一种蚕豆根尖细胞彗星实验样品制备方法和用于实施该方法的试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种蚕豆根尖细胞彗星实验样品制备方法，包括铺片步骤、细胞裂解步骤、解旋电泳步骤、中和步骤以及染色步骤，其中，所述铺片步骤包括：第一铺胶步骤：在一个载玻片上铺一个第一琼脂糖凝胶层；加缓冲液步骤：在所述第一琼脂糖凝胶层上加Ｈｏｎｄａ?ｂｕｆｆｅｒ缓冲液；点样步骤：将一个蚕豆根尖的切面反复多次进入所述Ｈｏｎｄａ?ｂｕｆｆｅｒ缓冲液液面；第二铺胶步骤：在所述Ｈｏｎｄａ?ｂｕｆｆｅｒ缓冲液上铺一层琼脂糖胶体液，盖上盖玻片，固化后形成一个细胞胶体混合凝胶层。本发明专利技术方法获得的可分析细胞核较多、所获得的图像背景较佳。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞DNA损伤检测技术，特别涉及一种蚕豆根尖细胞彗星实验样品制 备方法和用于实施该方法的试剂盒。
技术介绍
单细胞凝胶电泳图像分析(Singl e Cell Gel El ect r ophor esi s，SCGE)技 术，又称彗星检测法(Comet Assay)，是一种80年代末发展起来的研究和定量检测单个细 胞DNA损伤的简单、灵敏、快速的新技术。在有关因子诱发下，细胞的DNA若受到损伤，会引 起其高级结构变化，致使其超螺旋结构松散。当细胞发生原位裂解、DNA解旋等现象时，损 伤的DNA片段在电泳时会从核中移出，向阳极迁移并呈现尾形分布，而细胞无损部分仍保 持球形。经荧光染料染色后，可用荧光显微镜观察到这些细胞形成彗星状图样；而且一定条 件下，DNA的迁移距离(表现为彗星尾长度)和DNA的迁移含量(表现为荧光强度)的分 布与DNA受损伤程度相关，此即为单细胞凝胶电泳图像分析技术研究和定量分析的基础。目前世界上通用的方法是采用Si ngh NP等建立和改进的碱性单细胞凝胶电泳图 像分析(Al kal i ne Si ngl e Cell Gel El ect r 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蚕豆根尖细胞彗星实验样品制备方法，包括铺片步骤、细胞裂解步骤、解旋电泳步骤、中和步骤以及染色步骤，其特征在于，所述铺片步骤包括：　　第一铺胶步骤：在一个预处理的载玻片上铺一个第一琼脂糖凝胶层；　　加缓冲液步骤：在所述第一琼脂糖凝胶层上加Ｈｏｎｄａ　ｂｕｆｆｅｒ缓冲液；　　点样步骤：将一个蚕豆根尖的切面反复多次进入所述Ｈｏｎｄａ　ｂｕｆｆｅｒ缓冲液液面；　　第二铺胶步骤：在所述Ｈｏｎｄａ　ｂｕｆｆｅｒ缓冲液上铺一层琼脂糖胶体液，盖上盖玻片，固化后形成一个细胞胶体混合凝胶层。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘爱林，
申请(专利权)人：刘爱林，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]