本发明专利技术公开了一种切花菊剑叶黄的组织培养方法，选择外植体：选择顶芽完全展开的生长健壮、无病虫害的切花菊剑叶黄幼嫩叶片或者茎段；消毒；培养：培养方式包括叶片组培和茎段组培；诱导芽体：诱导芽体阶段分两个时间段：第一段温度为25℃，光照60%，时长10h，第二段温度为24℃，光照0%，时长10h；继代增殖：将诱导芽体经继代培养后，接种于培养基中，培养基为MS+6-BA2mg/L+NAA0.3mg/L；诱导生根：成苗。本发明专利技术以切花菊品种‘剑叶黄’的叶片和茎段组织为外植体进行再生培养，建立组培快繁体系，满足切花菊市场的产品需求。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种切花菊的组织培养方法，尤其是涉及一种切花菊剑叶黄的组织培养方法。
技术介绍
菊花是菊科菊属多年生宿根草本植物，是世界四大切花之一。传统上菊花主要以扦插和分株进行繁殖，但这两种方法易受季节和外界环境条件的限制，而且繁殖系数较低、幼苗质量较差。随着花卉市场产品质量要求的日益提高，越来越多的企业开始进行菊花种苗的标准化和工厂化生产，组织培养是这一生产过程中的关键技术。切花菊品种‘剑叶黄’为重要的国产切花品种，花黄色，花径4~7 cm，花期8~11月，设施条件下可周年生产。由于其组培过程中愈伤组织诱导和生根诱导比较困难，严重阻碍了该品种的标准化和工厂化生产，国产切花菊品种所占份额较小。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的是针对现有技术的不足，提供一种切花菊剑叶黄的组织培养方法，该方法以切花菊品种‘剑叶黄’的叶片和茎段组织为外植体进行再生培养，建立组培快繁体系，满足切花菊市场的产品需求。为达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种切花菊剑叶黄的组织培养方法，包括如下步骤：选择外植体：选择顶芽完全展开的生长健壮、无病虫害的切花菊剑叶黄幼嫩叶片或者茎段；消毒：用流线型自来水冲洗外植体2小时候，放入烧杯中用无菌水浸泡2小时；然后在无菌超净工作台上将材料浸入75%酒精中消毒10秒，无菌水冲洗4次，然后转入0.1%升汞溶液中灭菌处理，叶片4min，茎段3min；之后用无菌水清洗5次，用无菌滤纸吸干水分，然后接种；培养：培养阶段包括叶片组培和茎段组培；具体步骤如下：诱导芽体：诱导芽体阶段分两个时间段：第一段温度为25℃，光照60%，时长10h，第二段温度为24℃，光照0%，时长10h；继代增殖：将诱导芽体经继代培养后，接种于培养基中； 诱导生根：诱导生根阶段在光照培养箱中进行，培养分两个时间段：第一段温度为25℃，光照60%，时长14h，第二段温度为18℃，光照0%，时长10h； 成苗：将有根的植株从培养瓶中取出，洗净根部黏附的琼脂，栽入珍珠岩基质中；移栽前期将空气湿度保持在75%～85%之间，遮光率为40%，环境温度控制在20℃～26℃，试管苗在20天左右移栽成活，并长出新根新叶；经1～2个月的管理，定植于富含腐殖质，经过灭菌处理的砂质壤土中。作为优选，所述叶片组培在诱导芽体之前先进行愈伤诱导：将外植体接种在MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L或MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.3mg/L 培养基上，培养的温度为24-25℃；愈伤诱导阶段第一周为暗期培养，从第二周起光照时间为10h/d。作为优选，所述诱导芽体的培养基为MS+6-BA 3mg/L+NAA 0.1mg/L或MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L。作为优选，所述诱导生根的培养基为1/2MS+NAA 0.1mg/L+TDZ 0.15mg/L。本专利技术的有益效果是：本专利技术克服了组培过程中愈伤组织诱导和生根诱导困难的问题，提升了产品质量，完善了切花菊市场的生产现状。本专利技术以切花菊品种‘剑叶黄’的叶片和茎段组织为外植体进行再生培养，建立组培快繁体系，满足切花菊市场的产品需求。附图说明图1为本专利技术的流程图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步描述。如图1所示，本专利技术包括如下步骤：选择外植体：选择顶芽完全展开的生长健壮、无病虫害的切花菊剑叶黄幼嫩叶片或者茎段。消毒：用流线型自来水冲洗外植体2小时候，放入烧杯中用无菌水浸泡2小时；然后在无菌超净工作台上将材料浸入75%酒精中消毒10秒，无菌水冲洗4次，然后转入0.1%升汞溶液中灭菌处理，叶片4min，茎段3min；之后用无菌水清洗5次，用无菌滤纸吸干水分，然后接种。培养：培养阶段包括叶片组培和茎段组培；所述叶片组培包括愈伤诱导、诱导芽体、继代增殖、诱导生根及成苗步骤；所述茎段组培包括诱导潜伏芽、继代增殖、诱导生根和成苗步骤。