一种铁皮石斛组培苗的培养方法技术

本发明专利技术公开了一种铁皮石斛组培苗的培养方法，属于植物组织培养技术领域。本发明专利技术的步骤为：步骤一、种子的诱发及培养，选取铁皮石斛果荚作为外植体，将果荚内的种子散播在外植体诱导培养基上，诱导种子萌发形成胚芽；步骤二、胚芽增殖继代培养，将胚芽转接于增殖继代培养基上进行培养，将增殖继代培养基放在培养室中，培养得到铁皮石斛幼苗；步骤三、生根苗的培养，将铁皮石斛幼苗转入到生根培养基上，对其进行培养，培养得到铁皮石斛壮苗；步骤四、移栽，将生根培养后的铁皮石斛壮苗进行炼苗后移栽。本发明专利技术解决了传统的铁皮石斛的培养方法所带来的生根缓慢、成活率不高的问题，为大规模培育出优质铁皮石斛苗提供便利。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物组织培养
，更具体地说，涉及一种铁皮石斛组培苗的培养方法。
技术介绍
铁皮石斛为多年生草本，属附生兰类，俗名铁皮枫斗，因其老茎外呈黑色，又名为黑节草，石斛是常用的名贵中药，应用历史悠久，在《神农本草经》中被列为上品，现已证实它具有滋阴清热、生津益胃、止咳润肺、润喉明目、提高人体免疫功能、防治肿瘤和心血管疾病以及改善睡眠、防治白内障、延年益寿等功效。但由于生长环境特殊和分布局限，以及长期采挖，自然资源日趋枯竭，已被国家列为重点保护的野生药材并鼓励人工大面积栽培铁皮石斛。植物组织培养作为一种有效的技术手段已被广泛应用于生产实践的各个领域。传统的铁皮石斛的培育主要是通过扦插、分株的方式，但其繁殖率较低，生根缓慢，生长周期长。为了满足市场的需求，国内外许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究，期望能进行批量生产并提高种苗的繁殖系数及移栽成活率，这是目前亟待解决的问题。而要提高种苗的移栽成活率，用于组织培养的培养基配方至关重要。通过专利检索，关于铁皮石斛组织培养技术的技术方案，已有相关技术方案公开。如中国专利申请号201310173395.0，申请日为：2013.05.13，专利技术创造名称为：一种铁皮石斛组培苗方法，该申请案公开了一种铁皮石斛组培苗方法，包括如下操作步骤：制作铁皮石斛组培苗的培养基，按下列质量配比装入容器中，然后烧开，经过灌装机将培养基灌入组培瓶中，杀菌消毒，1000～1500克香蕉搅拌成糊状，白糖200～300克，硫酸亚铁90～105毫升，硝酸铵25～33克，硝酸钾35～40克，硫酸镁5～8克，甘氨酸8～12毫升，维生素B11～3毫升，B21～3各毫升，糖氨基酸20～30毫升，萘乙酸20～30毫升，自来水1000毫升；用成熟铁皮石斛种子的花粉播种在上述培养基上，经过3个月后母苗长出。又如，中国专利申请号201210102034.2，申请日为：2012.03.31，专利技术创造名称为：一种铁皮石斛无激素组织培养的方法，该申请案公开了一种铁皮石斛无激素组织培养的方法，该方法包括铁皮石斛种子萌发为圆球茎，圆球茎的生长，增殖分化，茎段的生根、壮苗四个组织培养阶段，这四个阶段所用的培养基依次为：无激素的MS培养基、无激素的MS基本培养基+土豆泥15～20g/L培养基、无激素的MS基本培养基+香蕉泥15～20g/L+土豆泥15～20g/L培养基和无激素的1/2MS基本培养基+香蕉泥15～20g/L+土豆泥15～20g/L培养基。上述两个申请案中：中国专利申请号201310173395.0公开的技术方案是用成熟铁皮石斛种子的花粉播种在上述培养基上，经过3个月后母苗长出，然后人工接种分苗，这种培养方式在实际应用中无法保证成活率，推广应用难度大。中国专利申请号201210102034.2公开的技术方案主要是采用了无激素组织培养技术，但是其培养基的配方不尽合理，需要进一步改进。
技术实现思路
1.专利技术要解决的技术问题本专利技术的目的在于克服现有技术中铁皮石斛组培苗培养技术的不足，提供了一种铁皮石斛组培苗的培养方法，采用本专利技术的技术方案，能够提高铁皮石斛组培苗的繁殖系数及移栽成活率。2.技术方案为达到上述目的，本专利技术提供的技术方案为：本专利技术的一种铁皮石斛组培苗的培养方法，其步骤为：步骤一、种子的诱发及培养选取铁皮石斛果荚作为外植体，用无菌刀切开铁皮石斛果荚，将果荚内的种子散播在外植体诱导培养基上，诱导种子萌发，将外植体诱导培养基置于培养架上，培养温度为23～25℃，光照时间为12小时/天，光照强度1500Lx条件下培养30～45天，种子萌发形成胚芽；步骤二、胚芽增殖继代培养将步骤一中形成的胚芽转接于增殖继代培养基上进行培养，将增殖继代培养基放在培养室中，培养温度为23～25℃，光照时间为12小时/天，光照强度1800～2000Lx条件下培养80～90天，得到铁皮石斛幼苗；步骤三、生根苗的培养将步骤二中得到的铁皮石斛幼苗转入到生根培养基上，对其进行培养，培养温度为25～26℃，光照时间为12小时/天，光照强度1800～2000Lx条件下培养100～120天，得到铁皮石斛壮苗；步骤四、移栽将步骤三进行生根培养后的铁皮石斛壮苗进行炼苗后移栽。