一种基于低场NMR检测磁珠浓度的方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种基于低场NMR检测磁珠浓度的方法及应用，包含以下步骤：(1)制备系列浓度的磁珠悬浮液，以测得的核磁共振弛豫时间T为纵坐标，以磁珠悬浮液浓度为横坐标，绘制磁珠浓度-弛豫时间曲线，得出磁珠浓度变化敏感区域；(2)制备敏感区域内系列浓度的磁珠悬浮液标准样本，以测得的弛豫时间Tsample为纵坐标，以磁珠悬浮液标准样本的浓度为横坐标，绘制敏感区域内磁珠浓度-弛豫时间标准曲线；(3)制备磁珠悬浮液待测样本，稀释至浓度变化敏感区域，测得的弛豫时间Ttest，从敏感区域内磁珠浓度-弛豫时间标准曲线中得出磁珠悬浮液待测样本的浓度。本发明专利技术能快速检测磁珠浓度，为实验人员提供有效准确的质控信息，对磁珠的有效利用、分选及效率评估有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种基于低场NMR检测磁珠浓度的方法及应用，包含以下步骤：(1)制备系列浓度的磁珠悬浮液，以测得的核磁共振弛豫时间T为纵坐标，以磁珠悬浮液浓度为横坐标，绘制磁珠浓度-弛豫时间曲线，得出磁珠浓度变化敏感区域；(2)制备敏感区域内系列浓度的磁珠悬浮液标准样本，以测得的弛豫时间Tsample为纵坐标，以磁珠悬浮液标准样本的浓度为横坐标，绘制敏感区域内磁珠浓度-弛豫时间标准曲线；(3)制备磁珠悬浮液待测样本，稀释至浓度变化敏感区域，测得的弛豫时间Ttest，从敏感区域内磁珠浓度-弛豫时间标准曲线中得出磁珠悬浮液待测样本的浓度。本专利技术能快速检测磁珠浓度，为实验人员提供有效准确的质控信息，对磁珠的有效利用、分选及效率评估有重要意义。【专利说明】-种基于低场NMR检测磁珠浓度的方法及其应用
本专利技术涉及分子生物学技术，特别涉及一种利用低场核磁共振检测磁珠浓度的方 法及其应用。
技术介绍
通过对磁珠进彳丁一定的包被（如娃基、氣基、竣基等）可以实现对核酸的商通量、 自动化提取，这一产生于20世纪80年代的技术随着基因检测、个性化给药、产前诊断等的 普及，已然形成了成熟的产业。传统DNA提取方法费时费力且纯度不高，相比之下磁珠法 DNA提取的优势则愈来愈明显。此外，免疫磁珠（ImpetiCbeacUMB简称磁珠）将固化试剂 特有的优点与免疫学反应的高度特异性结合于一体，以免疫学为基础，渗透到病理、生理、 药理、微生物、生化以及分子遗传学等各个领域，其在免疫检测、细胞分离、生物大分子纯化 和分子生物学等方面得到了越来越广泛的应用。 随着磁珠应用的普及，市场上出现了越来越多类型的磁珠。但是市场上公司鱼龙 混杂，产品质量参差不齐，甚至一些厂家为了谋求利润而随意稀释磁珠，对实验人员的选购 和工作造成了很大的困难。 磁珠使用的过程中，浓度作为表征磁珠质量的重要参数之一，目前还没有一个合 适的方法对其进行质控，也没有用于检测磁珠浓度方法的文献和信息，全部由磁珠生产厂 家提供。也就是说消费者无从得知厂家提供信息的准确度，也不能根据工作需要自行进行 后期调整。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种利用低场核磁共振快速检测磁珠浓度的方法，为实验 人员提供有效准确的质控信息。 