一种白及种子的包埋玻璃化超低温保存方法技术

本发明专利技术涉及一种白及种子的包埋玻璃化超低温保存方法。该方法包括如下步骤：采集完整果实，洗净后用乙醇擦拭表面，再用乙醇浸泡，无菌水冲洗，然后用0.1％升汞浸泡，冲洗后吸干，纵向剖开果荚，取出粉末状种子；将种子投入藻酸钠包埋液，搅拌均匀后将其滴入至钙离子包埋液中，置于室温下凝固成包埋珠；将包埋珠置于PVS2溶液中脱水处理20-160min；放入冷冻管中，并加入PVS2溶液，然后将冷冻管置于液氮中冷冻保存；当需要使用种子时，将冷冻管取出，解冻后除去PVS2溶液，并洗涤；将洗涤后的包埋珠接种到固体VW培养基上培养，使种子萌发，待幼苗长至6-10cm高时可驯化移栽。该方法得到的种子萌发率高，且可节约成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物种质资源的超低温保存方法，尤其涉及。
技术介绍
白及(Bletillastriata(Thunb.)Reichb.f.)又名连及草、箬兰、甘根、白根、百笠、白芨、紫蕙，为兰科白及属多年生宿根草本植物，分布于亚洲的緬甸北部经中国至日本和朝鲜半岛一带。白及具有紫色的花序和浓密的叶片，可盆栽观赏或作为地被植物栽培，也可生产鲜切花，具有很好的观赏价值。白及的块茎为常用中药，具有收敛止血、消肿生肌和促进创面愈合的功能,在治疗咳血吐血、外伤出血、疮疡肿毒、肺结核吐血、溃疡病出血、烧烫伤和皮肤皲裂等方面的疗效显著。近些年，白及的临床应用范围不断拓宽，对治疗食管炎、咳嗽、体表肿瘤、血管瘤、气胸、白带多、鼻窦炎、慢性中耳炎和带状疱疹等方面均有新的突破。此外，白及块茎中含量较高的白及胶可用作高级卷烟烟条粘合剂、裱字画粘合剂、胃镜检查的保护剂和美容面膜等。然而，由于生境的严重破坏及人为的过度采挖，目前白及野生资源数量锐减，不仅无法满足市场需求，其物种生存也受到威胁。种质保存不仅是经济植物生产种植和育种过程中的重要环节，同时也是对珍稀濒危植物进行保育的基础。建立合适的种质保存方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种白及种子的包埋玻璃化超低温保存方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1、种子的采集与灭菌：采集成熟未开裂的完整果实，将果实先洗净，再用75％乙醇擦拭表面，接着用75％乙醇浸泡30s，无菌水冲洗2‑3次，然后用0.1％升汞浸泡20min，无菌水冲洗4‑5次，将果实表面的水分吸干，纵向剖开果荚，取出粉末状种子；S2、包埋：将粉末状种子投入藻酸钠包埋液，搅拌均匀，将含有种子的藻酸钠包埋液滴入至钙离子包埋液中，置于室温下使其充分凝固成包埋珠；S3、脱水：将上述制得的包埋珠置于PVS2溶液中脱水处理20‑160min；S4、冷冻保存：将脱水后的包埋珠放入冷冻管中，并加入PVS2溶液，然后将含有种...

【技术特征摘要】
1.一种白及种子的包埋玻璃化超低温保存方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤: 51、种子的采集与灭菌:采集成熟未开裂的完整果实，将果实先洗净，再用75%乙醇擦拭表面，接着用75%乙醇浸泡30s，无菌水冲洗2-3次，然后用0.1%升汞浸泡20min，无菌水冲洗4-5次，将果实表面的水分吸干，纵向剖开果荚，取出粉末状种子； 52、包埋:将粉末状种子投入藻酸钠包埋液，搅拌均匀，将含有种子的藻酸钠包埋液滴入至钙离子包埋液中，置于室温下使其充分凝固成包埋珠； 53、脱水:将上述制得的包埋珠置于PVS2溶液中脱水处理20-160min； 54、冷冻保存:将脱水后的包埋珠放入冷冻管中，并加入PVS2溶液，然后将含有种子包埋珠的冷冻管置于液氮中冷冻保存； 55、解冻与洗涤:当需要使用种子时，将冷冻管从液氮中取出，迅速置于38°C的水浴中解冻2-4min，解冻完成后及时除去PVS2溶液，并用洗涤液洗涤3次，每次8_12min ； 56、种子的萌发:将洗涤后的包埋珠接种到固体VW培养基(0.7%琼脂粉)上培养，使种子萌发，待幼苗长至6-10cm闻时可驯化移栽。2.根据权利要求1所述白及种子的包埋玻璃化超低温保存方法，其特征在于，步骤S2中所述藻酸钠包埋液的配方为:VW+2%藻酸钠+2.0mol.L—1甘油+0.4mol.L-1蔗糖；所述钙离子包埋液的配方为 :0.1mol.L_1CaCl2+2.0mol.L—1甘油+0.4mol....

【专利技术属性】
技术研发人员：王彩霞，田敏，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所，
类型：发明
国别省市：浙江;33