兰索拉唑中兰索氯化物的测定方法技术

本发明专利技术所述的兰索拉唑中兰索氯化物的测定方法，采用高效液相色谱法中的杂质对照品外标法，色谱柱为反相强极性柱，流动相为乙腈-pH6.2～6.5磷酸盐缓冲液，稀释剂为乙腈-pH10.5磷酸盐缓冲液，检测波长为210nm。本发明专利技术的方法为目前主流的高效液相色谱法(HCLP)，灵敏度极高，实验显示检测限为0.5ppm，完全达到《基因毒性杂质限度指南》中对兰索拉唑中基因毒性物质8ppm的控制要求，专属性好，准确度高。根据ICH指导原则《Q2b方法学》进行方法学验证，结果均符合指导原则要求。

【技术实现步骤摘要】
兰索拉唑中兰索氯化物的测定方法
本专利技术涉及药品检测，具体是兰索拉唑中基因毒性杂质检测，更具体是兰索拉唑中兰索氯化物的测定方法。
技术介绍
基因毒性杂质是在以DNA反应物质为主要研究对像的体内体外试验中，如果发现它们对DNA有替在的破坏性，那可称之为基因毒性。根据目前研究实践，具有体内遗传毒性的化合物在任何暴露剂量下均有可能对DNA产生损伤，而这种损伤有可能引发肿瘤。目前，欧美国家对基因毒性杂质控制较为严格，对所有可能含有基因毒性杂质的药品，均要求检测其基因毒性杂质的含量，并发布了《基因毒性杂质限度指南》。根据EMA《基因毒性杂质限度指南》(2006年)规定，2-氯甲基-3-甲基-4-(2,2,2-三氟乙氧基)吡啶盐酸盐(又名兰索氯化物)为基因毒性杂质，应对其在兰索拉唑中的含量进行严格的控制。按阈值法来计算，TTC(thresholdoftoxicologicalconcern,毒理学关注阈值)为1.5μg/d，兰索拉唑最大日用剂量为180mg/d，其控制限度为不得过8ppm(限度＝TTC/最大日用剂量)。而目前兰索拉唑药品是进行有关物质检测。如“用加校正因子的自身对照法检测兰索拉唑的有关物质的含量”(谭宏宇，高丽，《黑龙江医药》2012年第6期)。有关物质的检测方法的灵敏度不高，检测限约为700ppm，远远达不到《基因毒性杂质限度指南》中对兰索拉唑中基因毒性物质的控制要求。目前尚未公开有专门用于兰索拉唑中兰索氯化物的检测方法，所以迫切需要开发新的方法，专门用于兰索拉唑中兰索氯化物的含量测定。
技术实现思路
为了解决上述问题，满足生产实际的要求，本专利技术提供一种兰索拉唑中兰索氯化物的测定方法。本专利技术所述的测定方法，采用高效液相色谱法中的杂质对照品外标法，色谱柱为反相强极性柱，流动相为乙腈-pH6.2～6.5磷酸盐缓冲液，稀释剂为乙腈-pH10.5磷酸盐缓冲液，检测波长为210nm。进一步，反相强极性柱选用氨基十六烷基硅胶色谱柱。所述的氨基十六烷基硅胶色谱柱规格为：5μm，250×4.6mm。进一步，流动相体积比例为：乙腈:pH6.2～6.5磷酸盐缓冲液＝35:65。进一步，稀释剂体积比例为：乙腈:pH10.5磷酸盐缓冲液＝50:50。所述的磷酸盐缓冲液的配制方法包括：无水磷酸氢二钠加入到水中溶解，用磷酸调PH值。本专利技术测定时流速控制1.0ml/min。测定时进样量为50μl。测定时柱温为25℃-35℃。本专利技术具体测定的过程包括：1)、用稀释剂配制杂质对照品液；2)、用稀释剂配制供试液；3)、用稀释剂配制分离度试验液；4)、测定：取稀释剂作空白液、分离度试验液各50μl，其中一份杂质对照品液平行5针各50μl，另一份杂质对照品液和供试液分别平行2针各50μl，分别注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图；5)、按面积外标法计算兰索拉唑中兰索氯化物的含量X％：X％＝(Ax*C对/A对/Cx)*100％其中：Ax表示供试品中兰索氯化物的峰面积；Cx表示供试品溶液的浓度，μg/ml；C对表示对照品溶液的浓度，μg/ml；A对表示兰索氯化物对照品的峰面积。本专利技术的方法为目前主流的高效液相色谱法(HCLP)，灵敏度极高，实验显示检测限为0.5ppm，完全达到《基因毒性杂质限度指南》中对兰索拉唑中基因毒性物质8ppm的控制要求，专属性好，准确度高。根据ICH指导原则《Q2b方法学》进行方法学验证，结果均符合指导原则要求。附图说明图1140408-供试液1-1的HCLP图谱。表示批号为140408的供试液第一份样第一针的HCLP色谱图，以下类似；图2140408-供试液1-2的HCLP图谱；图3140408-供试液2-1的HCLP图谱，表示批号为140408的供试液第二份样第一针的HCLP色谱图，以下类似；图4140408-供试液2-2的HCLP图谱；图5140409-供试液1-1的HCLP图谱；图6140409-供试液1-2的HCLP图谱；图7140409-供试液2-1的HCLP图谱；图8140409-供试液2-2的HCLP图谱；图9140410-供试液1-1的HCLP图谱；图10140410-供试液1-2的HCLP图谱；图11140410-供试液2-1的HCLP图谱；图12140410-供试液2-2的HCLP图谱；图13测试三批样品时的对照液1-1的HCLP图谱。图中兰索氯化物的峰面积为4890；图14测试三批样品时的对照液1-2的HCLP图谱。图中兰索氯化物的峰面积为4874；图15测试三批样品时的对照液2-1的HCLP图谱。图中兰索氯化物的峰面积为4960；图16测试三批样品时的对照液2-2的HCLP图谱。图中兰索氯化物的峰面积为4937；图17测试三批样品时的空白液的HCLP图谱，图中数据如下表；峰号化合物保留时间面积面积％理论板数分离度12.5501736616.56543522.7991991018.99129920.71733.3996756364.4444431.412总计104839100.00图18测试三批样品时的系统适用性试验的HCLP图谱，图中数据如下表；峰号化合物保留时间面积面积％理论板数分离度1杂质A5.737904094111.0723249——2兰索拉唑10.4954608329755.463797910.9013杂质A13.151986460712.08187975.1354兰索氯化物18.9771666669820.411147259.821总计81655543100.00图19实验批样品20140507-供试液1-1的HCLP图谱，图中兰索氯化物的峰面积为488；图20实验批样品20140507-供试液1-2的HCLP图谱，图中兰索氯化物的峰面积为457；图21实验批样品20140507-供试液2-1的HCLP图谱，图中兰索氯化物的峰面积为451；图22实验批样品20140507-供试液2-2的HCLP图谱，图中兰索氯化物的峰面积为418；图23测试实验批样品时的对照液1-1的HCLP图谱，图中兰索氯化物的峰面积为4757；图24测试实验批样品时的对照液1-2的HCLP图谱，图中兰索氯化物的峰面积为4739；图25测试实验批样品时的对照液2-1的HCLP图谱，图中兰索氯化物的峰面积为4742；图26测试实验批样品时的对照液2-2的HCLP图谱，图中兰索氯化物的峰面积为4738；图27测试实验批样品时的空白液的HCLP图谱，图中数据如下表；峰号化合物保留时间面积面积％理论板数分离度11.86152843.03735522.667121416.9798352.10832.8025282430.36519690.4343.3477248441.6675051.2866.0052998817.2382242.4149.66412410.71389443.631总计173961100.00图28测试实验批样品时的系统适用性试验的HCLP图谱，图中数据如下表；峰号化合物保留时间面积面积％理论板数分离度1杂质A5.79954400889.0873008——2兰索拉唑10.6543154353652.6896952103973杂质A13.289742054712.39574614.6674兰索本文档来自技高网...

