海马神经元分离和原代培养方法及试剂技术

本发明专利技术属于细胞生物学领域，涉及一种神经元分离和培养方法及试剂。本发明专利技术的目的在于针对现有技术存在的问题，改进当前海马神经元体外分离和培养的方法，解决了海马神经元原代培养的增殖性和活性无法保持的问题。本发明专利技术建立了一套比较成熟的体外培养海马神经元的方法，本发明专利技术得到的神经细胞数量充足，生长状态较好，能够从哺乳动物的海马组织中分离出高活性、高数量的海马神经细胞，符合原代海马细胞培养的要求，可满足神经科学研究中细胞生物学实验的需求。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种海马神经元的分离和原代培养方法包括以下步骤：?(1)漂洗：取离体哺乳动物的海马组织，置冰浴的漂洗液中，去除红细胞、被膜及结缔组织，用漂洗液冲洗2～5次；?(2)消化：将步骤1漂洗后的海马组织剪成直径1mm3小块，用5倍组织体积的消化液37℃作用5～10分钟，组织成粥糜状，用细胞种植液终止消化，轻轻吹打至组织块10次以分散细胞。?(3)制备细胞悬液：收集步骤2消化后初次细胞悬液，经200目细胞筛过滤后，800～1000rpm4℃离心5～10分钟，弃去上清液，加入细胞种植液，重悬细胞，制成5×105～10×105个/mL的单细胞悬液；?(4)接种、培养：将步骤3细胞悬液种植于预先铺好多聚赖氨酸...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙晶，刘佳明，
申请(专利权)人：温州医科大学附属第二医院，育英儿童医院，
类型：发明
国别省市：