莫能菌素预混剂的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种莫能菌素预混剂的制备方法，具体为将肉桂地链霉菌菌种制备后先进行种子摇瓶培养和种子罐培养，当培养至种子龄为20～24h，培养液pH值为6.6～7.1，生物量为10％以上，镜检结果显示菌丝粗壮呈网状、舒展、染色深、无杂菌时，转为发酵培养。待残油量为0.7％以下，生物量在40％以上，菌丝浓度为40～50％，莫能菌素效价不低于40000u/mL时，发酵结束。最后采用一步喷雾干燥法进行莫能菌素的提取，所制得的莫能菌素成品含量为20％以上，颗粒率达75％以上。另外，该方法发酵工艺简单，能有效提高发酵单位，降低生产成本，同时避免了动物源性氮源以及化学有机溶剂的使用。

【技术实现步骤摘要】
莫能菌素预混剂的制备方法
本专利技术属于兽药领域，涉及一种抗生素预混剂的制备方法，具体涉及莫能菌素预混剂的制备方法。
技术介绍
莫能菌素(monensin)，属聚醚类抗生素，在1967年首先由Haney等人从肉桂地链霉菌(Streptomycescinnamonensis)的发酵液中分离得到。20世纪70年代作为抗球虫药物开始投放市场。美国、日本分别于1974年、1977年正式批准将其作为饲料添加剂，我国于1985年获批，并应用于生产。目前已有40多个国家用作肉牛、肉羊的增重剂和猪的生长促进剂。莫能菌素对阴性菌无作用，但对葡萄球菌、杆菌、梭菌、链球菌、霉菌(青霉菌、念珠菌)有一定的抑制作用。莫能菌素可以影响反刍动物瘤胃内能量代谢，改善瘤胃发酵，提高丙酸与乙酸的产出比例，降低挥发性脂肪酸，减少甲烷生成，提高蛋白质利用效率。因此能够显著提高反刍动物的饲料利用率和促进生长的作用。随着畜牧业的进一步发展，近年来莫能预混剂的市场需求量不断扩大，而国内外客户对莫能预混剂的质量要求越来越高，而现有的一些制备方法存在下述缺点：提取工艺复杂，化学溶剂消耗量大，从而产生大量的废溶剂和废渣，生产成本和环保成本较大；产品颗粒率较低，不利于莫能菌素在饲料中的分散；发酵培养过程中使用了国内外饲料行业中严格禁止使用的原料如鱼粉等，致使生产扩大化无法实现。有鉴于此，有必要对现有的莫能菌素预混剂的制备方法作进一步的改进。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种莫能菌素预混剂的制备方法，该方法采用一步喷雾干燥，提高了产品颗粒率。本专利技术采用的具体技术方案如下：莫能菌素预混剂的制备方法，包括以下步骤：a.种子培养将经过菌种制备得到的肉桂地链霉菌依次进行种子摇瓶培养和种子罐培养；所述种子摇瓶培养的培养条件为以220～260rpm的转速，在32±0.5℃条件下培养24～27h；所述种子罐培养的接种量为0.0035％种子液；所述种子罐培养的培养条件为在温度为32±0.5℃，罐压为0.02～0.05MPa条件下培养20～24h；所述种子摇瓶培养所需的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：黄豆饼粉1～1.5％，酵母粉0.1～0.3％，葡萄糖0.2～0.5％，糊精1.0～2.0％，碳酸钙0.05～0.1％，余量为水；培养基灭菌后pH值为6.9～7.1；所述种子罐培养的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：黄豆饼粉1.0～1.5％，酵母粉0.1～0.25％，葡萄糖1.5～2.5％，碳酸钙0.1～0.25％，消泡剂0.05～0.1％，余量为水；培养基灭菌后pH值为6.6～7.1；b.发酵培养将步骤a培养过后的含菌种的培养液转入发酵罐内进行发酵培养，发酵培养条件为：罐内温度34±1℃，溶氧量30％以上，罐压0.03～0.05MPa；发酵过程中通过添加氨水溶液、植物油和无菌水，以使发酵液pH值维持在6.5～6.6之间，植物油按质量百分浓度计不低于3％，溶氧量不低于30％，发酵过程结束前24～48小时停止加植物油；当发酵液pH值达6.6～7.0，残油量为0.7％以下，生物量在40％以上，莫能菌素效价不低于40000U/mL时，发酵结束；发酵培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：葡萄糖2.0～3.8％，黄豆饼粉1.8～3.7％，植物油1.9～2.5％，油酸甲酯0.05～1.0％，碳酸钙0.15～0.35％，硫酸钠0.15～0.22％，硝酸钠0.15～0.22％，氯化锰0.01～0.03％，硫酸亚铁0.005～0.01％，抗坏血酸0.001～0.002％，硫酸铝0.05～0.07％，磷酸氢二钾0.005～0.01％，消泡剂0.01～0.02％，余量为水；c.