用于延长电泳凝胶有用电泳寿命的电泳缓冲液制造技术

技术编号:10375482 阅读:170 留言:0更新日期:2014-08-28 17:57
提供一种用于延长包含三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)的电泳凝胶的有用电泳寿命的电解质溶液,所述电解质溶液包含至少一种两性离子和水。所述电解质溶液可在适于凝胶电泳的缓冲液系统(例如SDS-PAGE)中使用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于延长电泳凝胶有用电泳寿命的电泳缓冲液 相关申请的交叉引用本申请要求于2011年7月14日提交的美国临时专利申请61/507,883的优先权,其申请文件通过弓I用并入本文。
所公开的主题主要涉及凝胶电泳。更具体地,所公开的主题涉及用于在凝胶电泳期间延长电泳凝胶有用电泳寿命的包含至少一种两性离子和水的电解质溶液。
技术介绍
凝胶电泳是用于分离生物分子的一种常见方法,所述生物分子诸如脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)、多肽和蛋白质。在凝胶电泳中,所述分子根据所施加电场导致它们迁移通过过滤凝胶时的速率分离成条带。在该技术中使用的基本设备包括封装于玻璃管内的凝胶,其作为平板夹置于玻璃或塑料板之间,或者倒入塑料托盘内。凝胶具有开放的分子网络结构,其限定由导电缓冲溶液饱和的孔。通过凝胶的这些孔足够大以容许迁移大分子通过。凝胶放置于腔室中与缓冲液接触,上述缓冲液使得所述凝胶与电源的正极或负极之间进行电接触。将包含大分子和跟踪染料的样品放置于凝胶的顶部上。将电势施加到所述凝胶上,导致样品大分子和跟踪染料朝向凝胶的底部迁移。刚好在跟踪染料到达凝胶终端之前停止电泳。用于分离蛋白质的最常见的缓冲液系统是Laemmli缓冲液系统,其包含0.375M的三(羟甲基)氨基甲烷(Tris),在分离胶中用HCl滴定至pH8.8。积层凝胶包含0.125M的三(羟甲基)氨基甲烷(Tris),滴定至pH6.8。阳极和阴极运行缓冲液包含0.024M的三(羟甲基)氨基甲烷(Tris),0.192M的甘氨酸,0.1%的SDS。已公开了多种不同的凝胶分离材料,其具有不同的组成、PH值特性、电压要求等。在本领域中最近创新的目标是要提供一种电泳凝胶,其可用于执行更快的、更精确的、更稳定的、或从而更通用的电泳。已经提出许多不同的凝胶缓冲液系统,其适于在中性pH值下或附近使用,而不涉及使用Laemmli的Tris-HCl甘氨酸缓冲液系统。例如,授予Updyke等人的美国专利第6,096, 182公开了在中性pH下的电泳凝胶。制备这种凝胶的优点在于凝胶系统是稳定的,具有降低的反应性和延长的保质期。授予Hjerten等人的美国专利第5,464,517号公开了一种具有高缓冲能力和低导电性的电泳缓冲液。该类型缓冲液(特别是在毛细管电泳中)的优点在于其允许在更高的电压下从而更快速地进行分离。大多数创新都专注于通过提出适于凝胶缓冲液的新配方来改善电泳。目前,在预制电泳凝胶的生产和销售方面的主要障碍是它们的3个月左右的相当短的保质期。例如,对于预制的聚丙烯酰胺凝胶而言,据信它们的降解是在碱性条件下酰胺基团水解以便部分地形成阴离子羧酸衍生物的结果。因此,高PH值(例如pH值为8.0至9.5)被认为是降低了凝胶贮存时的稳定性。水解被认为是导致所分离分子的分离度损失、所分离分子迁移距离的降低、和蛋白质染色强度的降低。因此,对延长超过它们正常有效期(保质期)的凝胶有用电泳寿命的试剂存在需求。
技术实现思路
在第一实施例中公开了用于延长电泳凝胶有用电泳寿命的一种电解质溶液,其包含: -至少一种两性离子,其选自于2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇(AMPD),N- (1,1-二甲基-2-羟乙基)-3-氨基-2-羟基丙磺酸(AMPS0),N-甘氨酰甘氨酸(Gly-Gly),4- (2-羟乙基)哌嗪-1-丙磺酸(EPPS或HEPPS),3-(环己基氨基)_1_丙磺酸(CAPS),3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸(CAPSO),2-(环己基氨基)乙磺酸(CHES),N,N-双[2-羟乙基]-2 -氨基乙磺酸(BES),(2-[2-羟基-1,1-双(羟甲基)乙基氨基]乙磺酸)(TES),N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸(TAPS)和3-N-吗啉丙磺酸(POPSO);以及_水。