一种检测瘦肉精的检测试剂制造技术

本发明专利技术的目的在于提供一种检测瘦肉精的检测试剂，能够单独或同时检测盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克巴多胺。本发明专利技术的检测试剂包含有包被在载体上的，用于检测盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克巴多胺中的任一种或几种的特异性抗体和抗原；用于显色反应的试剂，所述的显色反应的试剂为染色的且用上述的特异性抗体致敏的金黄色葡萄球菌。本发明专利技术所制备的试剂特异性强，降低了假阳性出现的几率；制备成本低廉，操作极为简便，缩短了工时；易于推广，适于普查；与协同凝集试验所用试剂相比，更适于抗原或抗体的检测，速度快，灵敏度高，可以检测到0.1ppb的盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺，其结果易于观察，且可以长期保存。

【技术实现步骤摘要】
-种检测瘦肉精的检测试剂
本专利技术属于目-受体激动剂检测领域，具体涉及一种检测瘦肉精的检测试剂。
技术介绍
瘦肉精是一类动物用药的统称，有数种药物被称为瘦肉精，例如盐酸克伦特罗、沙 下胺醇和莱克多己胺，上述H种药物是一类选择性目2-肾上腺素受体激动剂，具有调节动 物神经兴奋及其体内营养素重分配的功能，可W提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生 长。瘦肉精化学性质稳定，加热至172C时才分解，一般方法不能将其破坏，肠道吸收快，作 用时间持久，药理作用强。动物食用了瘦肉精后，初期会采食下降、行为动作失调、神经紧张 不安甚至全身震颤、呼吸加剧、体温上升，长期食用直接损伤肉畜的机体。人食用了饲喂含 目-受体激动剂作为饲料添加剂的产品后，就会出现中毒症状，通常会出现肌肉震颤、也棒、 精神紧张、头疼、肌肉疼痛、胺晕、恶也、呕吐、发烧、战栗等症状，甚至死亡，给患者的精神、 健康及正常生活造成了严重危害。因此，世界上许多国家禁止在饲料中使用瘦肉精来提高 动物的瘦肉率，我国也于1997年发文禁止瘦肉精在饲料和畜牧生产中使用，商务部自2009 年12月9日起，禁止进出口莱克多己胺和盐酸莱克多己胺。2001年12月27日、2002年2 月9日、4月9日，农业部分别下发文件禁止食品动物禁止使用目激动剂类药物作为饲料添 加剂（农业部176号、193号公告、1519号条例），并且通过相关政策手段对相关领域进行监 督管理，而且，对于畜禽产品要进行瘦肉精含量的检测。 目前对盐酸克伦特罗、沙下胺醇及莱克多己胺等瘦肉精的检测方法主要有沉淀反 应、凝集反应、补体参与抗原抗体反应、中和反应、标记免疫反应等，与之相对应有酶免疫检 测试剂盒，也有单独检测盐酸克伦特罗、沙下胺醇及莱克多己胺的检测试纸条和同时检测 W上H种瘦肉精的胶体金法，但该些检测方法主要依懒化学仪器分析，要么要求有复杂的 仪器设备和繁琐的操作过程，不适合现场监控和大量样本的筛查，要么就是检测时间较长、 对操作人员专业要求高，或是检测成本高、假阳性现象比较多，或是灵敏度不够高。由此衍 生的检测试剂也同样存在制备成本高、不适于推广应用、结果判断不直观等特点，所W，目 前急需一种操作简便、经济、准确、灵敏、适合临床推广的检测方法和试剂来检测抗原和抗 体。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测瘦肉精的检测试剂，能够单独或同时检测抗盐酸 克伦特罗抗体、抗沙下胺醇抗体和抗莱克己多胺抗体。本专利技术制备的试剂具有特异性强、敏 感性高、操作简便的优点，从而弥补现有技术的不足。 本专利技术的检测试剂包含有包被在载体上的，用于检测盐酸克伦特罗、沙下胺醇和 莱克己多胺中的任一种或几种的特异性抗体；用于显色反应的试剂，所述的显色反应的试 剂为染色的且用上述的特异性抗体致敏的金黄色葡萄球菌。 作为实施例的优选，所述的特异性抗体为盐酸克伦特罗、沙下胺醇或莱克多己胺 免疫家兔后制备的效价达到1:800或W上的兔子血清； 作为实施例的优选，上述的载体为NC膜或化ISA板。 作为实施例的一种优选，所述的金黄色葡萄球菌用石碳酸复红染料进行了染色； 所述金黄色葡萄球菌的致敏是将染色后的金黄色葡萄球菌用抗盐酸克伦特罗、沙 下胺醇或莱克多己胺抗体中的任一种或几种致敏的。 上述的试剂，还包含有用作阳性对照的阳性血清和/或作为阴性对照的阴性血 清； 作为实施例的优选，所述的阳性血清，是将盐酸克伦特罗、沙下胺醇和莱克多己胺 免疫家兔后制备的效价达到1:800或W上的兔子血清； 所述的瘦肉精阴性血清，是抗盐酸克伦特罗、抗沙下胺醇和抗莱克多己胺抗体的 效价低于1:1的动物血清。 上述的测试剂还包含有包被在载体上的、用于检测抗盐酸克伦特罗抗体、抗沙下 胺醇抗体和抗莱克己多胺抗体中的任一种或几种的瘦肉精抗原； 本专利技术所制备的试剂特异性强，降低了假阳性出现的几率；制备成本低廉，操作极 为简便，缩短了工时；易于推广，适于普查；与协同凝集试验所用试剂相比，更适于抗原或 抗体的检测，速度快，灵敏度高，可W检测到0. Ippb的盐酸克伦特罗、沙下胺醇和莱克多己 胺，其结果易于观察，且可W长期保存，该对于快速判断被检样本中是否含有特异性抗原或 抗体具有重要诊断价值。 