本发明专利技术涉及害虫生物防治技术领域，具体公开了一种爪哇棒孢霉菌分生孢子微胶囊的制备方法，所述分生孢子微胶囊以爪哇棒孢霉菌Isaria javanicus的分生孢子悬浮液为囊心，以等量明胶与阿拉伯胶所形成的复合胶为囊壁，并以转谷氨酰胺酶作为固化剂通过复凝聚反应制备得到。所制得的分生孢子微胶囊外形呈球形，大小均匀，表面光滑，平均粒径为20～30µm左右；所述微胶囊贮藏期长，抗紫外能力强，可以延长真菌杀虫剂的货架期寿命，同时增强农药的贮藏稳定性和生物防虫效果，在农作物防虫方面具有实际的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及害虫生物防治
，更具体地，涉及。
技术介绍
目前，大量使用化学杀虫剂仍然是防治害虫最主要的方法，然而，化学杀虫剂的使用不仅费用投入较高，且对环境造成污染，影响食品安全；同时还会致使害虫对杀虫剂产生抗性，这些缺点使得人们越来越重视发展害虫生物防治技术。虫生真菌资源丰富，对人、畜无毒害，且不会造成环境污染，因此真菌治虫在害虫生物防治中占有重要地位。然而，真菌杀虫剂因为本身是生命体，对高温、干旱及紫外线等环境因子敏感，作为防虫制剂的货架寿命短，防治效 果不稳定，影响了其发展与应用。因此发展剂型加工技术是解决真菌杀虫剂的稳定性和延长货架寿命的重要途径。目前，真菌杀虫剂已研制出的剂型主要有:原粉剂、粉剂、可湿性粉剂、油剂、颗粒剂及无纺布菌条等。微胶囊制剂是20世纪30年代开发的新剂型，在70年代中期得到了迅猛发展。微胶囊技术是一种新剂型加工技术，微胶囊化能保护有效成份提高其抗逆能力，能使有效成份缓慢释放提高药效。在我国，活菌微胶囊技术专利技术以细菌为主，真菌微胶囊很少，说明我国虫生真菌微胶囊技术还处在初级发展阶段。申请号为201110457248.7的中国专利技术专利公开一种白僵菌微胶囊剂技术，由白僵菌分生孢子、高岭土、水制成的菌悬液为囊心，由海藻酸钠为囊壁，在正十六烷、玉米油和卵磷脂不同比例分散剂中分散，通过钙离子进行交联，使微胶囊固化成粒径小于100 μπι的具有包膜的微小颗粒。白僵菌分生孢子萌发时芽管可穿破囊壁包膜。该微胶囊剂中还加入了分生孢子萌发营养液，提高了分生孢子的萌发率和萌发速度，可有效阻隔外界紫外线、干旱等不良环境对分生孢子的影响，在相同温度、湿度及紫外线影响下萌发率较高，对农林害虫具有较好的防治效果。赵军的“球孢白僵菌微胶囊剂的研制”的研究中，以重要茶树小绿叶蝉为目标害虫，筛选出球孢白僵菌菌株，并研制出适用的微胶囊剂型。真菌的分生孢子对外界环境，如温度、湿度、光照等，较为敏感，真菌杀虫剂剂型的加工要比化学杀虫剂复杂的多。爪睡棒孢霉(J1SariaJaraflicw1S)是一类重要的虫生真菌，其分布广，寄主多，常用于防治小菜蛾、蚜虫、粉虱等重要害虫。现有技术中还没有针对爪哇棒孢霉的所制备得到的包埋率高、杀虫效果优秀的微胶囊制剂。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有棒孢霉真菌杀虫剂应用技术的不足，提供。本专利技术的另一个目的是提供上述方法制备得到的爪哇棒孢霉分生孢子微胶囊，所述微胶囊具有潜在和重要的推广应用价值。本专利技术的目的是通过以下技术方案予以实现的: 本专利技术提供了，即将爪哇棒孢霉菌Isariajavanicus分生孢子纯粉(简称纯孢粉，其含水量小于3%,分生孢子含量大于5 X IO11个，下同)、0.05%吐温80溶液制成的菌悬液与10~20% w/v明胶溶液混合后加入与明胶等质量的10~20% w/v阿拉伯胶溶液进行复凝聚反应，以转谷氨酰胺酶为固化剂进行交联，最后过筛和冷冻干燥得到粒径20~30 Mm左右的微胶囊。