该两性离子可以是4- (2-羟乙基)哌嗪-1-丙磺酸(EPPS或HEPPS)。该两性离子可以选自于N-甘氨酰甘氨酸(Gly-Gly)和3-(环己基氨基)_2_羟基-1-丙磺酸(CAPSO)。电解质溶液的pH值可为约8.0至约11。所述电解质溶液可进一步包含三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS )。所述电解质溶液可进一步包含十二烷基硫酸钠(SDS )。所述电解质溶液可进一步包含具有下述名称的螯合剂:乙二胺四乙酸(EDTA),乙二醇四乙酸(EGTA),次氮基三乙酸三钠盐,羟乙基乙二胺乙酸三钠(HEDTA三钠),二亚乙基三氨基五乙酸五钠或2-氨基丙二酰脲乙酸二钠。三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)的浓度可为约IOmM至约500mM。三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)的浓度可为约50mM至约150mM。三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)的浓度可为约50mM至约300mM。三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)的浓度可为150mM。两性离子的浓度可为约ImM至约500mM。两性离子的浓度可为约IOmM至约500mM。两性离子的浓度可为约25mM至约75mM。两性离子的浓度可为约50mM至约lOOmM。两性离子的浓度可为50mM。两性离子的浓度可为lOOmM。十二烷基硫酸钠(SDS)的浓度可为0.5 % (重量/体积)或更低。[0031 ] 十二烷基硫酸钠(SDS)的浓度可为0.1 % (重量/体积)或更低。十二烷基硫酸钠(SDS)的浓度可为0.1 % (重量/体积)。乙二胺四乙酸(EDTA)的浓度可为0.5% (重量/体积)或更低。乙二胺四乙酸(EDTA)的浓度可为0.05% (重量/体积)或更低。乙二胺四乙酸(EDTA)的浓度可为0.03% (重量/体积)。根据另一实施例,公开了用于在对至少一个样品进行电泳分离期间延长电泳凝胶有用电泳寿命的一种方法,所述方法包括以下步骤:-根据本专利技术将电压施加到电解质溶液中,与其中包含至少一个样品的电泳凝胶接触。根据另一实施例,公开了在对至少一个样品进行电泳分离期间延长电泳凝胶有用电泳寿命的一种方法,所述方法包括以下步骤:-将至少一种两性离子加入到电泳缓冲液中,所述至少一种两性离子选自于2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇(AMPD),N- (I, 1-二甲基_2_羟乙基)-3-氨基-2-羟基丙磺酸(AMPSO), N-甘氨酰甘氨酸(Gly-Gly),4- (2-羟乙基)哌嗪-1-丙磺酸(EPPS或HEPPS),3-(环己基氨基)-1_丙磺酸(CAPS),3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸(CAPS0),2-(环己基氨基)乙磺酸(CHES),N,N-双[2-羟乙基]-2 -氨基乙磺酸(BES),(2_[2_羟基-1,1-双(羟甲基)乙基氨基]乙磺酸)(TES),N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸(TAPS)和3-N-吗啉丙磺酸(POPSO)。该两性离子可以是4- (2-羟乙基)哌嗪-1-丙磺酸(EPPS或HEPPS)。该两性离子可选自于N-甘氨酰甘氨酸(Gly-Gly)和3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸(CAPSO)。本专利技术的方法可进一步包括将电压施加到电泳缓冲液中与其中包含至少一个样品的电泳凝胶接触的步骤。下面的术语定义如下。术语“改善分离度(resolution)”旨在意味着更好的分离度,其允许相对于具有更宽或更厚条带的其它分离装置,分离彼此相距本文档来自技高网
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【技术保护点】
