本发明专利技术公开了一种电化学生物传感器，通过液液界面法合成单分散金纳米薄膜并修饰到ITO电极表面并进一步修饰乙酰胆碱酯酶和壳聚糖，得到复合电化学生物传感器。该电化学生物传感器可以用于检测有机磷农药中甲胺磷，具有较宽的检测范围，低检出限，良好的稳定性与重现性，并可用于蔬菜有机磷农药甲胺磷残留的实样检测。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种电化学生物传感器，通过液液界面法合成单分散金纳米薄膜并修饰到ITO电极表面并进一步修饰乙酰胆碱酯酶和壳聚糖，得到复合电化学生物传感器。该电化学生物传感器可以用于检测有机磷农药中甲胺磷，具有较宽的检测范围，低检出限，良好的稳定性与重现性，并可用于蔬菜有机磷农药甲胺磷残留的实样检测。【专利说明】一种电化学生物传感器及其应用
本专利技术属于生物电化学传感器
，具体地涉及一种电化学生物传感器及其 应用。
技术介绍
中国农业仪器网曾经报道陕西省对蔬菜中有机磷农药的调查，发现甲胺磷排在检 出率与超标率前五位，这说明我国蔬菜农药残留问题依然很严重。利用高效液相色谱/质 谱联用（HPLC-MS)或者气相色谱/质谱联用（GC-MS)检测的缺点在于：分析时间长、仪器 设备昂贵、需要专业技术人员操作、不适合现场操作。电化学检测快速、灵敏、简便，因此利 用甲胺磷抑制乙酰胆碱酯酶对底物乙酰胆碱的催化活性而构建的电化学生物传感器得到 普遍石开究。Liu 等（Xiao T, Ju HX, Chen HY. Direct electrochemistry of horseradish peroxidase immobilized on a colloid/cysteamine-modified gold electrode. Anal. Biochem,2000,278(1) :22-28 Liu SQ, Ju HX. Reagentless glucose biosensor based on direct electron transfer of glucose oxidase immobilized on colloidal gold modified carbon paste electrode. Biosens· Bioelectron·，2003,19 (3) : 177-183)，分析了纳米金提高传感器性能 的原因，认为体系中纳米金可以提高酶的生物活性，增强酶与底物分子之间的作用。纳米金 固定酶时具有表面反应活性高、吸附能力强、比表面积大、催化效率高、表面活性中心多等 特点，已经成为固定化载体的重要研究对象。但现有的传感器检测范围较窄，稳定性和重现 性差，不适宜用于蔬菜有机磷农药甲胺磷残留的实样检测。
技术实现思路
专利技术目的：为解决现有技术中存在的问题，本专利技术提供一种电化学生物传感器，通 过在ΙΤ0电极表面修饰金纳米薄膜并进一步依次吸附乙酰胆碱酯酶和壳聚糖，从而使得到 的复合电极能够用于检测有机磷农药甲胺磷残留，具有检测范围宽，稳定性和重现性好的。 技术方案：为实现上述技术目的，本专利技术提出一种电化学生物传感器，该传感器通 过如下步骤制备得到： (1)用液液界面法在有机相和水相界面间合成单分散金纳米薄膜； (2)清洗ΙΤ0电极并烘干，然后浸入到步骤（1)中的水相中通过提拉将单分散金纳 米薄膜覆盖在所述ΙΤ0电极上，得到单分散金纳米薄膜修饰的ΙΤ0,即Au/ITO电极； (3)将步骤（2)得到的Au/ITO电极浸泡在乙酰胆碱酯酶溶液中，使乙酰胆碱酯酶 吸附到单分散金纳米薄膜表面上，洗涤，得到AChE/Au/ΙΤΟ传感器。 为了减低金纳米薄膜与ΙΤ0电极剥离的可能性，在得到的AChE/Au/ITO传感器表 面进一步滴涂壳聚糖溶液，得到Chi/AChE/Au/ΙΤΟ传感器。 其中，步骤（1)中，液液界面法合成单分散金纳米薄膜的步骤为：首先将？?4与 HAuC14反应形成Au (PPh3) C1，然后将其转移到甲苯中形成有机相溶液；其次，将CTAB和 NaOH溶解到H20中形成水相溶液，并将N2H4 · H20加入到水相中作为还原剂；然后将上述有 机相溶液缓缓加入到水相溶液中，当界面出现紫色时表明反应开始进行，反应在50?60°C 恒温条件下进行10?12h，随着反应进行，界面的颜色逐渐加深，最后在界面上形成单分散 金纳米薄膜。 