一种用于样本排查的DNA检验试剂及专用引物制造技术

本发明专利技术公开了一种用于样本排查的DNA检验试剂及专用引物。本发明专利技术提供了DNA检验引物组，由用于扩增如下21个Y-STR位点的引物对组、用于扩增性别位点Amelogenin的引物对和用于扩增常染色体STR位点的引物对组成。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术提供的DNA检测试剂，能够同时检验21个Y-STR位点和1个常染色体STR位点，且引物特异性高，可以得到完整的STR分型，并且峰型尖锐清晰，平衡性好，无Pull-up峰、stutter带，无非特异性人工产物出现，完全能够满足法医DNA大规模样本检验的要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种用于样本排查的DNA检验试剂及专用引物。
技术介绍
DNA检验技术尤其是（Short Tandem Repeats）STR检测技术自20世纪80年代中期问世以来，在刑事、民事案件、大型灾难性事故（如：美国9·11恐怖袭击、印尼海啸、汶川大地震）及群体性突发事件中均发挥了巨大的作用。短串联重复序列(STR)，又称微卫星DNA(microsatellite DNA)，STR检测技术主要是通过对这些特异性STR位点的多态性进行检测，在获得了多个相应STR位点的信息后，进行多位点信息的平行比对，从而实现了个体识别和亲权鉴定。STR检测以其特有的技术优势，几十年来一直是法医遗传学研究的热点和核心，并被广泛应用于法医学个体识别和亲子鉴定等多个领域。欧盟法医DNA分型标准委员会认为，虽然新技术与新遗传标记不断涌现，但在今后相当长的时期内，STR将仍然是最主要的人特异性遗传标记。人类Y染色体在遗传过程中不与另外的染色体发生重组，且序列结构特征能稳定地由父亲传给儿子并为男性所特有，具有父系遗传特点。大多数暴力案件和所有的强奸案件中都有男性参与。因此，Y-STR在法庭科学中的作用逐渐显现。在没有父亲的父权鉴定时，利用Y染色体STR基因座（Y-STR）的父系遗传特点，可以通过父系亲属进行鉴定。在混合斑鉴定中，特别是无法用两步法分离的情况下，Y-STR更具优势。在轮奸案件中，Y-STR对于确定案犯人数也有很大作用。此外，由于Y-STR具有父系遗传的特点，不同种族、不同地区的群体，Y-STR的分布存在着差异性，对其分型可以揭示嫌疑人的种族、居住地甚至是姓氏。近年来，随着分子生物学技术的飞速发展，越来越多的Y-STR被开发和利用。1997年，Prinz等第一次建立了Y-STR复合扩增体系，命名为Quadruplex I，分别用两种荧光JOE和FAM标记DYS19、DYS389I、DYS389II和DYS390，并做了法医学应用性研究。美国ABI(Applied Biosystems)公司推出了Y-Filer试剂盒，包含DYS456、DYS389I、DYS389II、DYS390、DYS458、DYS19、DYS385、DYS393、DYS391、DYS439、DYS635、DYS392、YGATA-H4、DYS437、DYS438、DYS448等17个Y-STR位点。美国Promega公司也研发出包含DYS391、DYS389I、DYS439、DYS389II、DYS438、DYS437、DYS19、DYS392、DYS393、DYS390、DYS385a/b等12个Y-STR位点的PowerPlex Y试剂盒。这些Y-STR检验试剂盒在法医DNA检验领域发挥着越来越大的作用。随着微量Y染色体STR检验技术的发展，其应用范围有进一步扩大的趋势，如Y-DNA数据库建设和大规模样本的快速排查。然而，当前现有的Y染色体DNA检测试剂在应用过程中确遇到了新的问题。由于Y-STR具有父系遗传的特点，在正常情况下，同一个家系的样本所获得的STR分型结果是完全相同的。这在大规模检验过程中就存在两个主要问题，一是大量无法确定具有相同Y-STR分型的样本是否存在样本交叉污染等现象；二是确定家系后，还需要重新对相应家系的全部样本进行常染色体STR检验，以实现精确比对。这将极大增加检验人员的工作量，降低整体检验效率，增加检验成本。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供DNA检验引物组。