提取发酵结束后，先将发酵液pH值调至10～11，然后再加热至63℃并保温3小时，分别加入无水硅酸钠和碳酸钙后，将发酵液pH值调至7～8并放置30分钟，最后喷雾干燥；所述无水硅酸钠加入量为发酵液重量的6％，所述碳酸钙加入量为发酵液重量的0～35％；所述喷雾干燥的条件为：进风温度140～160℃；干燥室内温度65～95℃，排风温度60～70℃，干燥器内压力-280～-380MPa。优选的，所述步骤a中所述种子摇瓶培养所需的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：黄豆饼粉1.5％，酵母粉0.2％，葡萄糖0.4％，糊精1.0％，碳酸钙0.06％，余量为水。优选的，所述步骤a中所述种子罐培养的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：黄豆饼粉1.5％，酵母粉0.2％，葡萄糖2％，碳酸钙0.25％，消泡剂0.1％，余量为水。优选的，所述步骤a中所述发酵培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：葡萄糖3％，黄豆饼粉3％，植物油2％，油酸甲酯1.0％，碳酸钙0.2％，硫酸钠0.2％，硝酸钠0.2％，氯化锰0.02％，硫酸亚铁0.01％，抗坏血酸0.001％，硫酸铝0.06％，磷酸氢二钾0.01％，消泡剂0.01％，余量为水。优选的，所述步骤a为将经过菌种制备得到的菌种依次进行种子摇瓶培养和种子罐培养；所述种子摇瓶培养的培养条件为以220～260rpm的转速，在32±0.5℃条件下培养25h；所述种子罐培养的接种量为0.0035％种子液；所述种子罐培养的培养条件为在温度为32±0.5℃，罐压为0.04MPa条件下培养24h。优选的，所述步骤b为将步骤a培养过后的含菌种的培养液转入发酵罐内进行发酵培养，发酵培养条件为：罐内温度为34±1℃，溶氧量在30％以上，罐压在0.03MPa，发酵过程中通过添加氨水溶液、植物油和无菌水，以使发酵液pH值维持在6.5～6.6之间，植物油按质量百分浓度计不低于3％，溶氧量不低于30％，发酵过程结束前24～48小时停止加植物油；当发酵液pH为6.9，残油量为0.6％，生物量在45％，莫能菌素效价为45690u/mL时，发酵结束。优选的，所述步骤c为先将发酵液pH值调至10.8，然后加热到63℃并保温3小时，加入无水硅酸钠和碳酸钙后将发酵液pH值调至7并放置30分钟，最后喷雾干燥；所述无水硅酸钠加入量为发酵液重量的6％，所述碳酸钙加入量为发酵液重量的20％；所述喷雾干燥的条件为：进风温度155℃；干燥室内温度87℃，排风温度67℃，干燥器内压力-300MPa。在种子摇瓶培养过程中，当培养液pH值为6.6～6.7，生物量为6.9～15％，颜色为灰白色，且镜检结果显示菌丝生长良好，带有许多分枝成纤维状、无杂菌时，转为种子罐培养。在种子罐培养过程中，当培养至种子龄为20～24h，培养液pH值为6.6～7.1，生物量为10％以上，镜检结果显示菌丝粗壮呈网状、舒展、染色深、无杂菌时，转为发酵培养。本专利技术的有益效果在于：本专利技术发酵工艺简单，能有效提高发酵单位，降低生产成本，同时避免了动物源性氮源以及化学有机溶剂的使用，防止有机溶剂对莫能菌素预混剂造成污染，避免了对动物的危害；并且采用本专利技术所述培养基利于莫能菌素特殊结构的合成，从而提高莫能菌素收率，还能有利于后续对莫能菌素预混剂的提取；另外，采用一步喷雾干燥，不会产生污水，降低了环境污染；所制得的莫能菌素成品含量为20％以上，颗粒率达75％以上，显著提高了产品颗粒率，实现莫能菌素稳定高效生产。具体实施方式下面对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的实本文档来自技高网...