更进一步地，步骤一中的外植体诱导培养基以MS培养基作为基本培养基，在基本培养基中添加琼脂5～9g/L，白糖28～30g/L，活性炭0.5～0.6g/L，香蕉65～75g/L，自制有机液肥1.5～2g/L，灭菌剂1.5～2.5ml/L，外植体诱导培养基的pH为5.4～5.8，对上述的外植体诱导培养基进行灭菌操作，其灭菌温度为120～126℃，灭菌时间为10～40min。更进一步地，步骤二中的增殖继代培养基以MS培养基作为基本培养基，在基本培养基中添加琼脂5～9g/L，白糖30～32g/L，活性炭0.48～0.5g/L，香蕉45～50g/L，灭菌剂1.5～2.5ml/L，增殖继代培养基的pH为5.4～5.8，对上述的增殖继代培养基进行灭菌操作，其灭菌温度为120～126℃，灭菌时间为10～40min。更进一步地，步骤三中的生根培养基以自制母液作为基本培养基，在基本培养基中添加琼脂5～9g/L，白糖20～22g/L，活性炭0.5～0.55g/L，香蕉50～55g/L，自制天然有机液肥1.5～1.8g/L，灭菌剂1.5～2.5ml/L，生根培养基的pH为5.4～5.8，对上述的生根培养基进行灭菌操作，其灭菌温度为120～126℃，灭菌时间为10～40min。更进一步地，所述的外植体诱导培养基和生根培养基中添加的自制天然有机液肥配方相同，该自制天然有机液肥的配方具体如下：生麸3000g、乳酸菌500g、全脂奶粉500g、水50000g、米糠3000g、酵母菌500g、磷肥500g、红糖6000g、海带3000g、五花肉500g、鱼骨粉500g、鸡蛋6个。更进一步地，所述的生根培养基中的自制母液的配方具体为：硫酸铵0.46g/L、氯化钙0.17g/L、肌醇0.1g/L、硝酸钾2.83g/L、硫酸亚铁0.03g/L、1-萘乙酸2mg/L、磷酸二氢钾0.4g/L、硫酸镁0.19g/L。3.有益效果采用本专利技术提供的技术方案，与现有技术相比，具有如下显著效果：(1)本专利技术的一种铁皮石斛组培苗的培养方法，通过在铁皮石斛组织培养各阶段采用特定的天然有机物用量和培养基对其进行培养，解决了传统的铁皮石斛的培本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种铁皮石斛组培苗的培养方法，其特征在于，其步骤为：步骤一、种子的诱发及培养选取铁皮石斛果荚作为外植体，用无菌刀切开铁皮石斛果荚，将果荚内的种子散播在外植体诱导培养基上，诱导种子萌发，将外植体诱导培养基置于培养架上，培养温度为23～25℃，光照时间为12小时/天，光照强度1500Lx条件下培养30～45天，种子萌发形成胚芽；步骤二、胚芽增殖继代培养将步骤一中形成的胚芽转接于增殖继代培养基上进行培养，将增殖继代培养基放在培养室中，培养温度为23～25℃，光照时间为12小时/天，光照强度1800～2000Lx条件下培养80～90天，得到铁皮石斛幼苗；步骤三、生根苗的培养将步骤二中得到的铁皮石斛幼苗转入到生根培养基上，对其进行培养，培养温度为25～26℃，光照时间为12小时/天，光照强度1800～2000Lx条件下培养100～120天，得到铁皮石斛壮苗；步骤四、移栽将步骤三进行生根培养后的铁皮石斛壮苗进行炼苗后移栽。

【技术特征摘要】
1.一种铁皮石斛组培苗的培养方法，其特征在于，其步骤为：
步骤一、种子的诱发及培养
选取铁皮石斛果荚作为外植体，用无菌刀切开铁皮石斛果荚，将果荚内的种子散播在外
植体诱导培养基上，诱导种子萌发，将外植体诱导培养基置于培养架上，培养温度为23～25℃，
光照时间为12小时/天，光照强度1500Lx条件下培养30～45天，种子萌发形成胚芽；
步骤二、胚芽增殖继代培养
将步骤一中形成的胚芽转接于增殖继代培养基上进行培养，将增殖继代培养基放在培养
室中，培养温度为23～25℃，光照时间为12小时/天，光照强度1800～2000Lx条件下培养80～90
天，得到铁皮石斛幼苗；
步骤三、生根苗的培养
将步骤二中得到的铁皮石斛幼苗转入到生根培养基上，对其进行培养，培养温度为
25～26℃，光照时间为12小时/天，光照强度1800～2000Lx条件下培养100～120天，得到铁皮
石斛壮苗；
步骤四、移栽
将步骤三进行生根培养后的铁皮石斛壮苗进行炼苗后移栽。
2.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛组培苗的培养方法，其特征在于，步骤一中的外
植体诱导培养基以MS培养基作为基本培养基，在基本培养基中添加琼脂5～9g/L，白糖
28～30g/L，活性炭0.5～0.6g/L，香蕉65～75g/L，自制有机液肥1.5～2g/L，灭菌剂1.5～2.5ml/L，
外植体诱导培养基的pH为5.4～5.8，对上述的外植体诱导培养基进行灭菌操作，其灭菌温度
为120～126℃，灭菌时间为10～40min。
3.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛组培苗的培养方法，其特征在于，步骤二中的增
殖继代培养基以M...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑毓华，于太和，周道阳，
申请(专利权)人：安徽同创现代农业投资发展有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34