【技术保护点】
兰索拉唑中兰索氯化物的测定方法，采用高效液相色谱法中的杂质对照品外标法，色谱柱为反相强极性柱，流动相为乙腈‑pH6.2～6.5磷酸盐缓冲液，稀释剂为乙腈‑pH10.5磷酸盐缓冲液，检测波长为210nm。

【技术特征摘要】
1.兰索拉唑中兰索氯化物的测定方法，采用高效液相色谱法中的杂质对照品外标法，色谱柱为反相强极性柱，流动相为乙腈-pH6.2～6.5磷酸盐缓冲液，稀释剂为乙腈-pH10.5磷酸盐缓冲液，检测波长为210nm；所述反相强极性柱选用氨基十六烷基硅胶色谱柱，色谱柱规格为：5μm，250×4.6mm；所述流动相体积比例为：乙腈:pH6.2～6.5磷酸盐缓冲液＝35:65；所述稀释剂体积比例为：乙腈:pH10.5磷酸盐缓冲液＝50:50；磷酸盐缓冲液的配制方法包括：无水磷酸氢二钠加入到水中溶解，用磷酸调PH值；测定时流速控制1.0ml/min，进样量为50μl，柱温为25℃-35℃；具体测定的过程包括：1)、用稀释剂配制杂质对照品液：取对照品2-氯甲基-3-甲基-4-(2,2,2-三氟乙氧基)吡啶盐酸盐约20mg，精密称定，平行2份，置于250ml量瓶，加稀释剂适量使溶解，至刻度，摇匀，取2.0ml稀释到100ml，摇匀...

【专利技术属性】
技术研发人员：时孟军，于利庆，叶家强，唐世锭，陈如，黎德南，张晓程，
申请(专利权)人：桂林华信制药有限公司，
类型：发明
国别省市：广西;45