一种复合微生物菌剂及其在烟叶生产方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种复合微生物菌剂，是采用菌株P22的培养液和酵母菌培养液按比例混合得到，所述菌株P22的培养液和酵母菌培养液中菌株浓度均大于2亿/mL，菌株P22的培养液和酵母菌培养液中混配后混合菌剂的浓度≥2亿/mL。本发明专利技术所述复合微生物菌剂应用于烟叶生产，能降低烟叶尼古丁含量，提高烟叶整体品质，提高上等烟叶的比例，协调营养，提高烟叶产量；提高烟株抗病抗逆性，达到生物防治的目的，具有重要的推广应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种复合微生物菌剂及其在烟叶生产方面的应用
本专利技术涉及复合微生物菌剂和烟草生产
，更具体地，涉及一种复合微生物菌剂及其在烟叶生产方面的应用。
技术介绍
随着科技兴烟理念的深入开展和卷烟消费者对吸烟有害健康认识程度的加深，社会对烟叶的质量要求也有了实质性的变化，人们不断得要求提高烟叶整体品质，协调营养，提高上等烟叶的比例，提高烟叶产量。烟叶生产是一个技术性比较强的生产流程，总体来说是七分种三分烤，好的烟叶等级质量构筑在烟叶生产提供的优质烟叶基础之上。尼古丁是烟草的重要成分。尼古丁会使人上瘾或产生依赖性（最难戒除的毒瘾之一），人们通常难以克制自己，重复使用尼古丁也增加心脏速度和升高血压并降低食欲。大剂量的尼古丁会引起呕吐以及恶心，严重时人会死亡。烟草中通常会含有尼古丁，这使许多吸烟者无法戒掉烟瘾的重要原因。所以在烟叶生产过程中提高烟叶整体品质、提高上等烟叶的比例、协调营养、提高烟叶产量、有效降低烟叶的尼古丁含量成为研究的重点。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有烟叶种植中微生物菌剂应用技术的不足，提供一种复合微生物菌剂。本专利技术要解决的另一技术问题是提供所述复合微生物菌剂的制备方法。本专利技术还一要解决的技术问题是提供所述复合微生物菌剂的应用。本专利技术的目的通过以下技术方案予以实现：提供一种复合微生物菌剂，是采用菌株P22的培养液和酵母菌培养液混合制备得到，所述菌株P22的培养液和酵母菌培养液中菌株浓度均大于2亿/mL，菌株P22的培养液和酵母菌培养液中混配后混合菌剂的浓度≥2亿/mL；所述菌株P22的培养液和酵母菌培养液按照体积比为1:1～3:1；所述菌株P22保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2010年8月23日，种名：缺陷短波单胞菌，拉丁文名称为Brevundimonasdiminuta，菌株名P22，保藏号为CGMCCNO.4122。优选地，所述菌株P22的培养液和酵母菌培养液按照体积比为1:1、2:1或3:1混合。最优选的混合比例是菌株P22的培养液和酵母菌培养液的体积比为2:1。所述酵母菌优选酿酒酵母。本专利技术同时提供了所述复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：S1.分别发酵扩大培养菌株P22和酵母菌，使每个菌种的培养液最终菌浓度≥2亿/mL，分别得到菌株P22培养液和酵母菌培养液；S2.将菌株P22培养液和酵母菌培养液按比例无菌混配得到复合微生物菌剂。其中，S1所述的发酵扩大培养包括以下步骤：S11.菌种活化：分别从斜面保藏管中取1环菌株P22、酵母菌的菌苔至液体培养基中培养。具体是分别从斜面保藏管中取1环菌株P22、酵母菌的菌苔至30mL液体培养基中，37℃、200rpm培养24小时；S12.摇瓶培养：汲取S1培养所得菌液接种于摇瓶中培养。具体是用无菌移液器汲取S1活化的菌液接种于摇瓶中，接种量为1%；培养温度为37℃，转速为200rpm，培养时间为24h；S13.发酵罐培养：S2培养好的摇瓶接种到发酵罐扩大培养，使最终菌体浓度≥2亿/mL。具体是S2培养好的摇瓶接种到发酵罐扩大培养，接种方式为火焰接种，接种量为1%；培养温度为37℃，转速为180rpm，通气量为1:1，罐压为0.02MPa，培养时间为24～36h，使最终菌体浓度≥2亿/mL；还包括步骤S14：S14.活菌数测定：灭菌的固体培养基趁热倒到无菌的培养皿内（每个培养皿装约20mL）冷却制成平板，菌液依梯度稀释至10-8，依次取10-8、10-7、10-6、10-5菌液各0.1mL于平板中央，每个浓度重复3次，无菌涂布棒涂布均匀，37℃培养24h，取菌落数在30～300的平板作为计数平板，计算菌液活菌数；其中，S11所述液体培养基、S12所述摇瓶培养的培养基、S13所述发酵罐培养的培养基制备方法为：25重量份豆芽加75重量份去离子水煮沸20分钟，过滤除渣，补足体积，加入5重量份葡萄糖溶解混匀，调整pH值至7.0，121℃灭菌30分钟，即得。