叶片组培：具体步骤如下：愈伤诱导：将外植体接种在MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L或MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.3mg/L 培养基上（30克/升蔗糖和7克/升琼脂粉，Ph5.8-6），培养的温度为24-25℃；愈伤诱导阶段第一周为暗期培养，从第二周起光照时间为10h/d；诱导芽体：培养基为MS+6-BA 3mg/L+NAA 0.1mg/L；诱导丛生芽阶段分两个时间段：第一段温度为25℃，光照60%，时长10h，第二段温度为24℃，光照0%，时长10h；继代增殖：将诱导芽体经继代培养后，接种于培养基MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.3mg/L中； 诱导生根：培养基为1/2MS+NAA 0.1mg/L+TDZ 0.15mg/L；诱导生根阶段在光照培养箱中进行，培养分两个时间段：第一段温度为25℃，光照60%，时长14h，第二段温度为18℃，光照0%，时长10h；成苗（组培苗驯化移栽）：菊花的有根苗移栽成活容易，将有根的植株从瓶中用镊子轻轻夹出，洗净根部黏附的琼脂，栽入珍珠岩基质中；移栽前期将空气湿度保持在75%～85%之间，遮光率为40%，环境温度控制在20℃～26℃，试管苗在20天左右移栽成活，并长出新根新叶；经1～2个月的管理，定植于富含腐殖质，经过灭菌处理的砂质壤土中。表1.选试培养基对叶片愈伤组织诱导30天后的情况 表2.选试培养基对芽体诱导30天后的情况表3.选试培养基对不定芽生根诱导15天后的情况 茎段组培：诱导潜伏芽（诱导芽体）：培养基为MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L；诱导潜伏芽阶段分两个时间段：第一段温度为25℃，光照60%，时长10h，第二段温度为24℃，光照0%，时长10h；继代增殖：将诱导芽体经继代培养后，接种于培养基MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.3mg/L中； 诱导生根：培养基为1/2MS+NAA 0.1mg/L+TDZ 0.15mg/L；诱导生根阶段在光照培养箱中进行，培养分两个时间段：第一段温度为25℃，光照60%，时长14h，第二段温度为18℃，光照0%，时长10h；成苗（组培苗驯化移栽）：菊花的有根苗移栽成活容易，将有根的植株从瓶中用镊子轻轻夹出，洗净根部黏附的琼脂，栽入珍珠岩基质中；移栽前期将空气湿度保持在75%～85%之间，遮光率为40%，环境温度控制在20℃～26℃，试管苗在20天左右移栽成活，并长出新根新叶；经1～2个月的管理，定植于富含腐殖质，经过灭菌处理的砂质壤土中。表4.选试培养基对芽体诱导30天后的情况 表5.选试培养基对不定芽生根诱导15天后的情况激素类物质6-BA、NAA对形成愈伤组织、诱导芽体均起到重要的作用，NAA对诱导生根期主导作用。从诱导的周期长短可以得到以茎段为外植体进行菊花的快速繁殖周期短且效果明显。...
【技术保护点】
一种切花菊剑叶黄的组织培养方法，其特征在于：包括如下步骤：选择外植体：选择顶芽完全展开的生长健壮、无病虫害的切花菊剑叶黄幼嫩叶片或者茎段；消毒：用流线型自来水冲洗外植体2小时候，放入烧杯中用无菌水浸泡2小时；然后在无菌超净工作台上将材料浸入75%酒精中消毒10秒，无菌水冲洗4次，然后转入0.1%升汞溶液中灭菌处理，叶片4min，茎段3min；之后用无菌水清洗5次，用无菌滤纸吸干水分，然后接种；培养：培养方式包括叶片组培和茎段组培；具体步骤如下：诱导芽体：诱导芽体阶段分两个时间段：第一段温度为25℃，光照60%，时长10h，第二段温度为24℃，光照0%，时长10h；继代增殖：将诱导芽体经继代培养后，接种于培养基中，培养基为MS+6‑BA 2mg/L+NAA 0.3mg/L； 诱导生根：诱导生根阶段在光照培养箱中进行，培养分两个时间段：第一段温度为25℃，光照60%，时长14h，第二段温度为18℃，光照0%，时长10h；成苗：将有根的植株从培养瓶中取出，洗净根部黏附的琼脂，栽入珍珠岩基质中；移栽前期将空气湿度保持在75%～85%之间，遮光率为40%，环境温度控制在20℃～26℃，试管苗在20天左右移栽成活，并长出新根新叶；经1～2个月的管理，定植于富含腐殖质，经过灭菌处理的砂质壤土中。...
【技术特征摘要】
1.一种切花菊剑叶黄的组织培养方法，其特征在于：包括如下步骤：
选择外植体：选择顶芽完全展开的生长健壮、无病虫害的切花菊剑叶黄幼嫩叶片或者茎段；
消毒：用流线型自来水冲洗外植体2小时候，放入烧杯中用无菌水浸泡2小时；然后在无菌超净工作台上将材料浸入75%酒精中消毒10秒，无菌水冲洗4次，然后转入0.1%升汞溶液中灭菌处理，叶片4min，茎段3min；之后用无菌水清洗5次，用无菌滤纸吸干水分，然后接种；
培养：培养方式包括叶片组培和茎段组培；具体步骤如下：
诱导芽体：诱导芽体阶段分两个时间段：第一段温度为25℃，光照60%，时长10h，第二段温度为24℃，光照0%，时长10h；
继代增殖：将诱导芽体经继代培养后，接种于培养基中，培养基为MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.3mg/L；
诱导生根：诱导生根阶段在光照培养箱中进行，培养分两个时间段：第一段温度为25℃，光照60%，时长14h，第二段温度为18℃，光照0%，时长10h；
成苗：将有根的植株从培养瓶中取出，洗净根部黏附的琼脂，栽入...
【专利技术属性】
技术研发人员：李永华，张开明，李永，贺丹，张凌，王政，雷雅凯，张曼，张淑梅，蒋鹤，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：河南;41
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