本专利技术提供的DNA检验引物组，包括用于扩增如下21个Y-STR位点的引物对组和用于扩增常染色体STR位点的引物对；所述用于扩增如下21个Y-STR位点的引物对组为如下：用于扩增Y-STR位点DYS460的引物对，其由序列表中序列1所示的引物1和序列表中序列2所示的引物2组成；用于扩增Y-STR位点DYS458的引物对，其由序列表中序列3所示的引物3和序列表中序列4所示的引物4组成；用于扩增Y-STR位点DYS389I或Y-STR位点DYS389II的引物对，其由序列表中序列5所示的引物5和序列表中序列6所示的引物6组成；用于扩增Y-STR位点DYS438的引物对，其由序列表中序列7所示的引物7和序列表中序列8所示的引物8组成；用于扩增Y-STR位点DYS390的引物对，其由序列表中序列9所示的引物9和序列表中序列10所示的引物10组成；用于扩增Y-STR位点DYS392的引物对，其由序列表中序列11所示的引物11和序列表中序列12所示的引物12组成；用于扩增Y-STR位点DYS393的引物对，其由序列表中序列13所示的引物13和序列表中序列14所示的引物14组成；用于扩增Y-STR位点DYS437的引物对，其由序列表中序列15所示的引物15和序列表中序列16所示的引物16组成；用于扩增Y-STR位点DYS385a或用于扩增Y-STR位点DYS385b的引物对，其由序列表中序列17所示的引物17和序列表中序列18所示的引物18组成；用于扩增Y-STR位点YGATA_H4的引物对，其由序列表中序列19所示的引物19和序列表中序列20所示的引物20组成；用于扩增Y-STR位点DYS391的引物对，其由序列表中序列21所示的引物21和序列表中序列22所示的引物22组成；用于扩增Y-STR位点DYS447的引物对，其由序列表中序列23所示的引物23和序列表中序列24所示的引物24组成；用于扩增Y-STR位点DYS19的引物对，其由序列表中序列25所示的引物25和序列表中序列26所示的引物26组成；用于扩增Y-STR位点DYS448的引物对，其由序列表中序列27所示的引物27和序列表中序列28所示的引物28组成；用于扩增Y-STR位点DYS456的引物对，其由序列表中序列29所示的引物29和序列表中序列30所示的引物30组成；用于扩增Y-STR位点DYS635的引物对，其由序列表中序列31所示的引物31和序列表中序列32所示的引物32组成；用于扩增Y-STR位点DYS439的引物对，其由序列表中序列33所示的引物33和序列表中序列34所示的引物34组成；用于扩增Y-STR位点DYS527a或用于扩增Y-STR位点DYS527b的引物对，其由序列表中序列35所示的引物35和序列表中序列36所示的引物36组成；所述用于扩增常染色体STR位点D18S51的引物对，其由序列表中序列39所示的引物39和序列本文档来自技高网...

【技术保护点】
DNA检验引物组，包括用于扩增如下21个Y‑STR位点的引物对组和用于扩增常染色体STR位点的引物对；所述用于扩增如下21个Y‑STR位点的引物对组为如下：用于扩增Y‑STR位点DYS460的引物对，其由序列表中序列1所示的引物1和序列表中序列2所示的引物2组成；用于扩增Y‑STR位点DYS458的引物对，其由序列表中序列3所示的引物3和序列表中序列4所示的引物4组成；用于扩增Y‑STR位点DYS389I或Y‑STR位点DYS389II的引物对，其由序列表中序列5所示的引物5和序列表中序列6所示的引物6组成；用于扩增Y‑STR位点DYS438的引物对，其由序列表中序列7所示的引物7和序列表中序列8所示的引物8组成；用于扩增Y‑STR位点DYS390的引物对，其由序列表中序列9所示的引物9和序列表中序列10所示的引物10组成；用于扩增Y‑STR位点DYS392的引物对，其由序列表中序列11所示的引物11和序列表中序列12所示的引物12组成；用于扩增Y‑STR位点DYS393的引物对，其由序列表中序列13所示的引物13和序列表中序列14所示的引物14组成；用于扩增Y‑STR位点DYS437的引物对，其由序列表中序列15所示的引物15和序列表中序列16所示的引物16组成；用于扩增Y‑STR位点DYS385a或用于扩增Y‑STR位点DYS385b的引物对，其由序列表中序列17所示的引物17和序列表中序列18所示的引物18组成；用于扩增Y‑STR位点YGATA_H4的引物对，其由序列表中序列19所示的引物19和序列表中序列20所示的引物20组成；用于扩增Y‑STR位点DYS391的引物对，其由序列表中序列21所示的引物21和序列表中序列22所示的引物22组成；用于扩增Y‑STR位点DYS447的引物对，其由序列表中序列23所示的引物23和序列表中序列24所示的引物24组成；用于扩增Y‑STR位点DYS19的引物对，其由序列表中序列25所示的引物25和序列表中序列26所示的引物26组成；用于扩增Y‑STR位点DYS448的引物对，其由序列表中序列27所示的引物27和序列表中序列28所示的引物28组成；用于扩增Y‑STR位点DYS456的引物对，其由序列表中序列29所示的引物29和序列表中序列30所示的引物30组成；用于扩增Y‑STR位点DYS635的引物对，其由序列表中序列31所示的引物31和序列表中序列32所示的引物32组成；用于扩增Y‑STR位点DYS439的引物对，其由序列表中序列33所示的引物33和序列表中序列34所示的引物34组成；用于扩增Y‑STR位点DYS527a或用于扩增Y‑STR位点DYS527b的引物对，其由序列表中序列35所示的引物35和序列表中序列36所示的引物36组成；所述用于扩增常染色体STR位点D18S51的引物对，其由序列表中序列39所示的引物39和序列表中序列40所示的引物40组成。...