【技术保护点】
莫能菌素预混剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a.种子培养将经过菌种制备得到的肉桂地链霉菌依次进行种子摇瓶培养和种子罐培养；所述种子摇瓶培养的培养条件为以220～260rpm的转速，在32±0.5℃条件下培养24～27h；所述种子罐培养的接种量为0.0035％种子液；所述种子罐培养的培养条件为在温度为32±0.5℃，罐压为0.02～0.05MPa条件下培养20～24h；所述种子摇瓶培养所需的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：黄豆饼粉1～1.5％，酵母粉0.1～0.3％，葡萄糖0.2～0.5％，糊精1.0～2.0％，碳酸钙0.05～0.1％，余量为水；培养基灭菌后pH值为6.9～7.1；所述种子罐培养的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：黄豆饼粉1.0～1.5％，酵母粉0.1～0.25％，葡萄糖1.5～2.5％，碳酸钙0.1～0.25％，消泡剂0.05～0.1％，余量为水；培养基灭菌后pH值为6.6～7.1；b.发酵培养将步骤a培养过后的含菌种的培养液转入发酵罐内进行发酵培养，发酵培养条件为：罐内温度34±1℃，溶氧量30％以上，罐压0.03～0.05MPa；发酵过程中通过添加氨水溶液、植物油和无菌水，以使发酵液pH值维持在6.5～6.6之间，植物油按质量百分浓度计不低于3％，溶氧量不低于30％，发酵过程结束前24～48小时停止加植物油；当发酵液pH值达6.6～7.0，残油量为0.7％以下，生物量在40％以上，莫能菌素效价不低于40000U/mL时，发酵结束；发酵培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：葡萄糖2.0～3.8％，黄豆饼粉1.8～3.7％，植物油1.9～2.5％，油酸甲酯0.05～1.0％，碳酸钙0.15～0.35％，硫酸钠0.15～0.22％，硝酸钠0.15～0.22％，氯化锰0.01～0.03％，硫酸亚铁0.005～0.01％，抗坏血酸0.001～0.002％，硫酸铝0.05～0.07％，磷酸氢二钾0.005～0.01％，消泡剂0.01～0.02％，余量为水；c.提取发酵结束后，先将发酵液pH值调至10～11，然后再加热至63℃并保温3小时，分别加入无水硅酸钠和碳酸钙后，将发酵液pH值调至7～8并放置30分钟，最后喷雾干燥；所述无水硅酸钠加入量为发酵液重量的6％，所述碳酸钙加入量为发酵液重量的0～35％；所述喷雾干燥的条件为：进风温度140～160℃；干燥室内温度65～95℃，排风温度60～70℃，干燥器内压力‑280～‑380MPa。...

【技术特征摘要】
1.莫能菌素预混剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a.种子培养将经过菌种制备得到的肉桂地链霉菌依次进行种子摇瓶培养和种子罐培养；所述种子摇瓶培养的培养条件为以220～260rpm的转速，在32±0.5℃条件下培养24～27h；所述种子罐培养的接种量为0.0035％种子液；所述种子罐培养的培养条件为在温度为32±0.5℃，罐压为0.02～0.05MPa条件下培养20～24h；所述种子摇瓶培养所需的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：黄豆饼粉1～1.5％，酵母粉0.1～0.3％，葡萄糖0.2～0.5％，糊精1.0～2.0％，碳酸钙0.05～0.1％，余量为水；培养基灭菌后pH值为6.9～7.1；所述种子罐培养的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：黄豆饼粉1.0～1.5％，酵母粉0.1～0.25％，葡萄糖1.5～2.5％，碳酸钙0.1～0.25％，消泡剂0.05～0.1％，余量为水；培养基灭菌后pH值为6.6～7.1；b.发酵培养将步骤a培养过后的含菌种的培养液转入发酵罐内进行发酵培养，发酵培养条件为：罐内温度34±1℃，溶氧量30％以上，罐压0.03～0.05MPa；发酵过程中通过添加氨水溶液、植物油和无菌水，以使发酵液pH值维持在6.5～6.6之间，植物油按质量百分浓度计不低于3％，溶氧量不低于30％，发酵过程结束前24～48小时停止加植物油；当发酵液pH值达6.6～7.0，残油量为0.7％以下，生物量在40％以上，莫能菌素效价不低于40000U/mL时，发酵结束；发酵培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：葡萄糖2.0～3.8％，黄豆饼粉1.8～3.7％，植物油1.9～2.5％，油酸甲酯0.05～1.0％，碳酸钙0.15～0.35％，硫酸钠0.15～0.22％，硝酸钠0.15～0.22％，氯化锰0.01～0.03％，硫酸亚铁0.005～0.01％，抗坏血酸0.001～0.002％，硫酸铝0.05～0.07％，磷酸氢二钾0.005～0.01％，消泡剂0.01～0.02％，余量为水；c.提取发酵结束后，先将发酵液pH值调至10～11，然后再加热至63℃并保温3小时，分别加入无水硅酸钠和碳酸钙后，将发酵液pH值调至7～8并放置30分钟，最后喷雾干燥；所述无水硅酸钠加入量为发酵液重量的6％，所述碳酸钙加入量为发酵液重量的0～35％；所述喷雾干燥的条件为：进风温度140～160℃；干燥室内温度65～95℃，排风温度60～70℃，干燥器...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢昌贤，邓维康，刘运添，王鹏飞，
申请(专利权)人：金河生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：内蒙古;15