本发明专利技术公开了达沙替尼抗肺纤维化应用，属于肺纤维化的防治技术领域。在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化模型中，博来霉素处理14天后灌胃给予达沙替尼dasatinib的情况下，达沙替尼dasatinib可以显著改善肺纤维化状况，羟脯氨酸含量也显著下降。同时，达沙替尼dasatinib显著抑制博来霉素诱导的新生血管生成。因此，本发明专利技术的实验结果充分支持达沙替尼dasatinib在制备抗肺纤维化药物和/或保健品的制备中应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于肺纤维化的防治
，涉及达沙替尼抗肺纤维化的应用。
技术介绍
各型肺纤维化(pulmonary fibrosis, PF)皆以成纤维细胞(fibroblast, FB)增殖及大量细胞外基质(ECM)聚集为特征。多种因素均可引起肺纤维化，如职业性粉尘(Si02等)、放射性损伤及某些药物(博莱霉素)等，此外还有一类不明病因的肺纤维化一特发性肺纤维化(id1pathic pulmonary fibrosis, IPF)。虽然起因不同，但纤维化的发展与结局基本相似，即由下呼吸道炎症细胞浸润起始，逐步引起肺泡上皮细胞和血管内皮细胞损伤，并伴有肌成纤维细胞(myofibroblast, MF)和II型肺泡上皮细胞增殖的细胞因子等的释放，致细胞外基质蛋白和胶原沉积，最终引起肺结构的损害。肺纤维化晚期多引起心、肺功能衰竭而死亡，对人类危害极大。目前肺纤维化发生的确切机制尚不清楚，早期防治亦未获得突破性进展。达沙替尼Clasatinibjv^SC22H26ClN7O2S.H20，为白色或类白色、双凸椭圆型薄膜衣片。达沙替尼属多酪氨酸激酶抑制剂，已经用于治疗包括甲磺酸伊马替尼(Imatinibmesylate/Gleevec)耐药或不能耐受的慢性骨髓性白血病所有病期(慢性期、加速期、淋巴系细胞急变期和髓细胞急变期)的成人患者。同时，FDA也经正常程序批准达沙替尼治疗对其他疗法耐药或不能耐受的费城染色体阳性的急性淋巴细胞性白血病成人患者。目前尚无达沙替尼dasatinib在肺纤维化中的应用报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供达沙替尼抗肺纤维化的应用，达沙替尼dasatinib可应用于防治肺纤维化的药物的制备。本专利技术是通过以下技术方案来实现:达沙替尼在制备抗肺纤维化药物和或/保健品中的应用。所述的药物和或/保健品为抑制新生血管生成的药物和或/保健品。所述的药物和或/保健品为抑制博莱霉素诱导的新生血管生成的药物和或/保健品O所述的药物和或/保健品为降低肺纤维化组织间质中胶原堆积量的药物和或/保健品。所述的药物和或/保健品为降低肺纤维化组织内羟脯氨酸含量的药物和或/保健品O达沙替尼的动物给药量为10?20mg/kg。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果:本专利技术公开了达沙替尼(dasatinib)在抗肺纤维化中的应用。在经博来霉素诱导的小鼠肺纤维化模型中，博来霉素处理14天后灌胃给予达沙替尼dasatinib的情况下，达沙替尼(dasatinib)可以显著改善肺纤维化状况，羟脯氨酸含量也显著下降。同时，达沙替尼(dasatinib)显著抑制博来霉素诱导的新生血管生成。因此，本专利技术的实验结果充分支持达沙替尼(dasatinib)在制备抗肺纤维化药物和/或保健品的制备中应用。【附图说明】图1为博来霉素诱导14天后给予达沙替尼dasatinib改善野生鼠中博来霉素诱导的肺纤维化(HE和Masson染色)结果图；图2为博来霉素诱导14天后给予达沙替尼dasatinib改善野生鼠中博来霉素诱导的肺纤维化(羟脯氨酸含量)结果图；图3为达沙替尼抑制博来霉素诱导的肺组织的血管生成结果图；图4为达沙替尼抑制博来霉素诱导的肺组织的血管生成结果统计结果图。【具体实施方式】下面结合具体的实施例对本专利技术做进一步的详细说明，所述是对本专利技术的解释而不是限定。用博莱霉素制作的肺纤维化模型，其病理组织学和生理学改变与人类肺纤维化近似，因此成为肺纤维化造模的常用药物。