步骤（3)中，乙酰胆碱酯酶溶液的浓度为0· 020?0· 040g/L，浸泡条件为在0? 8°C下浸泡6?12h。 优选地，步骤（3)中，所述的AChE/Au/ITO传感器用0· Imol/LpH = 7. 0的PBS缓 冲液进行洗涤。 在壳聚糖修饰的过程中，优选地，所述的壳聚糖溶液的浓度为0. 1?0. 5wt%，滴 加的量为每mm2 ΙΤ0电极滴加0. 25?0. 3 μ 1。 优选地，上述传感器中，所述的ΙΤ0电极的大小为3mmX6mm。该尺寸的大小取决于 制备金膜的菌种瓶大小有关，也和发生电化学反应的电解槽大小有关。可以根据实际需要 对尺寸进行选择。 本专利技术进一步提出了上述的电化学生物传感器在检测有机磷农药中甲胺磷的应 用。 有益效果：本专利技术得到的AChE/Au/ITO传感器在检测有机磷农药甲胺磷时，具有 较宽的检测范围，低检出限，良好的稳定性与重现性，并可用于蔬菜有机磷农药甲胺磷残留 的实样检测。本传感器可以快速检测有机磷农药残留，避免食用残留超标农产品而引起的 中毒事件，为农产品安全生产提供技术保障。 【专利附图】【附图说明】 图1为界面法合成金纳米粒子（AuNPs)和单分散Au-AChE纳米复合膜的FESEM图， 其中，（a)AuNPs (低倍）；(b)AuNPs (高倍）；（c)单分散Au-AChE纳米复合膜； 图2为电极在不同溶液中的循环伏安曲线图，其中，（a)为Au/ITO电极在8mmol/ LATC1中的循环伏安曲线；(b)为Au/IT0电极0. lmol/LPBS (pH 7. 0)中的循环伏安曲线； (c)为AChE/Au/ITO在8mmol/LATCl中的循环伏安曲线； 图3为AChE/Au/ITO分别在（a) 0和（b) 10 μ g/mL甲胺磷标准溶液中的循环伏安 曲线； 图4为AChE/Au/ITO对不同浓度甲胺磷的CV响应（从a至1分别为0. 005、0. 02、 0· 05、0· 2、0· 5、1· 5、5、5、10、25、50、100μ gmL-1，其中交点处即为 5μ gmL-1 浓度对应的值）； 图5为AChE/Au/ITO对甲胺磷检测的线性关系。 【具体实施方式】 以下通过具体的实施例详细说明本专利技术但不用于限制本专利技术。 本专利技术的电化学生物传感器的制备方法及应用步骤如下： (1)构建电化学生物传感器： A)利用液液界面法在有机相-水相界面间合成单分散金纳米薄膜： 首先将 1. 9mg PPh3 加入到 25μ L 0· 24mol/L HAuC14 中反应形成 Au(PPh3)Cl，然后 将其转移到5. OmL甲苯中形成有机相溶液；其次，将0. 8mg CTAB (十六烷基三甲基溴化铵） 和2mg NaOH溶解到8mL H20中形成水相溶液，并将25 μ LN2H4 · H20加入到水相中作为还原 齐U;然后将有机相缓缓加入到水相中。当界面出现紫色时表明反应开始进行。反应在60°C 恒温条件下进行12h，随着反应进行，界面的颜色逐渐加深，最后在界面上形成了单分散薄 膜。 Β) 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种电化学生物传感器，其特征在于，其通过如下步骤制备得到：(1)用液液界面法在有机相和水相界面间合成单分散金纳米薄膜；(2)清洗ITO电极并烘干，然后浸入到步骤(1)中的水相中通过提拉将单分散金纳米薄膜覆盖在所述ITO电极上，得到单分散金纳米薄膜修饰的ITO，即Au/ITO电极；(3)将步骤(2)得到的Au/ITO电极浸泡在乙酰胆碱酯酶溶液中，使乙酰胆碱酯酶吸附到单分散金纳米薄膜表面上，洗涤，得到AChE/Au/ITO传感器。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：苗向阳，郁惠珍，戴志晖，
申请(专利权)人：苏州健雄职业技术学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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