本专利技术的另一目的在于提供所述的方法在定性、定量检测微量生物大分子或细胞 中的应用。 为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种基于低场NMR检测磁珠浓度的方法，包 含以下步骤： (1)磁珠浓度变化敏感区域检测 取已知量磁珠，洗涤后，以灭菌去离子水进行不同浓度梯度稀释，获得系列浓度的 磁珠悬浮液； 以低场核磁共振分析仪对上述系列浓度的磁珠悬浮液分别进行弛豫时间测定， 得弛豫时间值T ;以所述弛豫时间T为纵坐标，以磁珠悬浮液浓度为横坐标，绘制磁珠浓 度-弛豫时间曲线图，得出磁珠浓度变化敏感区域； (2)敏感区域内磁珠浓度-弛豫时间标准曲线绘制 取已知量磁珠，洗涤后，在上述得到的磁珠浓度变化敏感区域内，用灭菌去离子水 进行不同浓度梯度稀释，获得敏感区域内系列浓度的磁珠悬浮液标准样本； 以低场核磁共振分析仪对上述敏感区域内系列浓度的磁珠悬浮液标准样本分别 进行弛豫时间测定，得弛豫时间值T sampl^以所述弛豫时间Tsample为纵坐标，以磁珠悬浮液标 准样本的浓度为横坐标，绘制敏感区域内磁珠浓度-弛豫时间标准曲线； (3)待测样本弛豫时间检测与结果得出 取待测磁珠样本，洗涤后，重悬于缓冲液中，稀释后，获得敏感区域内系列浓度的 磁珠悬浮液待测样本。稀释方法如下：首先需要根据经验先将样品成倍稀释后先进行第一 次定量：若检测后磁珠浓度落在敏感区域，则定量完成；若检测后磁珠浓度落在敏感区域 外围，则需根据实际情况增大或减小稀释倍数再次定量。 以低场核磁共振分析仪对上述磁珠悬浮液待测样本进行弛豫时间测定，得弛豫时 间值Ttest ;根据上述测得的Ttest，从步骤⑵所绘制的敏感区域内磁珠浓度-弛豫时间标准 曲线中得出磁珠悬浮液待测样本的浓度。 有本专利技术的上述内容可知，本专利技术提供了一种客观、快速和高灵敏度检测出待测 磁珠样品浓度的方法： 首先，本专利技术首次利用核磁共振（NMR)方法定量检测未知样品磁珠浓度，可用于 磁珠质控检测等方面。对磁珠进行量化质控，可准确得知磁珠质量，防止实际操作过程中因 磁珠质量问题而导致的失败和损失；检测磁珠浓度，可帮助优化实验效果，有效评估磁珠捕 获效率；最后，对于价格较贵的免疫磁珠，对其进行浓度检测，可优化磁珠分选条件，最大化 利用磁珠，有效节约成本。 其次，本专利技术绘制了浓度-弛豫时间标准曲线。通过标准曲线的绘制，发现了磁珠 浓度检测的敏感区域，基于此方法可利用免疫磁珠的低浓度敏感性对微量的生物大分子或 细胞进行定性和定量检测。 优选地，本专利技术的基于低场NMR检测磁珠浓度的方法中，所述的磁珠是指可作为 核磁共振造影剂使用的一系列磁性微粒。 上述这些列举的磁珠种类包括但不限于微米或纳米级别的顺磁、超顺磁颗粒等， 可在低场NMR检测系统中形成均匀悬浊液而不沉降，保证了浓度的均一性。 优选地，本专利技术的基于低场NMR检测磁珠浓度的方法中，对所述磁珠洗涤的方法 为： a.将磁珠悬浮液短暂离心后，转移至干净的离心管，再次短暂离心后置于磁力架 上吸附磁珠； b.吸出并弃去上清； c.…向磁珠沉淀中…加入去离子水，震荡混匀后将离心管放在磁力架上以吸附磁 珠，吸附磁珠的时间优选为5-10min，然后吸出上清并弃去； d.重复进行一次步骤c ; e.