博莱霉素经鼻腔滴注给药可诱导C57小鼠发生肺纤维化。在博来霉素滴鼻给药14天后，灌胃给予药物达沙替尼dasatinib，剂量为10mg/kg，对照组为等剂量的水。达沙替尼dasatinib的配制:首先配制达沙替尼dasatinib储存浓度，称取dasatinib溶于80mmol/LpH2.1的柠檬酸中，终浓度为10mg/ml ;然后配制达沙替尼dasatinib的工作浓度:用柠檬酸钠(80mmol/L, pH3.1)稀释10倍成lmg/mL。小鼠灌胃剂量为10mg/kg体重。小鼠博来霉素诱导的肺纤维化模型的建立:取6-8周成年小鼠，腹腔注射I %戊巴比妥钠100 μ L左右，将其放于笼中，让其自然晕倒，左手揪住小鼠颈部皮肤，使其仰卧在手心上，小指夹住尾巴固定住小鼠，采用加样枪通过鼻腔给药的方式给予博来霉素(5mg/kg体重)或者PBS，给药的过程中不时观察小鼠的呼吸频率，以免小鼠窒息死亡导致实验失败。将它们置于实验室条件下4周(即通气良好的20°C恒温环境中，每12小时光照与黑暗交替，水粮足量，自由取用)，2周后每天给予达沙替尼dasatinib (10mg/kg体重)灌胃，4周后取小鼠肺脏组织，石蜡包埋固定。1.1取6-8周成年C57小鼠20只，采用随机分组的办法，将小鼠随机分为四组，即PBS-水、PBS-达沙替尼、博来霉素-水、博来霉素-达沙替尼，按照如上所述的方法建模，在开始建模后第14天开始灌胃10mg/kg剂量的达沙替尼dasatinib，对照组则灌胃水，至第28天停止灌胃。处死小鼠后，收集小鼠肺组织，用PBS冲洗2次，去除表面残余的血液。用数码相机留下全肺的照片，右肺行10%中性甲醛固定，用以后续的形态学染色，如HE染色、Masson染色等；左肺则直接放置液氮里，用于后续的蛋白检测和羟脯氨酸含量的测定。结果如图1所示，10mg/kg达沙替尼dasatinib的处理，肺组织损伤部位已经明显降低(右/上)，Masson染色显示胶原堆积也显著减少(右/下)。因此，达沙替尼dasatinib的处理可以显著缓解肺纤维化的形成。1.2人体标本实验显示，肺纤维化晚期间质中堆积大量的胶原，胶原含量的多少反映了肺纤维化的水平。而羟脯氨酸在胶原蛋白中占13.4%，因此羟脯氨酸的含量能反映肺纤维化过程中胶原堆积的情况，进而反应肺纤维化程度。羟脯氨酸含量的测定:采用南京建成羟脯氨酸(HYP)测定试剂盒(碱水解法)可以准确测定肺组织中羟脯氨酸的含量，步骤如下:准确称取肺组织的重量；调PH至中性，定容至10mL，加活性碳离心；取上清ImL加Rl静置10分钟，加R2静置5分钟，加R3，60°C水浴15分钟；3500转/分离心10分钟，取上清550nm波长测定吸光度值。结果如图2所示，由图可见，博来霉素诱导的肺纤维化组织内羟脯氨酸含量较PBS对照组明显升高，而达沙替尼dasatinib处理后，羟脯氨酸的含量降至几乎与对照组持平，且两组之间有显著性差异，说明达沙替尼dasatinib显著缓解了博来霉素诱导的肺纤维化状况。1.3病理性的血管生成是肺纤维化等疾病的关键环节，这种持续、无控性、无规则的新血管生成推动了疾病的发展。达沙替尼为多酪氨酸激酶抑制剂，主要靶点有BCR/Abl，Src, c-Kit, ephrin受体以及其他酪氨酸激酶受体等，而这些靶点多与血管生成有关，因此明确达沙替尼dasatinib在肺纤维化过程中血管生成中的作用尤为重要。⑶31抗原广泛表达于血管的各种细胞上，免疫荧光检测指标可作为机体血管生成的标志。经灌胃达沙替尼dasatinib处理的肺组织切片进行抗⑶31抗体免疫荧光染色，具体步骤如下:切片二甲苯脱錯入梯度酒精，PBS漂洗5min，0.5% Tri本文档来自技高网...
【技术保护点】
达沙替尼在制备抗肺纤维化药物和或/保健品中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：苏金，赵虎，药立波，卜歆，于江天，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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