【技术特征摘要】
1.DNA检验引物组，包括用于扩增如下21个Y-STR位点的引物对组和用于扩
增常染色体STR位点的引物对；
所述用于扩增如下21个Y-STR位点的引物对组为如下：
用于扩增Y-STR位点DYS460的引物对，其由序列表中序列1所示的引物1和序
列表中序列2所示的引物2组成；
用于扩增Y-STR位点DYS458的引物对，其由序列表中序列3所示的引物3和序
列表中序列4所示的引物4组成；
用于扩增Y-STR位点DYS389I或Y-STR位点DYS389II的引物对，其由序列表
中序列5所示的引物5和序列表中序列6所示的引物6组成；
用于扩增Y-STR位点DYS438的引物对，其由序列表中序列7所示的引物7和序
列表中序列8所示的引物8组成；
用于扩增Y-STR位点DYS390的引物对，其由序列表中序列9所示的引物9和序
列表中序列10所示的引物10组成；
用于扩增Y-STR位点DYS392的引物对，其由序列表中序列11所示的引物11和
序列表中序列12所示的引物12组成；
用于扩增Y-STR位点DYS393的引物对，其由序列表中序列13所示的引物13和
序列表中序列14所示的引物14组成；
用于扩增Y-STR位点DYS437的引物对，其由序列表中序列15所示的引物15和
序列表中序列16所示的引物16组成；
用于扩增Y-STR位点DYS385a或用于扩增Y-STR位点DYS385b的引物对，其
由序列表中序列17所示的引物17和序列表中序列18所示的引物18组成；
用于扩增Y-STR位点YGATA_H4的引物对，其由序列表中序列19所示的引物
19和序列表中序列20所示的引物20组成；
用于扩增Y-STR位点DYS391的引物对，其由序列表中序列21所示的引物21和
序列表中序列22所示的引物22组成；
用于扩增Y-STR位点DYS447的引物对，其由序列表中序列23所示的引物23和
序列表中序列24所示的引物24组成；
用于扩增Y-STR位点DYS19的引物对，其由序列表中序列25所示的引物25和
序列表中序列26所示的引物26组成；
用于扩增Y-STR位点DYS448的引物对，其由序列表中序列27所示的引物27和
序列表中序列28所示的引物28组成；
用于扩增Y-STR位点DYS456的引物对，其由序列表中序列29所示的引物29和
序列表中序列30所示的引物30组成；
用于扩增Y-STR位点DYS635的引物对，其由序列表中序列31所示的引物31和
序列表中序列32所示的引物32组成；
用于扩增Y-STR位点DYS439的引物对，其由序列表中序列33所示的引物33和
序列表中序列34所示的引物34组成；
用于扩增Y-STR位点DYS527a或用于扩增Y-STR位点DYS527b的引物对，其
由序列表中序列35所示的引物35和序列表中序列36所示的引物36组成；
所述用于扩增常染色体STR位点D18S51的引物对，其由序列表中序列39所示
的引物39和序列表中序列40所示的引物40组成。
2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于：所述引物组还包括用于扩增性
别位点Amelogenin的引物对；
用于扩增性别位点Amelogenin的引物对，其由序列表中序列37所示的引物37
和序列表中序列38所示的引物38组成；
所述引物组由所述用于扩增如下21个Y-STR位点的引物对组、所述用于扩增常
染色体STR位点的引物对和所述用于扩增性别位点Amelogenin的引物对组成。
3.根据权利要求2所述的引物组，其特征在于：
所述引物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、
19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、
38、39、40的摩尔比为0.12:0.12:0.2:0.2：0.65:0.65:0.45:0.45：
0.25:0.25:0.6:0.6:0.15:0.15:0.2:0.2:0.35:0.35:0.4:0.4:0.25:0.25:0.45:0.45:0.2:0.2:0.25:0.25:0
.4:0.4:0.45：0.45：0.60:0.60:0.80:...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵兴春，叶健，姜伯玮，欧元，
申请(专利权)人：公安部物证鉴定中心，
类型：发明
国别省市：北京;11