一种医学检测痰液标本匀质化方法及试剂的制备技术

一种医学检测痰液标本匀质化方法及试剂的制备。本发明专利技术提供了一种符合临床检测的新型痰消化液,由N-乙酰-L-半胱氨酸0.2％(w/v)，胰蛋白酶0.1％(w/v)，三乙醇胺0.4％(w/v)，氯化钾0.2％(w/v)，磷酸二氢钾1.5％(w/v)，磷酸氢二甲0.2％(w/v)，无菌水溶剂组成。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术提供了一种符合临床检测的新型痰消化液，其可有效的匀质化痰液，同时保护痰液中的菌不受损伤，有利于对痰液样本的进一步分析。
技术介绍
临床上一般采用自然咳痰法和吸痰法收集痰液标本，这样获取的痰液标本具有明显的非均质性，细菌等成分的分布很不均匀。随着医学检验的发展和实验室质量控制要求的提高，标本的前处理受到越来越多的重视。根据日常工作观察，痰标本培养阳性率普遍较高，但临床符合率并不理想，经常出现无法检测到痰液中的实际致病菌而误导临床诊治的情况。目前，国内外对临床痰标本细菌分离培养所使用的商品痰消化液主要是由英国OXOID公司生产Sputasol(Liquid)SR0233，其成分包括二硫苏糖醇、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾等。此外，实际临床检测或者实验中还有使用胰蛋白酶、糜蛋白酶等消化痰液的做法。虽然已经有上述痰消化液和消化方法用于痰标本的检测，但临床实践结果表明，这些消化液的匀质化性能和保护样本中菌的能力仍有欠缺。
技术实现思路
专利技术人经过大量研究和比对发现上述问题的主要原因在于二硫苏糖醇、蛋白酶等裂解痰液中粘性蛋白的成分对多种菌菌体也有损害，而这些物质浓度较低时匀质化效果又有不足。专利技术人设计了一种符合临床检测的新型痰消化液，以较低浓度的N-乙酰-L-半胱氨酸和胰蛋白酶组合来裂解痰液中的粘性蛋白质，并辅以螯合剂中毒性较低的三乙醇胺来消除重金属对菌的不良影响，可以在保证对痰液r>的菌低损害的同时取得良好的匀质化效果。一方面，本专利技术提供了一种痰消化液，其成分包括N-乙酰-L-半胱氨酸。进一步地，该痰消化液由下列成分组成：无菌水溶剂。再进一步地，该痰消化液由下列成分组成：无菌水溶剂。另一方面，本专利技术提供了本专利技术的痰消化液在制备临床痰液标本检测试剂盒的应用。另一方面，本专利技术还提供了一种痰液标本匀质化方法，使用本专利技术提供的痰消化液处理痰液标本。具体实施方式1本专利技术的痰消化液和对照痰消化液的配制与使用本专利技术的痰消化液的配制按照下列成分列表配制本专利技术的痰消化液：无菌水溶剂。将配制出的痰消化液分装为10ml/份的小瓶作为贮存液保存在4℃冰箱中。使用时，每10ml贮存液加无菌水90ml配制成工作液。向痰液中加等量工作液，37℃水浴中消化20分钟，10000rpm/min，离心5min，取沉淀物供细菌培养或用作DNA提取使用。对照消化液1：市售Sputasol(Liquid)SR0233(OXOID)，使用方法按说明。对照消化液2：0.1％(w/v)的胰蛋白酶生理盐水溶液，使用时向痰液中加等量消化液，37℃水浴中消化20分钟，10000rpm/min，离心5min，取沉淀物供细菌培养或用作DNA提取使用。对照消化液3：0.1％(w/v)N-乙酰-L-半胱氨酸生理盐水溶液，使用时向痰液中加等量消化液，37℃水浴中消化20分钟，10000rpm/min，离心5min，取沉淀物供细菌培养或用作DNA提取使用。对照消化液4：中国专利申请201110126201.2号实施例1中的痰消化液，使用方法按该申请说明书中的记载。2各种痰消化液消化效果比较2.1匀质化效果取吸痰样品1份，以40ml无菌生理盐水洗涤3次以去除痰液表面的呼吸道正常菌群。按照实施例1中所述方法消化痰液。被消化的痰液被分为10等份接种于血平板、麦康凯平板和巧克力平板上，置于35℃CO2温箱中培养。3日后通过菌落形态和镜检来区分菌种类，记录每份痰液在三种平板上培养出的菌种类数。结果如下： 1种2种3种大于3种本专利技术的痰消化液0172对照消化液11342对照消化液22152对照消化液35230对照消化液42431可见经本专利技术的痰消化液消化的痰液标本中，各份中菌种类数较为接近，有70％处于同一区间(3种)，明显好于对照痰消化液。2.2对标本中菌的保护效果自然咳痰样品100份，以20ml无菌生理盐水洗涤3次以去除痰液表面的呼吸道正常菌群。按照实施例1中所述方法消化痰液。将消化的痰液接种于血平板、麦康凯平板和巧克力平板上，置于35℃CO2温箱中培养。3日后通过菌落形态和镜检来区分菌种类，记录每种方法处理的痰液在三种平板上培养出的菌种类数。结果如下： 1种2种3种大于3种本专利技术的痰消化液3295117对照消化液12424439对照消化液23027403对照消化液31631458对照消化液428194310结果表明本专利技术的痰消化液消化痰标本得到的菌种类明显较对照消化液多，证明了本专利技术的痰消化液对标本中菌的损害较小。上述实施例证明，本专利技术的符合临床检测的新型痰消化液通过以较低浓度的N-乙酰-L-半胱氨酸和胰蛋白酶组合来裂解痰液中的粘性蛋白质，并辅以螯合剂中毒性较低的三乙醇胺来消除重金属对菌的不良影响，可以在保证对痰液中的菌低损害的同时取得良好的匀质化效果。用于临床检测能更准确的反应痰液中菌的存在情况，有效的降低误诊率。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种痰消化液，其成分包括N‑乙酰‑L‑半胱氨酸。

【技术特征摘要】
1.一种痰消化液，其成分包括N-乙酰-L-半胱氨酸。
2.权利要求1的痰消化液，由下列成分组成：
无菌水溶剂。
3.权利要求2的痰消化液，由下列成分组成：<...

【专利技术属性】
技术研发人员：燕启江，郭周萍，
申请(专利权)人：四川金域医学检验中心有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51