用于延长电泳凝胶有用电泳寿命的一种电解质溶液,其包含:‑至少一种两性离子,其选自于2‑氨基‑2‑甲基‑1,3‑丙二醇(AMPD),N‑(1,1‑二甲基‑2‑羟乙基)‑3‑氨基‑2‑羟基丙磺酸(AMPSO),N‑甘氨酰甘氨酸(Gly‑Gly),4‑(2‑羟乙基)哌嗪‑1‑丙磺酸(EPPS或HEPPS),3‑(环己基氨基)‑1‑丙磺酸(CAPS),3‑(环己基氨基)‑2‑羟基‑1‑丙磺酸(CAPSO),2‑(环己基氨基)乙磺酸(CHES),N,N‑双[2‑羟乙基]‑2–氨基乙磺酸(BES),(2‑[2‑羟基‑1,1‑双(羟甲基)乙基氨基]乙磺酸)(TES),N‑三(羟甲基)甲基‑3‑氨基丙磺酸(TAPS)和3‑N‑吗啉丙磺酸(POPSO);以及‑水。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.07.14 US 61/507,8831.用于延长电泳凝胶有用电泳寿命的一种电解质溶液,其包含: -至少一种两性离子,其选自于2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇(AMPD),N- (1,1-二甲基-2-羟乙基)-3-氨基-2-羟基丙磺酸(AMPSO),N-甘氨酰甘氨酸(Gly-Gly),4- (2-羟乙基)哌嗪-1-丙磺酸(EPPS或HEPPS),3-(环己基氨基)_1_丙磺酸(CAPS),3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸(CAPSO),2-(环己基氨基)乙磺酸(CHES),N,N-双[2-羟乙基]_2 -氨基乙磺酸(BES),(2-[2_羟基-1,1-双(羟甲基)乙基氨基]乙磺酸)(TES),N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸(TAPS)和3-N-吗啉丙磺酸(POPSO);以及 _水。2.根据权利要求1所述的电解质溶液,其特征在于所述两性离子是4-(2-羟乙基)哌嗪-1-丙磺酸(EPPS或HEPPS)。3.根据权利要求1所述的电解质溶液,其特征在于所述两性离子选自N-甘氨酰甘氨酸(Gly-Gly)和3-(环己基氨基)_2_羟基-1-丙磺酸(CAPSO)。4.根据权利要求1至3任一项所述的电解质溶液,其特征在于电解质溶液的pH值为约8.0 至约 11.0。5.根据权利要求4所述的电解质溶液,其特征在于所述电解质溶液还包含三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)。6.根据权利要求1所述的电解质溶液,其特征在于所述电解质溶液还包含十二烷基硫酸钠(SDS)。7.根据权利要求1至6任一项所述的电解质溶液,其特征在于所述电解质溶液还包含具有下述名称的螯合剂:乙二胺四乙酸(EDTA),乙二醇四乙酸(EGTA),次氮基三乙酸三钠盐,羟乙基乙二胺乙酸三钠(HEDTA三钠),二亚乙基三氨基五乙酸五钠或2-氨基丙二酰脲乙酸二钠。8.根据权利要求5所述的电解质溶液,其特征在于三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)的浓度为约IOmM至约500mM。9.根据权利要求8所述的电解质溶液,其特征在于三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)的浓度为约50mM至约150mM。10.根据权利要求8所述的电解质溶液,其特征在于三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)的浓度为约50mM至约300mM。11.根据权利要求8所述的电解质溶液,其特征在于三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)的浓度为150mM。12.根据权利要求1至11任一项所述的电解质溶液,其特征在于两性离子的浓度为约ImM 至约 500mM。13.根据权利要求12所述的电解质溶液,其特征在于两性离子的浓度为约IOmM至约500mMo14.根据权利要求12所述的电解质溶液,其特征在于两性离子的浓度为约25mM至约7...

【专利技术属性】
技术研发人员:石磊
申请(专利权)人:德加尔电系统公司
类型:发明
国别省市:加拿大;CA

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