一种采用2,4-二硝基氯苯复合乙酸法建立异常胆液质载体UC病证动物模型的方法技术

本发明专利技术公开了一种采用维吾尔医学体液论结合2,4-二硝基氯苯复合乙酸法建立异常胆液质载体UC病证动物模型的构建方法，通过以雄性wistar品系大鼠为建模动物，给予建模大鼠干热属性饮水、干热属性饲料灌胃、干热环境和慢性刺激连续刺激这四种处理，以2%的2,4-二硝基氯苯丙酮液滴背，然后给予建模大鼠禁食，经肛门插入大鼠结肠内灌入2,4-二硝基氯苯乙醇溶液、乙酸溶液和生理盐水冲洗等一系列的处理从而建立异常胆液质载体UC病证大鼠模型，克服了没有相关动物模型对于异常胆液质载体UC病证机制的研究和相关药物开发的限制，且造模方法简单、成模率高、造模周期短、成本低以及重现性好的优势，具有广泛的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学
具体的说，本专利技术涉及一种利用中华民族医药维吾尔 医药理论采用科学方法实践的
，进一步讲，本专利技术涉及一种采用2, 4-二硝基氯苯 复合乙酸法建立异常胆液质载体UC病证动物模型的

技术介绍
动物模型的构建是医学研宄中的一项重要技术。构建与人类发病相似的疾病模 型，可以克服人类本身发生疾病潜伏期长、影响因素多、发生发展缓慢、发病机制复杂等因 素的制约，更好地反应疾病发生、发展的规律，并有利于研宄不便于在人类本身进行研宄的 疾病。 溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis，UC)属于炎症性肠病，是一种慢性非特异性 结肠炎症性疾病。其病程漫长，病情轻重不一，常反复发作，是结肠癌和直肠癌的高风险因 素之一。随着社会经济的发展，人们生活方式及节奏的改变，以及健康意识的增强和结肠镜 等检查手段的普及，流行病学资料显示，其发病率国内外都有逐年上升的趋势。UC是环境因 素、饮食、过度紧张等多种因素相互作用的结果，其中环境因素和精神状态是UC发病的重 要诱因，这一观点与维吾尔医学的基本理论相符。 维吾尔医药学(维医）作为我国传统医药学，具有悠久历史和较为完整的理论体 系。维医体液论认为正常体液维持人体正常生命活动，当饮食失衡、长时间不运动、精神状 态异常等因素可使体液质发生变化，产生相应的异常体液质，引起机体环境稳态平衡失调， 使机体处于亚健康状态，若进一步发展超过人体的自我调节能力时，就会导致疾病的发生。 维医的异常体液证特证较多，主要涉及精神状态、睡眠、舌苔等一系列表观指标的变化，已 发现一些特征及精神状态与疾病有关，虽然这些变化不能作为疾病的诊断标准，但是通过 对机体神经-内分泌-免疫系统的影响，可增加机体对疾病的易感性。异常体液使机体体 液代谢过程失控从而生成并积累的各种具有致病性质的病理性物质，这种致病性物质可作 为新的致病因素，进一步促进恶性进程。每类证型会引发不同疾病，而异常胆液质型人群易 患神经系统疾病、肝病和消化系统疾病。因此，研宄异常胆液质（属性干热）证与UC的关系 就备受关注。在对其进行研宄时，构建动物模型是研宄异常胆液质载体UC病证发病机制、 进行防治药物筛选、药理研宄及药效评价研宄的重要途径，具有举足轻重的作用。
技术实现思路
针对目前国内外现有技术中未见利用动物模型研宄异常胆液质与UC的关系，并 构建异常胆液质载体UC病证动物模型的技术现状，本专利技术旨在于提供一种采用维医体液 论结合2, 4-二硝基氯苯复合乙酸法建立异常胆液质载体UC病证动物模型的方法，利用药 物2, 4-二硝基氯苯复合乙酸构建了异常胆液质载体UC病证动物模型，利用此方法构建的 异常胆液质载体UC病证动物模型获得良好的技术效果。 为了达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案： 通过以雄性wistar品系大鼠为建模动物，给予建模大鼠干热属性饮水、干热属性饲料 灌胃、干热环境和慢性刺激连续刺激这四种处理，以2%的2, 4-二硝基氯苯（DNCB)丙酮液 滴背，然后给予建模大鼠禁食，经肛门插入大鼠结肠内灌入2, 4-二硝基氯苯（DNCB)乙醇溶 液、乙酸溶液和生理盐水冲洗等一系列的处理从而建立异常胆液质载体UC病证大鼠模型。 本专利技术提供一种采用维医体液论结合2, 4-二硝基氯苯复合乙酸法建立异常胆液 质载体UC病证动物模型的构建方法，具体构建方法步骤如下： (1)实验动物：选取健康清洁级，体重为180±30g的雄性wistar品系大鼠。 (2)实验大鼠1-13天的饲养：实验大鼠按照每笼5只，满足正常饲养密度，实验大 鼠给予每日每笼实验大鼠300g普通饲料适应性喂养7天后给予每日每笼实验大鼠300g普 通饲料，400ml干热属性饮水，并连续给予干热属性饲料灌胃、干热环境和慢性刺激连续刺 激。 (3)实验大鼠14-23天的饲养：将上述步骤（2)处理后的大鼠从第14天禁食，以 准备灌肠 DNCB，于第15天用直径3_的导管经肛门插入大鼠结肠内8cm左右灌入0. 1%的 2, 4-二硝基氯苯（DNCB)乙醇溶液0. 25ml，第16天相同方法以体积分数为6%的乙酸溶液 2ml灌肠，15s后立即注入5ml生理盐水冲洗，以消除乙酸的刺激作用，灌肠前24h禁食，自 由饮水，观察7天，观察期前3天禁食，大鼠自由饮用7. 5%葡萄糖水，以降低大鼠死亡率，葡 萄糖水按照每30g葡葡糖粉与每400ml灭菌水配置。 (4)通过上述各技术步骤即可建立了异常胆液质载体UC病证大鼠模型。 本专利技术所述干热属性饮水：将体内产生胆液质的红花每Ig溶于400ml的双蒸水 中，侵泡约6h后再给予实验动物饮用。 本专利技术所述干热属性灌胃饲料：分别将体内产生胆液质的黑胡椒和干姜打成粉 末；将每30g黑胡椒粉末、30g干姜粉末和0. 3g红花溶于400ml的双蒸水制备为产生胆液 质的灌胃饲料，每天每只大鼠灌胃热属性灌胃饲料2ml/100g，灌胃前一天配置，在4度的冰 箱中保存；第二天灌胃前室温放置2h。 本专利技术所述干热环境：采用人工气候箱进行饲养，其中喂养环境温度为26±2°C， 相对湿度为36~40%，打开光照，每天10小时。 本专利技术所述慢性刺激连续刺激：慢性刺激包括4种刺激：一是采用电刺激，采用间 断足底电击作为应激源，在输出电压20~40 V，不定时改变电压，间隔2~5 min，每天 1次，1次30 min条件下产生慢性应激；二是采用夹尾刺激，用小型书夹夹住实验大鼠的尾 巴，让其实验大鼠相互撕咬、打斗，若停止打斗，则用力拍鼠笼子予以刺激，让其重新打斗 或奔跑，每日处理1次，每次5min ;三是采用噪音刺激，每天用IOOdB的快节奏音乐持续播 放2h;四是采用化学刺激，实验大鼠背部剃毛，用ImL注射器滴2% (2g/100 mL)的2, 4-二 硝基氯苯（DNCB)丙酮液0. 25mL，滴在剃毛处，每天1次，连续14天。 本专利技术提供上述技术步骤（3)中出现了两次禁食，第一次为从"第14天禁食"，第 二次为"观察7天，观察期前3天禁食"，即从第14天到灌酸后3天一直禁食，这3天给予葡 萄糖水提供能量，大鼠自由饮7. 5%的葡萄糖水，按照每30g葡萄糖加400ml灭菌水配置葡 萄糖水，每天给予一次。 本专利技术提供的一种异常胆液质载体UC病证动物模型构建方法，能够成功构建异 常胆液质载体UC病证动物模型，克服了没有相关动物模型对于异常胆液质载体UC病证机 制的研宄和相关药物开发的限制，而且具有造模方法简单、成模率高、造模周期短、成本低 以及重现性好的优势。 通过实施本专利技术具体的
技术实现思路
可以达到以下有益效果： (1)建模方法简单：本专利技术提供的一种异常胆液质载体UC病证动物模型构建方法，能 够成功构建异常胆液质载体UC病证动物模型，克服了没有相关动物模型对于异常胆液质 载体UC病证机制的研宄和相关药物的开发的限制，而且其具有造模方法简单、成模率高、 造模周期短、成本低以及重现性好的优势。 (2)构建的动物模型具有与人类相似的特征表现：维吾尔医药中对异常胆液质型 UC病证人群的描述包括舌苔黄，干，小便赤黄，体型消瘦等特征；本专利技术方法构建的大鼠动 物模型表现出舌苔呈现黄色，干燥，随着建证时间的推移，大鼠的舌苔颜色变化略本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种采用2,4‑二硝基氯苯复合乙酸法建立异常胆液质载体UC病证动物模型的构建方法，其特征在于，具体构建方法步骤如下：（1）实验动物：选取健康清洁级，体重为180±30g的雄性wistar品系大鼠；（2）实验大鼠1‑13天的饲养：实验大鼠按照每笼5只，满足正常饲养密度，实验大鼠给予每日每笼实验大鼠300g普通饲料适应性喂养7天后给予每日每笼实验大鼠300g普通饲料，400ml干热属性饮水，并连续给予干热属性饲料灌胃、干热环境和慢性刺激连续刺激；   （3）实验大鼠14‑23天的饲养：将上述步骤（2）处理后的大鼠从第14天禁食，以准备灌肠DNCB，于第15天用直径 3mm的导管经肛门插入大鼠结肠内8cm左右灌入0.1%的2,4‑二硝基氯苯（DNCB）乙醇溶液0.25ml，第16天相同方法以体积分数为6%的乙酸溶液 2ml灌肠，15s后立即注入5ml生理盐水冲洗，以消除乙酸的刺激作用，灌肠前 24h 禁食，自由饮水，观察7天，观察期前3天禁食，大鼠自由饮用7.5%葡萄糖水，以降低大鼠死亡率，葡萄糖水按照每30g葡葡糖粉与每400ml灭菌水配置；（4）通过上述各技术步骤即可建立了异常胆液质载体UC病证大鼠模型。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：库热西·玉努斯，哈木拉提·吾甫尔，
申请(专利权)人：新疆医科大学，库热西·玉努斯，
类型：发明
国别省市：新疆;65