本发明专利技术属于生物制剂领域，尤其涉及一种地龙抗菌肽的制备方法，其特征在于，按照如下步骤进行：（1）取新鲜的蚯蚓加水浸泡，清洗干净，沥干水分；（2）加入1-5倍体积的0.01-0.05mol/L、pH值为5.0-7.0的磷酸盐缓冲溶液，捣碎；（3）步骤（2）所得捣碎物加入反应釜中，在1-7℃下搅拌浸提，浸提完毕后，离心，取其上清液；（4）步骤（3）所得上清液中，在1-7℃下，加入硫酸铵固体，使其硫酸铵的饱和度达到30%-85%；（5）步骤（4）所得混合物静置后在1-7℃下离心，弃上清，收集沉淀，透析，浓缩，得到地龙抗菌肽粗品。本发明专利技术中的操作非常简单，易于推广。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物制剂领域，尤其涉及。
技术介绍
虫丘虫引又称地龙，虫丘虫引体内存在着抗菌肽（antibacterialpeptides)，在多种生物免疫系统中，抗菌肽是由基因编码、核糖体合成的具有抗菌活性的一类小分子多肽。抗菌肽具有广谱杀菌活性，包括杀伤革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、双歧杆菌、螺旋体、原虫等，并能中和某些胞膜病毒，尤其重要的是，由于其杀菌机理完全不同于传统的抗生素，微生物极少可能对动物抗菌肽产生耐药性，由此证明地龙抗菌肽具有很高的药用开发应用价值。但是到目前为止，关于地龙抗菌肽制备方面的相关研宄比较少。
技术实现思路
本专利技术针对上述技术问题，提供了一种操作简单的地龙抗菌肽的制备方法。本专利技术所采用的技术方案为： ，其特征在于，按照如下步骤进行： (O取新鲜的蚯蚓加水浸泡，清洗干净，沥干水分； (2)在所述步骤（I)所得蚯蚓中加入1-5倍体积的O.01-0. 05 mol/L、pH值为5. 0-7. O的磷酸盐缓冲溶液，捣碎； (3)所述步骤（2)所得捣碎物加入反应釜中，在1_7°C下搅拌浸提，浸提完毕后，离心，取其上清液； (4)在所述步骤（3)所得上清液中，在1-7°C下，加入硫酸铵固体，使其硫酸铵的饱和度达到 30%-85% ； (5)将所述步骤（4)所得混合物静置后在1_7°C下离心，弃上清，收集沉淀，透析，浓缩，得到地龙抗菌肽粗品。所述蚯蚓选用大平2号赤子爱胜蚓。所述步骤（I)中，浸泡的较优时间为12_36h。所述步骤（I)中，浸泡的较优时间为24h。所述步骤（2)中，磷酸盐缓冲溶液的较优用量为蚯蚓体积的2倍，较优浓度为O. 02mol/L、较优pH值为6. O。所述步骤（3)中，浸提的较优温度为4°C，较优时间为12_36h。所述步骤（3 )中，浸提的较优时间为24h。 所述步骤（4 )中，硫酸铵固体加入的较优温度为40C，硫酸铵固体的较优细度多80目，较优的饱和度为75%。所述步骤（5)中，静置的较优时间为2_6h，较优的离心温度为4°C，透析袋的较优截留分子量为12000?14000。所述步骤（5)中，静置的较优时间为4h。本专利技术的有益效果为： 1、本专利技术中的操作非常简单，易于推广； 2、提取原料选用大平2号赤子爱胜蚓，抗菌肽含量高；3、本专利技术得到的地龙抗菌肽粗品中抗菌肽的含量达到16.lg/100g，含量非常高。【具体实施方式】实施例I ，按照如下步骤进行： (1)取新鲜的大平2号赤子爱胜蚓，在水中浸泡12h，使其吐出肠道中的泥土等异物，清洗干净，沥干水分； (2)在步骤（I)所得蚯蚓中加入5倍体积的O.01mol/L、pH值为5. O的磷酸盐缓冲溶液，用组织捣碎机捣碎； (3)步骤（2)所得捣碎物加入反应釜中，在7°C下恒温搅拌浸提36h，浸提完毕后，离心15min，取其上清液； (4)在步骤（3)所得上清液中，在5°C下，缓慢加入研磨好的细度达到80目以上硫酸铵固体，边加边搅拌，使其硫酸铵的饱和度达到75% ； (5)将步骤（4)所得混合物静置6h后在1°C下离心30min，弃上清，收集沉淀，用截留分子量为12000?14000的透析袋透析，透析好的粗蛋白液冷冻干燥浓缩，得到地龙抗菌肽粗品O地龙抗菌肽粗品通过反向高效液相色谱法进行检测，提取粗品中抗菌肽的含量为15.8g/100go实施例2 ，按照如下步骤进行： (1)取新鲜的大平2号赤子爱胜蚓，在水中浸泡24h，使其吐出肠道中的泥土等异物，清洗干净，沥干水分； (2)在步骤（I)所得蚯蚓中加入2倍体积的O.02 