一种胡黄连悬浮细胞的快速繁殖方法技术

本发明专利技术研究了一种胡黄连悬浮细胞培养的快速繁殖方法，包括愈伤组织的诱导、愈伤组织增殖、悬浮细胞的培养、细胞悬浮体系的优化等步骤。本发明专利技术方法所制备的胡黄连悬浮细胞产量达，能耗少，生长周期短，次生代谢物产量高，不受时间和空间的限制，有利于建立胡黄连悬浮细胞的大规模工厂化生产。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术研究了一种胡黄连悬浮细胞培养的快速繁殖方法，包括愈伤组织的诱导、愈伤组织增殖、悬浮细胞的培养、细胞悬浮体系的优化等步骤。本专利技术方法所制备的胡黄连悬浮细胞产量达，能耗少，生长周期短，次生代谢物产量高，不受时间和空间的限制，有利于建立胡黄连悬浮细胞的大规模工厂化生产。【专利说明】
本专利技术涉及组培条件下胡黄连悬浮细胞的培养，属于生物
。
技术介绍
胡黄连，Picrorhizascrophularii flora Pennell.，玄参科，又名割孤露泽、胡连、多年生草本，有毛，生于海拔3600-4400m的高寒地区的岩石上及石堆中、浅土层的向阳处或生于高山草地，产于印度、印度尼西亚，国内主产于西藏，主治:阴虚骨蒸；潮热盗汗；小儿疳疾；湿热泻痢；黄疸；吐血；衄血；目赤肿痛；痈肿疮疡；痔疮肿毒，生物学特性喜凉爽湿润、土质肥沃，适合在高海拔地段栽培。目前主要的栽培技术为种子繁殖，选成熟的种子，在秋末播种，事前做苗床，床面高出地面20cm，随当地的地形做成长方形，四周设排水汉，播种后覆土，盖草保湿防寒，翌年春天出苗。利用细胞培养技术可以获得大量的胡黄连悬浮细胞，且不受季节、地域的限制。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供胡黄连悬浮细胞培养的快速繁殖方法，工艺流程简单，不受地域，季节等自然环境因素影响等优点，有利于建立胡黄连悬浮细胞的大规模工厂化生产。 为解决上述技术问题，本专利技术采用下列技术方案:选用胡黄连幼嫩的叶片，用去污皂刷洗8分钟，自来水冲洗20分钟，在超净工作台上用3 %的次氯酸钠消毒9分钟，无菌水冲洗5次，接种在B5+6-BA2.5mg/L+IBA0.5mg/L+2, 4-D3.0mg/L+DTTlOmmol/L培养基上进行愈伤组织诱导培养，条件为光照强度ΙΟΟΟΙχ，光照7h/d，温度22 °C，湿度40%，将诱导出来的愈伤组织接入培养基B5+6-BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2, 4_D3.0mg/L培养基中进行愈伤组织增殖培养，增殖培养培养40天后接入B5+6-BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2, 4-D3.0mg/L+CuCl25_15Mmol/L+ 水解酪蛋白 80_100mg/L 的液体培养基中进行悬浮细胞培养，培养条件为光照强度30001x，光照15h/d，温度25°C，湿度60%，15天继代一次，洗涤，60°C烘干至恒重称量，得干重。 采用本专利技术制备的胡黄连悬浮细胞，产量大，能耗少，生长周期短，次生代谢物产量高。 下面将结合【具体实施方式】对本专利技术作进一步阐述，但本专利技术要求保护的范围并不局限于下列实施方式。 【具体实施方式】 实施例1选用胡黄连幼嫩的叶片，用去污皂刷洗8分钟，自来水冲洗20分钟，在超净工作台上用3 %的次氯酸钠消毒9分钟，无菌水冲洗5次，接种在B5+6-BA2.5mg/L+IBA0.5mg/L+2, 4-D3.0mg/L+DTTlOmmol/L培养基上进行愈伤组织诱导培养，条件为光照强度ΙΟΟΟΙχ，光照7h/d，温度22 °C，湿度40%，将诱导出来的愈伤组织接入培养基B5+6-BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2, 4_D3.0mg/L培养基中进行愈伤组织增殖培养，增殖培养培养40天后接入B5+6-BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2, 4-D3.0mg/L+CuCl25Mmol/L+ 水解酪蛋白 80mg/L 的液体培养基中进行悬浮细胞培养，培养条件为光照强度30001x，光照15h/d，温度25°C，湿度60%，15天继代一次，洗涤，60°C烘干至恒重称量，得干重，悬浮细胞增长率69%。 