【附图说明】 [001引图1 ;本专利技术检测抗原原理图 图2 ;本专利技术检测抗体原理图 图3 ;本专利技术线性包被示意图，其中T1、T2及……表示包被的特异性抗体（或 抗原）PC表示阳性对照，NC表示阴性对照。图中特异性抗体（或抗原）的包被是线性包被。 图4 ;本专利技术点状包被示意图，其中T1、T2及……表示包被的特异性抗体（或 抗原）PC表示阳性对照，NC表示阴性对照。图中特异性抗体（或抗原）的包被是点状包被。 【具体实施方式】 金黄色葡萄球菌A蛋白（Staphylococal Protein A，SPA)是存在于细菌细胞壁的 一种表面蛋白。SPA是一种单链多肤，与胞壁肤聚糖呈共价结合。目前，SPA应用最多的是 用于协同凝集试验，但协同凝集试验在检测抗原或抗体存在诸多的不足，如没有固定的结 合点，结果不易于观察且不能长期保存，适于检测的抗原大多为颗粒性抗原，检测可溶性抗 原时易产生假阳性，所W，也不能作为抗原或抗体检测的最为理想的方法，因此，该方法所 用试剂也不是最理想的试剂。但 申请人:发现将SPA与抗体结合作为显色试剂，能够明显提 高检测灵敏度，从而促成了本专利技术。 本专利技术分别用盐酸克伦特罗、沙下胺醇和莱克多己胺单独或同时免疫健康家兔， 从而获得抗盐酸克伦特罗抗体、抗沙下胺醇抗体、抗莱克多己胺抗体、抗瘦肉精阳性血清； 采集健康家兔血清测定效价制备阴性血清；用染料对SPA菌液进行染色获得染色的SPA菌 液，由抗盐酸克伦特罗抗体、抗沙下胺醇抗体和抗莱克多己胺抗体致敏的染色的SPA菌液。 本专利技术中所用的组分的制备方法如下： 1)制备抗盐酸克伦特罗抗体、抗沙下胺醇抗体和抗莱克多己胺抗体、抗瘦肉精阳 性血清和阴性血清，备用； 所述抗盐酸克伦特罗抗体的制备步骤为；将盐酸克伦特罗与弗氏完全佐剂按照 10:1?15:1的比例混合，置37C摇床振摇3天，之后放室温或4C静止1天后W皮下注射 和静脉注射的方式免疫健康家兔，共免疫4次，每次间隔7?10天，第4次免疫5天后耳静 脉采血测定抗体效价，效价达到1:800 W上时，即可自也脏放血，收集血清，即制得抗盐酸 克伦特罗抗体。 所述抗沙下胺醇抗体的制备步骤为：将沙下胺醇与佐剂按照10:1?15:1的比例 混合，置37C摇床振摇3天，之后放室温或4C静止1天后W皮下注射和静脉注射的方式免 疫健康家兔，共免疫4次，每次间隔7?10天，第4次免疫5天后耳静脉采血测定抗体效价， 效价达到1:800 W上时，即可自也脏放血，收集血清，即制得抗沙下胺醇抗体。 [00巧]所述抗莱克多己胺抗体的制备步骤为；将莱克多己胺与佐剂按照10:1?15:1的 比例混合，置37C摇床振摇3天，之后放室温或4C静止1天后W皮下注射和静脉注射的方 式免疫健康家兔，共免疫4次，每次间隔7?10天，第4次免疫5天后耳静脉采血测定抗体 效价，效价达到1:800 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测瘦肉精的试剂，其特征在于，所述的试剂包含有包被在载体上的、用于检测盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克巴多胺中的任一种或几种的特异性抗体；用于显色反应的试剂，所述的显色反应的试剂为染色的且用上述的特异性抗体致敏的金黄色葡萄球菌。

【技术特征摘要】
1. 一种检测瘦肉精的试剂，其特征在于，所述的试剂包含有包被在载体上的、用于检测 盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克巴多胺中的任一种或几种的特异性抗体；用于显色反应的 试剂，所述的显色反应的试剂为染色的且用上述的特异性抗体致敏的金黄色葡萄球菌。2. 如权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述的特异性抗体的效价为1:800或以上。3. 如权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述载体为NC膜或ELISA板。4. 如权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述的金黄色葡萄球菌用石碳酸复红染料 进行的染色。5. 如权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述的金黄色葡萄球菌的致敏是将染色后 的金黄色葡萄球菌用抗盐酸克伦特罗、...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏冬梅，张述智，李春雨，朱绍辉，王友娟，
申请(专利权)人：青岛中仁生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37