一种赖草属植物根尖染色体制片方法技术

本发明专利技术涉及一种赖草属植物根尖染色体制片方法，该方法包括以下步骤：⑴取材：赖草种子恒温萌发后5~7日，取生长旺盛的盆栽赖草的白色新根并将其放入离心管中；⑵装有根尖的离心管置于高压容器装置内，通N2O进行预处理，得预处理后的新根；⑶预处理后的新根吸干水分，用卡诺氏液固定，得固定后的新根；⑷固定后的新根漂洗、吸干后用冰乙酸解离，得解离后的新根；⑸将解离后的新根中的水分吸干后置于载玻片上，制作压片；⑹将压片置于光学显微镜下观察，选择染色体分散、清晰的细胞进行照相，以便进行荧光原位杂交，最后用玻璃刀做好盖玻片位置的标记，将做好的片子放入-80℃的冰箱保存即可。本发明专利技术高效、安全。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞遗传学领域中植物染色体中期分裂相标本的制备方法，尤其涉及。
技术介绍
染色体是细胞核中的遗传物质，不同物种的染色体都有相对稳定而又特定的形态结构。染色体制片是细胞遗传学研究的基本方法，是研究生物遗传变异、物种演化、分类、远缘杂交以及染色体结构、形态与功能之间关系所不可缺少的重要手段。植物染色体制片的基本流程包括取材、预处理、固定、解离、染色、制片及镜检等。染色体制片是以体细胞分裂中期染色体为研究对象，但分裂中期持续的时间很短，需要对材料进行合适的预处理，使染色体停留在分裂中期。预处理对染色体制片的质量至关重要，是染色体制片成败的关键步骤。传统的预处理方法主要有:低浓度的秋水仙素溶液法，饱和的对二氯苯水溶液法，低浓度的8-羟基喹啉溶液法，α-溴萘的饱和水溶液法，低温法等。秋水仙素、对二氯苯、8-羟基喹啉、α -溴萘等药物具有阻止或破坏纺锤体形成的作用，毒性大，易对实验人员造成伤害。而低温法，实验时间长，一次处理需要24至64小时，且效果不稳定。20世纪中叶，Gstergren发现笑气具有阻止微管形成的作用，可用于制备植物染色体中期分裂相标本。与传统方法相比，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种赖草属植物根尖染色体制片方法，包括以下步骤：⑴取材：赖草种子在25℃恒温条件下萌发后5~7日，取生长旺盛的盆栽赖草的白色新根1.5~2cm，并将其放入一个敞口的1.5mL的内壁附着水分的离心管中；⑵在25~27℃条件下，将所述步骤⑴中装有根尖的离心管置于高压容器装置内，通入0.4~0.8MPa N2O进行预处理，3~3.5h后即得预处理后的新根；⑶将所述预处理后的新根用滤纸吸干水分，采用卡诺氏液固定20~24h，得到固定后的新根；⑷将所述固定后的新根用蒸馏水漂洗3次，吸干水分后在体积浓度为45%的冰乙酸中解离2~10min，得到解离后的新根；⑸将所述解离后的新根中的水分吸干后置于载玻片上，...

【技术特征摘要】
1.一种赖草属植物根尖染色体制片方法，包括以下步骤: ⑴取材:赖草种子在25°c恒温条件下萌发后5~7日，取生长旺盛的盆栽赖草的白色新根1.5~2cm，并将其放入一个敞口的1.5mL的内壁附着水分的离心管中； ⑵在25~27°C条件下，将所述步骤⑴中装有根尖的离心管置于高压容器装置内，通入0.4^0.8MPa N2O进行预处理，3^3.5h后即得预处理后的新根； ⑶将所述预处理后的新根用滤纸吸干水分，采用卡诺氏液固定2(T24h，得到固定后的新根； ⑷将所述固定后的新根用蒸馏水漂洗3次，吸干水分后在体积浓度为45%的冰乙酸中解离2~lOmin，得到解离后的新根； (5)将所述解离后的新根中的水分吸干后置于载玻片上，用干净的刀片去掉根尖的最前端的根冠区0.5^1.5mm，取分生区0.5^1.5mm的长度...

【专利技术属性】
技术研发人员：李媛，蔡振媛，张毓，喻凤，林丽，刘瑞娟，
申请(专利权)人：中国科学院西北高原生物研究所，
类型：发明
国别省市：青海;63