本专利技术针对所要包裹的内含物，即具有生物活性的分生孢子，经过探索性实验选择了等量明胶和阿拉伯胶(简称复合胶)为囊壁；本专利技术还特别的选择转谷氨酰胺酶代替甲醛作为固化剂，所包裹得到微胶囊不仅包埋率高，且无毒、安全。上述爪哇棒孢霉菌分生孢子微胶囊的制备方法包括以下步骤: 51.将爪哇棒孢霉菌纯孢粉与0.05%的吐温80溶液按照质量体积比为1:10(g/mL)的比例混合得到菌悬液； 52.将菌悬液与10~20%w/v明胶溶液混合后，加入10~20% w/v阿拉伯胶溶液进行复凝聚反应；明胶与阿拉伯胶等质量； 53.以转谷氨酰胺酶为固化剂进行交联，转谷氨酰胺酶的用量为0.25 g/g明胶；过筛、冷冻干燥得到微胶囊。优选地，SI所述爪哇棒孢霉菌分生孢子纯粉与复合胶的质量比为0.5~1.5:10。优选地，SI 所述菌悬液由爪哇棒孢霉菌纯孢粉与0.05%吐温80溶液通过涡旋搅拌配制而成，所述爪睡棒孢霉菌纯孢粉与吐温80溶液的质量体积比为1:10 (g/mL)。优选地，S2所述10~20% w/v明胶溶液由明胶经浸泡溶胀后加热溶解得到；所述10~20% w/v阿拉伯胶溶液由阿拉伯胶加水并水浴加热至80°C，缓慢搅拌溶解得到；制备得到明胶溶液与阿拉伯胶溶液均在40°C下保温备用。优选地，S2所述复凝聚反应包括以下步骤: 521.40°C条件下，将10~20% w/v明胶溶液与菌悬液混合，搅拌均匀；反应5min后向上述混合液中加入与明胶等质量的10~20% w/v阿拉伯胶溶液，搅拌均匀，得到含复合胶12~18%w/v的水包油乳液； 522.将水包油乳液不断搅拌，转速600~800转/min，滴加10%醋酸调节pH值至3.6~4.0，溶液冷却至35~38°C，进行成囊反应，反应时间为12~18min。优选地，S3所述转谷氨酰胺酶的用量为0.25 g/g明胶。优选地，以转谷氨酰胺酶为固化剂进行交联反应步骤为:复凝聚反应后将其置于冰浴中，继续搅拌至10°c以下，加入转谷氨酰胺酶作为固化剂，继续搅拌15min，再用10%NaOH溶液调其pH至8~9，继续搅拌20min，观察至有胶囊析出为止，静置待微囊沉降。作为一种优选方式，上述爪哇棒孢霉菌分生孢子微胶囊的制备方法包括以下步骤: 51.囊心的制备:将爪哇棒孢霉菌分生孢子纯粉与0.05%的吐温80溶液按照质量体积比为1:10 (g/mL)的比例混合得到菌悬液； 52.囊壁的制备:取适量明胶，用蒸馏水浸泡溶胀后，水浴加热溶解形成质量浓度为10~20%w/v的明胶溶液；另取与明胶等量的阿拉伯胶，加蒸馏水，水浴加热至80°C，缓慢搅拌溶解形成质量浓度为10~20%w/v的阿拉伯胶溶液；所述明胶溶液与阿拉伯胶溶液均在40°C下保温备用； 优选地，SI所述爪哇棒孢霉菌分生孢子纯粉与S2所述明胶和阿拉伯胶总和的质量比为 0.5 ~1.5:10 ; S3.微I父囊制备 40°C条件下，将10~20% w/v明胶溶液与菌悬液混合，缓慢搅拌均匀；反应5min后向上述混合液中加入与明胶等质量的10~20% w/v阿拉伯胶溶液，继续搅拌使之充分混合，得到含复合胶12~18%w/v的水包油乳液； 将水包油乳液不断搅拌，转速600~800转/min，滴加10%醋酸调节pH值至3.6~4.0，溶液冷却至35~38°C，进行成囊反应，反应时间为12~18min ； 成囊反应后置于冰浴中，继续搅拌至10°C以下，加入转谷氨酰胺酶作为固化剂，继续搅拌15min，再用10% NaOH溶液调其pH至8~9，继续搅拌20min，观察至有胶囊析出为止，静置待微囊沉降。