mol/L、pH值为6. O的磷酸盐缓冲溶液，用组织捣碎机捣碎； (3)步骤（2)所得捣碎物加入反应釜中，在4°C下恒温搅拌浸提24h，浸提完毕后，离心15min，取其上清液； (4)在步骤（3)所得上清液中，在4°C下，缓慢加入研磨好的细度达到80目以上硫酸铵固体，边加边搅拌，使其硫酸铵的饱和度达到75% ； (5)将步骤（4)所得混合物静置4h后在4°C下离心30min，弃上清，收集沉淀，用截留分子量为12000?14000的透析袋透析，透析好的粗蛋白液冷冻干燥浓缩，得到地龙抗菌肽粗品O地龙抗菌肽粗品通过反向高效液相色谱法进行检测，提取粗品中抗菌肽的含量为16.lg/100go实施例3 ，按照如下步骤进行： (I)取新鲜的大平2号赤子爱胜蚓，在水中浸泡28h，使其吐出肠道中的泥土等异物，清洗干净，沥干水分； (2)在步骤(I)所得蚯蚓中加入I倍体积的0.02 mol/L、pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液，用组织捣碎机捣碎； (3)步骤(2)所得捣碎物加入反应釜中，在5°C下恒温搅拌浸提24h，浸提完毕后，离心15min，取其上清液； (4)在步骤(3)所得上清液中，在1°C下，缓慢加入研磨好的细度达到80目以上硫酸铵固体，边加边搅拌，使其硫酸铵的饱和度达到65% ； (5)将步骤(4)所得混合物静置2h后在5°C下离心30min，弃上清，收集沉淀，用截留分子量为12000?14000的透析袋透析，透析好的粗蛋白液冷冻干燥浓缩，得到地龙抗菌肽粗品O地龙抗菌肽粗品通过反向高效液相色谱法进行检测，提取粗品中抗菌肽的含量为16.0g/100go实施例4 ，按照如下步骤进行: (1)取新鲜的大平2号赤子爱胜蚓，在水中浸泡36h，使其吐出肠道中的泥土等异物，清洗干净，沥干水分； (2)在步骤(I)所得蚯蚓中加入3倍体积的0.05 mol/L、pH值为6.0的磷酸盐缓冲溶液，用组织捣碎机捣碎； (3)步骤(2)所得捣碎物加入反应釜中，在2°C下恒温搅拌浸提12h，浸提完毕后，离心15min，取其上清液； (4)在步骤(3)所得上清液中，在7°C下，缓慢加入研磨好的细度达到80目以上硫酸铵固体，边加边搅拌，使其硫酸铵的饱和度达到75% ； (5)将步骤(4)所得混合物静置4h后在6°C下离心30min，弃上清，收集沉淀，用截留分子量为12000?14000的透析袋透析，透析好的粗蛋白液冷冻干燥浓缩，得到地龙抗菌肽粗品O地龙抗菌肽粗品通过反向高效液相色谱法进行检测，提取粗品中抗菌肽的含量为15.9g/100go以上对本专利技术的4个实施例进行了详细说明，但内容仅为本专利技术的较佳实施例，不能被认为用于限定本专利技术的实施范围。凡依本专利技术申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本专利技术的专利涵盖范围之内。【主权项】1.，其特征在于，按照如下步骤进行: (1)取新鲜的蚯蚓加水浸泡，清洗干净，沥干水分； (2)在所述步骤(I)所得蚯蚓中加入1-5倍体积的0.01-0.05 mol/L、pH值为5.0-7.0的磷酸盐缓冲溶液，捣碎； (3)所述步骤(2)所得捣碎物加入反应釜中，在1_7°C下搅拌浸提，浸提完毕后，离心，取其上清液； (4)在所述步骤(3)所得上清液中，在1-7°C下，加入硫酸铵固体，使其硫酸铵的饱和度达到 30%-85% ； (5)将所述步骤(4)所得混合物静置后在1_7°C下离心，弃上清，收集沉淀，透析，浓缩，得到地龙抗菌肽粗品。2.根据权利要求1所述的，其特征在于，所述蚯蚓选用大平2号赤子爱胜蚓。3.根据权利要求1所述的，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种地龙抗菌肽的制备方法，其特征在于，按照如下步骤进行：（1）取新鲜的蚯蚓加水浸泡，清洗干净，沥干水分；（2）在所述步骤（1）所得蚯蚓中加入1‑5倍体积的0.01‑0.05 mol/L、pH值为5.0‑7.0的磷酸盐缓冲溶液，捣碎；（3）所述步骤（2）所得捣碎物加入反应釜中，在1‑7℃下搅拌浸提，浸提完毕后，离心，取其上清液；（4）在所述步骤（3）所得上清液中，在1‑7℃下，加入硫酸铵固体，使其硫酸铵的饱和度达到30%‑85%；（5）将所述步骤（4）所得混合物静置后在1‑7℃下离心，弃上清，收集沉淀，透析，浓缩，得到地龙抗菌肽粗品。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：贾立明，陈小明，贾京华，杨在得，王凤艳，
申请(专利权)人：天津民生生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12
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