15、20以及24内的序列中选择的一种序列的至少12个连续核苷酸。在一些实施方案中，该正义链包含选自下组的一种序列的至少12个连续核苷酸，该组由以下项组成：SEQIDNOs：2463、3429、2443、3445、2459、3493、2465以及3469。在一些实施方案中，该反义链包含选自下组的一种序列的至少12个连续核苷酸，该组由以下项组成：2464、3430、4203、3446、2460、3494、2466以及3470。在某些实施方案中，该正义链包含SEQIDNO：2463并且该反义链包含SEQIDNO：2464。在某些实施方案中，该正义链包含SEQIDNO：3429并且该反义链包含SEQIDNO：3430。在某些实施方案中，该正义链包含SEQIDNO：2443并且该反义链包含SEQIDNO：4203。在某些实施方案中，该正义链包含SEQIDNO：3445并且该反义链包含SEQIDNO：3446。在某些实施方案中，该正义链包含SEQIDNO：2459并且该反义链包含SEQIDNO：2460。在某些实施方案中，该正义链包含SEQIDNO：3493并且该反义链包含SEQIDNO：3494。在某些实施方案中，该正义链包含SEQIDNO：2465并且该反义链包含SEQIDNO：2466。在某些实施方案中，该正义链包含SEQIDNO：3469并且该反义链包含SEQIDNO：3470。在一些实施方案中，该正义链包含选自下组的一种序列的至少12个连续核苷酸，该组由以下项组成：SEQIDNOs：1835、1847、1848以及1849。在某些实施方案中，该正义链包含一种选自下组的序列，该组由以下项组成：SEQIDNOs：1835、1847、1848以及1849。在一些实施方案中，该dsRNA是经疏水修饰。在某些实施方案中，该dsRNA是连接至一种疏水轭合物。本专利技术的多个方面涉及包含在此描述的dsRNA分子的组合物。在一些实施方案中，该组合物包含针对为多于一种的蛋白进行编码的多种基因的dsRNA。在一些实施方案中，该组合物是配制用于递送至皮肤。在某些实施方案中，该组合物是以一种中性配制品形式。在一些实施方案中，该组合物是配制用于局部递送或用于皮内注射。本专利技术的多个方面涉及包括以下的方法：将在此描述的任何dsRNA或包含在此描述的任何dsRNA的组合物递送至对其有需要的受试者的皮肤。本专利技术的多个方面涉及包括以下的方法：将一种治疗有效量的包含正义链以及反义链的双链核糖核酸(dsRNA)给予对其有需要的受试者，其中该反义链是与从表2、5、6、9、11、12、13、14、15、16、17以及23内的序列中选择的一种序列的至少12个连续核苷酸互补，并且其中该dsRNA是一种sd-rxRNA。本专利技术的另外的方面涉及包括以下的方法：将一种治疗有效量的包含正义链以及反义链的双链核糖核酸(dsRNA)给予对其有需要的受试者，其中该正义链本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含正义链以及反义链的双链核糖核酸(dsRNA)，其中该反义链是与从表2、5、6、9、11、12、13、14、15、16、17以及23内的序列中选择的一种序列的至少12个连续核苷酸互补，并且其中该dsRNA是一种sd‑rxRNA。

【技术特征摘要】
2010.03.24 US 61/317,252;2010.03.25 US 61/317,6331.一种包含正义链以及反义链的双链核糖核酸(dsRNA)，其中该正义链包含选自由SEQIDNO:4309、4311、4313、4315、4317、4319、502、3793、3637，和3639组成的组的序列的至少12个连续核苷酸，并且其中该反义链包含选自SEQIDNO:4310、4312、4314、4316、4318、501、1059、3794、3638，和3640的序列的至少12个连续核苷酸，其中该dsRNA是一种sd-rxRNA，且其中该sd-rxRNA包括一种分离的包含引导链和过客链的双链核酸分子，其中该分子的双链区域长度是8-15个核苷酸，其中该引导链包含一种长度是4-12个核苷酸的单链区域，其中该引导链的单链区域包含3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个硫代磷酸酯修饰，并且其中该双链核酸分子的核苷酸的至少40％是经过修饰的。2.如权利要求1所述的dsRNA，其中该dsRNA是经疏水修饰。3.如权利要求2所述的dsRNA，其中该dsRNA是连接至一种疏水轭合物。4.一种包含如权利要求1-3中任何一项所述的dsRNA的组合物。5.如权利要求4所述的组合物，其中该组合物包含针对为多于一种的蛋白进行编码的多种基因的dsRNA。6.如权利要求4或5所述的组合物，其中该组合物是配制用于递送至皮肤。7.如权利要求6所述的组合物，其中该组合物是以一种中性配制品形式。8.如权利要求7所述的组合物，其中该组合物是配制用于局部递送。9.如权利要求7所述的组合物，其中该组合物是配制用于皮内注射。10.如权利要求1-3中任一项所述的dsRNA或如权利要求4-9中任一项所述的组合物在制...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿纳斯塔西娅·赫沃罗瓦，威廉·萨洛蒙，琼安·卡门斯，德米特里·萨马尔斯基，托得·M·伍尔夫，帕米拉·A·帕夫克，林恩·利伯蒂娜，詹姆斯·卡尔迪亚，卡伦·G·布洛克，
申请(专利权)人：雷克西制药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US