实施例2选用胡黄连幼嫩的叶片，用去污皂刷洗8分钟，自来水冲洗20分钟，在超净工作台上用3 %的次氯酸钠消毒9分钟，无菌水冲洗5次，接种在B5+6-BA2.5mg/L+IBA0.5mg/L+2, 4-D3.0mg/L+DTTlOmmol/L培养基上进行愈伤组织诱导培养，条件为光照强度ΙΟΟΟΙχ，光照7h/d，温度22 °C，湿度40%，将诱导出来的愈伤组织接入培养基B5+6-BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2, 4_D3.0mg/L培养基中进行愈伤组织增殖培养，增殖培养培养40天后接入B5+6-BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2, 4-D3.0mg/L+CuCl210Mmol/L+ 水解酪蛋白 90mg/L 的液体培养基中进行悬浮细胞培养，培养条件为光照强度30001x，光照15h/d，温度25°C，湿度60%，15天继代一次，洗涤，60°C烘干至恒重称量，得干重，悬浮细胞增长率63%。 实施例3选用胡黄连幼嫩的叶片，用去污皂刷洗8分钟，自来水冲洗20分钟，在超净工作台上用3 %的次氯酸钠消毒9分钟，无菌水冲洗5次，接种在B5+6-BA2.5mg/L+IBA0.5mg/L+2, 4-D3.0mg/L+DTTlOmmol/L培养基上进行愈伤组织诱导培养，条件为光照强度ΙΟΟΟΙχ，光照7h/d，温度22 °C，湿度40%，将诱导出来的愈伤组织接入培养基B5+6-BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2, 4_D3.0mg/L培养基中进行愈伤组织增殖培养，增殖培养培养40天后接入 B5+6-BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2, 4-D3.0mg/L+CuCl215Mmol/L+ 水解酪蛋白 100mg/L 的液体培养基中进行悬浮细胞培养，培养条件为光照强度30001x，光照15h/d，温度25°C，湿度60%, 15天继代一次，洗涤，60°C烘干至恒重称量，得干重，悬浮细胞增长率65%。【权利要求】1.，其特征是:胡黄连的叶片经消毒处理，接种在 B5+6-BA2.5mg/L+IBA0.5mg/L+2, 4-D3.0mg/L+DTT10mmol/L 培养基上进行愈伤组织诱导培养，将诱导出来的愈伤组织接入培养基B5+6-BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2, 4_D3.0mg/L培养基中进行愈伤组织增殖培养，增殖培养培养40天后接入B5+6-BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2, 4-D3.0mg/L+CuCl25-15Mmol/L+水解酪蛋白80_100mg/L的液体培养基中进行悬浮细胞培养，15天继代一次，洗涤，60°C烘干至恒重称量，得干重。2.根据权利要求1所述的，其特征是:所述的消毒处理为:选用胡黄连幼嫩的叶片，用去污皂刷洗8分钟，自来水冲洗20分钟，在超净工作台上用3%的次氯酸钠消毒9分钟,无菌水冲洗5次。3.根据权利要求1所述的，其特征是:诱导愈伤组织的培养基中附加了 DTT，可以防止愈伤组织的褐化。4.根据权利要求1所述的，其特征是:诱导愈伤组织的条件为光照强度ΙΟΟΟΙχ，光照7h/d，温度22°C，湿度40%。5.根据权利要求1所述的，其特征是:胡黄连悬浮细胞培养中添加了 CuCl2，水解酪蛋白，可以促进悬浮细胞的生长和次生代谢物含量的增加。6.根据权利要求1所述的，其特征是:愈伤组织的增殖和悬浮细胞的培养条件为光照强度30001x，光照15h/d，温度25°C，湿度60%。【文档编号】本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胡黄连悬浮细胞的快速繁殖方法，其特征是：胡黄连的叶片经消毒处理，接种在B5+6‑BA2.5mg/L+IBA0.5mg/L+2,4‑D3.0mg/L+DTT10mmol/L培养基上进行愈伤组织诱导培养，将诱导出来的愈伤组织接入培养基B5+6‑BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2,4‑D3.0mg/L培养基中进行愈伤组织增殖培养，增殖培养培养40天后接入B5+6‑BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2,4‑D3.0mg/L+CuCl25‑15µmol/L+水解酪蛋白80‑100mg/L的液体培养基中进行悬浮细胞培养，15天继代一次，洗涤，60℃烘干至恒重称量，得干重。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨存，
申请(专利权)人：南京通泽农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32