本专利技术还提供了上述方法制备得到的爪哇棒孢霉菌分生孢子微胶囊。优选地，所述微胶囊的粒径为20~30 μ m。与现有技术相比，本专利技术具有以下技术效果: 本专利技术提供了一种爪哇棒孢霉分生孢子微胶囊的制备方法，所述方法使用的原料成本低，且无毒安全，适用于生物防治技术，该方法操作简易，具有潜在和重要的推广应用价值。本专利技术还提供了上述方法制备得到的微胶囊，本专利技术选用特定的物质作为壁材，不仅很好的包裹和保护分生孢子，还可以延长真菌杀虫剂的货架寿命；爪哇棒孢霉菌Isaria javanic本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种爪哇棒孢霉菌分生孢子微胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.将爪哇棒孢霉菌分生孢子纯粉与0.05%的吐温80溶液按照质量体积比为1：10（g/mL）的比例混合得到菌悬液；S2.将菌悬液与10～20% w/v明胶溶液混合后，加入10～20% w/v阿拉伯胶溶液进行复凝聚反应；明胶与阿拉伯胶等质量；S3.以转谷氨酰胺酶为固化剂进行交联，转谷氨酰胺酶的用量为0.25 g/g明胶；过筛、冷冻干燥得到微胶囊；所述爪哇棒孢霉菌分生孢子纯粉与明胶和阿拉伯胶总和的质量比为 0.5～1.5：10。
【技术特征摘要】
1.一种爪哇棒孢霉菌分生孢子微胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: 51.将爪哇棒孢霉菌分生孢子纯粉与0.05%的吐温80溶液按照质量体积比为1:10(g/mL)的比例混合得到菌悬液； 52.将菌悬液与10~20%w/v明胶溶液混合后，加入10~20% w/v阿拉伯胶溶液进行复凝聚反应；明胶与阿拉伯胶等质量； 53.以转谷氨酰胺酶为固化剂进行交联，转谷氨酰胺酶的用量为0.25 g/g明胶；过筛、冷冻干燥得到微胶囊； 所述爪哇棒孢霉菌分生孢子纯粉与明胶和阿拉伯胶总和的质量比为0.5~1.5:10。2.根据权利要求1所述的爪哇棒孢霉菌分生孢子微胶囊的制备方法，其特征在于，S2所述复凝聚反应包括以下步骤: 521.40°C条件下，将10~20% w/v明胶溶液与菌悬液混合，搅拌均匀；反应5min后向上述混合液中加入与明胶等质量的10~20% w/v阿拉伯胶溶液，搅拌均匀，得到水包油乳液； 522.将水包油乳液不断搅拌，转速600~800转/min，滴加10%醋酸调节pH值至3.6~4.0，溶液冷却至35~38°C，进行成囊反应，反应时间为12~18min。3.根据权利要求1所述的爪哇棒孢霉菌分生孢子微胶囊的制备方法，其特征在于，S3所述以转谷氨酰胺酶为固化剂进行交联反应步骤为:复凝聚反应后将其置于冰浴中，继续搅拌至10°C以下，加入转谷氨酰胺酶作为固化剂，继续搅拌15min，再用10% NaOH溶液调其pH值至8~9，继续搅拌20min，观察至有胶囊析...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡琼波，尹飞，钟国华，翁群芳，董廷艳，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
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