本发明专利技术公开了一种透射电镜检测古代丝织品的方法，采用免疫技术的原理来检测古代丝织品。即将胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体浸渍于文物样的表面，洗涤干净后，形成抗原抗体复合物，然后将丝织品文物样切成很小的薄片，置于透射电镜下观察，可以根据样品表面有没有黑色的金纳米颗粒出现来定性分析。本发明专利技术的有益成果为：1本发明专利技术采用免疫技术的原理对古代丝织品进行了检测，一方面，灵敏度高，操作简单。另一方面能够避免来自其它蛋白质的干扰，特异性强。2与现有技术相比，本发明专利技术成本低，操作简便，易于分析。
【技术实现步骤摘要】
—种透射电镜检测古代丝织品的方法
本专利技术属于古代丝织品的检测领域，尤其涉及。
技术介绍
丝绸是中华民族宝贵的文化和物质遗产，但是近年来关于丝绸的起源问题却众说纷纭，难以有一个简便的科学论据。关于古代丝绸的检测，传统的检测方法主要有显微镜观察，光谱，质谱分析等，但是由于受到墓葬环境的影响，丝绸已经腐烂不堪，面目全非，并且受到杂质的干扰，谱图出现很多杂峰，后期解析极为困难。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是:针对上述现有技术存在的问题提出一种快速、简单的透射电镜检测古代丝织品的方法。 为此本专利技术所采取的技术方案是:，其特征在于采用步骤如下: A)PBS7.4 洗涤液配制:KC1 0.2g，KH2P04 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HP04 1.42g，用 800ml 蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HC1调节PH至7.4 ;B)金纳米粒子的制备:采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为25-50nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.0-1.5ml的质量浓度为1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子；C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备:用0.lmol/1的K2C03溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.0，边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体20-50 μ L ;所述抗体浓度为3.15mg/ml ;接着加入5ml的质量浓度为1%_10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000-11000r/min下离心40_60min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为 0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4°C下保存；D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为1、11，放置于打孔皿中；1设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入80-120 μ L的PBS溶液，II组加入80-120 μ L的由ΡΗ7.4的PBS溶液稀释10-50倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37°C下孵育lh ;然后在B组中加入2ml的PH为7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；E)采用超薄切片机将I组和II组分别切成50-70nm厚的超薄切片，然后进行透射电镜制样观察；若I没有观察到黑色的纳米颗粒，II观察到了黑色的纳米颗粒，证明所检测的文物样为丝织品。 本专利技术采用免疫技术的原理来检测古代丝织品。即将胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体浸溃于文物样的表面，洗涤干净后，形成抗原抗体复合物，然后将丝织品文物样切成很小的薄片，置于透射电镜下观察，可以根据样品表面有没有黑色的金纳米颗粒出现来定性分析。 本专利技术的有益成果为:1本专利技术采用免疫技术的原理对古代丝织品进行了检测，一方面，灵敏度高，操作简单。另一方面能够避免来自其它蛋白质的干扰，特异性强。2与现有技术相比，本专利技术成本低，操作简便，易于分析。 【具体实施方式】 实施例1采用步骤如下: A)PBS7.4 洗涤液配制:KC1 0.2g，KH2P04 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HP04 1.42g，用 800ml 蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HC1调节PH至7.4 ;B)金纳米粒子的制备:采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为25nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入质量浓度为1.0ml的1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子；C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备:用0.lmol/1的1(20)3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.0,边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体20 μ L ;所述抗体浓度为3.15mg/ml ;接着加入5ml的质量浓度为1%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000r/min下离心40min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4°C下保存；D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为1、II，放置于打孔皿中；1设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入80 μ L的PBS溶液，II组加入80 μ L的由ΡΗ7.4的PBS溶液稀释10倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37°C下孵育lh ;然后在B组中加入2ml的PH为7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；E)采用超薄切片机将I组和II组分别切成50nm厚的超薄切片，然后进行透射电镜制样观察；若I没有观察到黑色的纳米颗粒，II观察到了黑色的纳米颗粒，证明所检测的文物样为丝织品。 实施例2采用步骤如下: A)PBS7.4 洗涤液配制:KC1 0.2g，KH2P04 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HP04 1.42g，用 800ml 蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HC1调节PH至7.4 ;B)金纳米粒子的制备:采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为40nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.3ml的质量浓度为1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子；C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备:用0.lmol/1的1(20)3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.0,边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体35 μ L ;所述抗体浓度为3.15mg/ml ;接着加入5ml的质量浓度为5%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在10000r/min下离心50min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4°〇下保存；D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为1、11，放置于打孔皿中；1设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入100 μ L的PBS溶液，II组加入100 μ L的由ΡΗ7.4的PBS溶液稀释30倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37°C下孵育lh ;然后在B组中加入2ml的PH为7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；E)采用超薄切片机将I组和II组分别切成60nm厚的超薄切片，然后进行透射电镜制样观察；若I没有观察到黑色的纳米颗粒，II观察到了黑色的纳米颗粒，证明所检测的文物样为丝织品。 实施例3采用步骤如下: A)PBS7.4 洗涤液配制:KC1 0.2g，KH2P04 0.27g，NaCl 8.0本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种透射电镜检测古代丝织品的方法，其特征在于采用步骤如下：A)PBS7.4洗涤液配制：KCl 0.2g，KH2PO4 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HPO4 1.42g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HCl调节PH至7.4；B)金纳米粒子的制备：采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为25‑50nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.0‑1.5ml的质量浓度为1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子；C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备：用0.1mol/l的K2CO3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.0，边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体20‑50μL；所述抗体浓度为3.15mg/ml；接着加入5ml的质量浓度为1%‑10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000‑11000r/min下离心40‑60min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris‑HCl溶液，所述Tris‑HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温‑20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4℃下保存；D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为I、II，放置于打孔皿中；I设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入80‑120μL的PBS溶液，II 组加入80‑120μL的由PH7.4的PBS溶液稀释10‑50倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37℃下孵育1h；然后在B组中加入2ml的PH为7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；E)采用超薄切片机将I组和II组分别切成50‑70nm厚的超薄切片，然后进行透射电镜制样观察；若I没有观察到黑色的纳米颗粒，II观察到了黑色的纳米颗粒，证明所检测的文物样为丝织品。...
【技术特征摘要】
1.一种透射电镜检测古代丝织品的方法，其特征在于采用步骤如下:A)PBS7.4 洗涤液配制=KCl 0.2g，KH2PO4 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HPO4 1.42g，用 800ml 蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HCl调节PH至7.4 ; B)金纳米粒子的制备:采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为25-50nm的金纳米粒子；即将10ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.0-1.5ml的质量浓度为1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子； C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备:用0.lmol/1的K2CO3溶液将10ml的胶体金溶液调节PH至9.0,边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体20-50 μ L ;所述抗体浓度为3.15mg/ml ;接着加入5ml的质量浓度为1%_10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在.9000-11000r/min下离心40_...
【专利技术属性】
技术研发人员：李毅，杨颖超，王秉，
申请(专利权)人：浙江理工大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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