一种鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法技术

一种鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法，是将杜瓦罐内盛装有冻精的胶囊从液氮中取出，放入水浴锅中，保持水浴锅中水的温度为28℃，时间40-42秒，然后取出装有解冻精液的胶囊，将胶囊中的解冻精液倒入盛精瓶内，即可对鲟鱼母本进行体外授精。本发明专利技术采取恒定水浴的方式对鲟鱼冻精进行解冻，让解冻的精子适用适宜的使用环境，能够有效提高冻精的生存活力。解冻后精子的活力接近鲜精，用其授精于鲜卵，其鲜卵受精率可达80-90%，且胚胎发育良好，降低了产业化应用的生产成本，提高了冻精保存的使用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种鱼类杂交育种的深低温融冻技术，特别是。
技术介绍
保全生物遗传多样性及杂交育种的应用，在水产养殖中选择一 170°C以下深低温冻存精子进行鱼类的繁衍，是生物技术创新应用的发展趋势。但目前，深低温保存鱼类精子也只是高度发达国家用于实验室的方法，实际应用范围却非常有限，其主要原因，是由于许多种鱼类精子在冷冻和解冻过程中会发生重大损害。损害的程度取决于冷冻速率、冷冻保护液以及融冻方法。不少学者提出，在深低温保存冻精的过程中若能实现玻璃化，将更有利于生物遗传多样性保全和杂交育种的研究及应用，利于珍稀动物的保存。运用玻璃化冷冻的方法，如果能成功地实现低温保存遗传物质，将造福于人类。现有的精液冷冻保护方法一缓慢冷冻方法容易形成冰晶，会导致形成胞外冰与胞内冰而损伤细 胞，加之冻融过程中的晶化再结晶，影响其成活率，使得这一生物冻存技术成本昂贵，应用效率极低。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，而提供。本专利技术的技术方案是:，将盛装有冻精的胶囊从杜瓦罐内的液氮中取出，放入水浴锅中，保持水浴锅中水的温度为28V -36°C，时间40-50秒，然后取出装有解冻精液的胶囊，将胶囊中的解冻精液倒入盛精瓶内，即可对鲟鱼母本进行体外授精。本专利技术再进一步的技术方案是:解冻的鲟鱼冻精是采用如下方法冷冻的:将需冻存的鲟鱼精子与抗冻保护液按体积份100:90—110的比例均匀稀释后，加入8-10体积份的鲜鸡蛋黄、46-48体积份的花生四烯酸、6-8体积份的脂质，混匀后用冷冻胶囊盛装，置于抽屉式冷冻室中冷冻，冻速为-58至-68°C /min,冷冻到-56至_70°C后，再将盛有冻精的胶囊卸载在盛有液氮的杜瓦罐内，控制冻速为-148至-152°C /min，冷冻到-190至_196°C后冻存。本专利技术再进一步的技术方案是:抗冻保护液的制备方法是:按照配比将10%的二甲基酚加入到医用生理盐水中混和均匀，再加入甘露糖醇，混和均匀即可；抗冻保护液的重量配比为:医用生理盐水:10%的二甲基酚:甘露糖醇=100:8-10:6-8。本专利技术由于采用如上方法，与现有技术相比，具有如下优点: 1、采取恒定水浴的方式对鲟鱼冻精进行解冻，让解冻的精子适用适宜的使用环境。解冻后的精子活力接近鲜精，授精于鲜卵，其鲜卵受精率可达80-90%。且胚胎发育良好，降低了产业化应用的生产成本，提高了冻精保存的使用价值。2、由于解冻的鲟鱼冻精是采用快速降温的方法冷冻，用抗冻保护液作为防冻剂，使冰相变化时有效地改变冰微粒的面积，极大地改变了精子冻存过程中形成的冰状形态，既削弱和抑制冻精冰粒的产生，又更有效地减小冰微粒在水介质中的可溶性，避免了结晶和重结晶，避免了冻精形成胞内冰与胞外冰的伤害，有效提闻了冻精的生存活力。【具体实施方式】以下结合【具体实施方式】对本专利技术的详细结构作进一步描述。实施例1: ，是将杜瓦罐内盛装有冻精的胶囊从液氮中取出，放入水浴锅中，保持水浴锅中水的温度为34-36°C，时间40-42秒，然后取出胶囊，将胶囊中的解冻精液倒入盛精瓶内，即可对鲟鱼母本进行体外授精。实施例2: ，是将杜瓦罐内盛装有冻精的胶囊从液氮中取出，放入水浴锅中，保持水浴锅中水的温度为32-34°C，时间42-45秒，然后取出胶囊，将胶囊中的解冻精液倒入盛精瓶内，即可对鲟鱼母本进行体外授精。实施例3: ，是将杜瓦罐内盛装有冻精的胶囊从液氮中取出，放入水浴锅中，保持水浴锅中水的温度为30-32°C，时间45-48秒；然后取出胶囊，将胶囊中的解冻精液倒入盛精瓶内，即可对鲟鱼母本进行体外授精。实施例4: ，是将杜瓦罐内盛装有冻精的胶囊从液氮中取出，放入水浴锅中，保持水浴锅中水的温度为28-30°C，时间48-50秒；然后取出胶囊。将胶囊中的解冻精液倒入盛精瓶内，即可对鲟鱼母本进行体外授精。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法，其特征是将盛装有冻精的胶囊从杜瓦罐内的液氮中取出，放入水浴锅中，保持水浴锅中水的温度为28℃‑36℃，时间40‑50秒，然后取出装有解冻精液的胶囊，将胶囊中的解冻精液倒入盛精瓶内，即可对鲟鱼母本进行体外授精。

【技术特征摘要】
1.一种鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法，其特征是将盛装有冻精的胶囊从杜瓦罐内的液氮中取出，放入水浴锅中，保持水浴锅中水的温度为28 V -36 V，时间40-50秒，然后取出装有解冻精液的胶囊，将胶囊中的解冻精液倒入盛精瓶内，即可对鲟鱼母本进行体外授精。2.根据权利要求1所述的鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法，其特征是融冻的鲟鱼精子是采用如下方法冷冻的:将需冻存的鲟鱼精子与抗冻保护液按体积份100:90—110的比例均匀稀释后，加入8-10体积份的鲜鸡蛋黄、46-48体积份的花生四烯酸、6-8体积份的脂质，混匀成精液混合液，用冷冻胶囊盛装，置于抽屉式冷冻室中冷冻，冻速为-58至-68°C /min,冷冻到-56至_70°C后，再将盛装有精液混合液的胶囊卸载在盛有液氮的杜瓦罐内，控制冻速为-148至-152。。/min，冷冻到-190至_196°C后冻存。3.根据权利要求2所述的鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法，其特征是按照配比将10%的二甲基酚加入到医用生理盐水中混和均匀，再加入甘露糖醇，混和均匀即可；抗冻保护液的重量配比为:医用生理盐水:10%的二甲基酚:甘露糖醇=100:8-10:6-8。4.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵智媛，赵伟，
申请(专利权)人：湖南苗王生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43