加入缓冲液，得到洗涤后的磁珠，其中，加入缓冲液的体积与所述磁珠悬浮液的 体积比优选为1 :1?1 :3。 通过上述洗涤步骤，即得到适用于浓度测定体系的磁珠样品。 优选地，本专利技术的基于低场NMR检测磁珠浓度的方法中，进行核磁共振弛豫时间 测定时，控制低场核磁共振分析仪的磁场强度为20?25MHz，磁体温度为30?35 °C，重 复时间3?5s ;更优选地，控制低场核磁共振分析仪的磁场强度为20. 18MHz，磁体温度为 35°C，重复时间为5s。 通过上述对低场核磁共振体系的控制，可使检测更加准确，可控性更强，且利于平 行实验的比较和质控。 优选地，本专利技术的基于低场NMR检测磁珠浓度的方法中，绘制所述磁珠浓度-弛豫 时间曲线和所述敏感区域内磁珠浓度-弛豫时间标准曲线时，分别取两次以上测量弛豫时 间的平均值作为弛豫时间值，以使所绘制的曲线图更为准确，从而确保最终的试验结果精 确可靠。 本专利技术所公开的基于低场NMR检测磁珠浓度的方法，可用于对微量生物大分子或 细胞的定性和定量检测。 本专利技术提供一种客观的快速和高灵敏度检测磁珠浓度的方法，为实验提供质控环 节。其特征是依赖于低场核磁共振检测的磁珠浓度定量方法。该方法可以客观有效地对未 知浓度的磁珠样品进行检测和定量，填补了市场上检测方法的空白。该方法不仅快速、简 便，而且提供了样品质控的新途径，可以用于大规模样本的快速检测。 【专利附图】【附图说明】 图1是实施例1中的磁珠浓度-弛豫时间曲线图； 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于低场NMR检测磁珠浓度的方法，其特征在于，包含以下步骤：(1)磁珠浓度变化敏感区域检测取已知量磁珠，洗涤后，以灭菌去离子水进行不同浓度梯度稀释，获得系列浓度的磁珠悬浮液；以低场核磁共振分析仪对上述系列浓度的磁珠悬浮液分别进行弛豫时间测定，得弛豫时间值T；以所述弛豫时间T为纵坐标，以磁珠悬浮液浓度为横坐标，绘制磁珠浓度‑弛豫时间曲线，得出磁珠浓度变化敏感区域；(2)敏感区域内磁珠浓度‑弛豫时间标准曲线绘制取已知量磁珠，洗涤后，在上述得到的磁珠浓度变化敏感区域内，用灭菌去离子水进行不同浓度梯度稀释，获得敏感区域内系列浓度的磁珠悬浮液标准样本；以低场核磁共振分析仪对上述敏感区域内系列浓度的磁珠悬浮液标准样本分别进行弛豫时间测定，得弛豫时间值Tsample；以所述弛豫时间Tsample为纵坐标，以磁珠悬浮液标准样本的浓度为横坐标，绘制敏感区域内磁珠浓度‑弛豫时间标准曲线；(3)待测样本弛豫时间检测与结果得出取待测磁珠样本，洗涤后，重悬于缓冲液中，稀释后，获得敏感区域内系列浓度的磁珠悬浮液待测样本，稀释方法如下：首先需要根据经验先将样品成倍稀释后先进行第一次定量：若检测后磁珠浓度落在敏感区域，则定量完成；若检测后磁珠浓度落在敏感区域外围，则需根据实际情况增大或减小稀释倍数再次定量；以低场核磁共振分析仪对上述磁珠悬浮液待测样本进行弛豫时间测定，得弛豫时间值Ttest；根据上述测得的Ttest，从步骤(2)所绘制的敏感区域内磁珠浓度‑弛豫时间标准曲线中得出磁珠悬浮液待测样本的浓度。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张祥林，
申请(专利权)人：张祥林，
类型：发明
国别省市：上海;31