S11所述的斜面培养基的制备方法为：25重量份豆芽加75重量份去离子水煮沸20分钟，过滤除渣，补足体积，加入5重量份葡萄糖、2重量份琼脂粉溶解混匀，调整pH值至7.0，121℃灭菌30分钟，即得。S14制备菌株平板计数用培养基（固体培养基）的方法为：25重量份豆芽加75重量份去离子水煮沸20分钟，过滤除渣，补足体积，加入5重量份葡萄糖、2重量份琼脂粉溶解混匀，调整pH值至7.0，121℃灭菌30分钟，即得。本专利技术同时提供所述复合菌剂在促进烟叶生产方面的应用。所述应用包括将所述复合菌剂应用于降低烟叶尼古丁含量、增加叶片面积、抑制烟碱形成、协调烤烟烟叶化学成分、改善烟叶的外观质量和/或提高上中等烟叶比例方面的应用。所述协调烤烟烟叶特别优选协调烟叶上部化学成分。所述应用还包括烟叶生产中提高烟株抗病抗逆性的生物防治方面。所述应用方法为：将所述复合微生物菌剂或含有所述符合微生物菌剂的液体喷施于烟株的烟叶表面。优选地，是将所述复合微生物菌剂用水按照菌剂：水为1:100～1:300的体积比稀释混匀后喷施于烟叶表面。优选地混合体积比例为复合微生物菌剂：水=1:200。优选地，在烟叶打顶后第5天将含有所述复合微生物菌剂的液体喷施于烟叶表面。优选地，所述喷施过程进行至叶面滴水为止。优选地，所述喷施过程于晴天午后进行。避免雨天及晴天正午喷施。本专利技术有益效果：本专利技术提供了一种复合菌剂，制备步骤简单，制备成本较低，但具有良好的应用活性，将其应用于烟叶种植过程中，可以达到降低烟叶尼古丁含量、促进烟叶细胞生长和分裂、增加叶片面积、抑制烟碱形成、协调烤烟烟叶特别是上部烟叶化学成分、改善烟叶的外观质量提高上中等烟叶比例等显著技术效果。本专利技术复合菌剂采用的菌株来源于烟叶，将所述复合菌剂喷施到烟叶表面后定殖容易，存活率高；活菌在烟叶表面定殖后，通过自身生长代谢活动及分泌的酶良好影响烟叶细胞生长代谢情况。本专利技术经过长期摸索，采用菌株P22与酵母菌科学配伍，选择的菌株之间不会相互抑制，在定殖生长、功能效果上还能互补，克服了现有技术中多种菌复合容易出现菌株之间相互抑制、影响生长的缺陷。本专利技术所述菌剂在促进烟叶生产的同时，还能有效发挥提高烟株抗病抗逆性的作用，达到生物防治的目的。具体实施方式下面结合具体实施例进一步说明本专利技术。除非特别说明，本专利技术实施例中采用的原料和方法为本领域常规市购的原料和常规使用的方法。实施例1本专利技术从鲜活烟叶表面分离筛选活菌，得到促进烟叶细胞分裂，扩大烟叶面积，抑制烟碱形成的菌株P22，所述菌株P22保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2010年8月23日，种名：缺陷短波单胞菌，拉丁文名称为Brevundimonasdiminuta，菌株名P22，保藏号为CGMCCNO.4122。具体资料还可参见申请号为201110024393.6专利申请文件中的关于所述菌株P22的描述。本实施例采用的酵母菌为酿酒酵母（山东康源生物科技有限公司购买），但并因此限定本专利技术范围，可以采用其他来源的常规酵母菌。按照以下步骤方法制备得到所述复合菌剂：S1.分别发酵扩大培养菌株P22和酵母菌，使每个菌种的培养液最终菌浓度≥2亿/mL。分别得到菌株P22培养液和酵母菌培养液本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种复合微生物菌剂，其特征在于，是采用菌株P22的培养液和酵母菌培养液混合制备得到，所述菌株P22的培养液和酵母菌培养液中菌株浓度均大于2亿/mL，菌株P22的培养液和酵母菌培养液中混配后混合菌剂的浓度≥2亿/mL；所述菌株P22的培养液和酵母菌培养液按照体积比为1:1～3:1；所述菌株P22保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2010年8月23日，种名：缺陷短波单胞菌（Brevundimonas?diminuta），保藏号为CGMCC?NO.4122。

【技术特征摘要】
1.一种应用于促进烟叶生产和/或提高烟株抗病抗逆性的复合微生物菌剂，其特征在于，是采用菌株P22的培养液和酵母菌培养液混合制备得到，所述菌株P22的培养液和酵母菌培养液中菌株浓度均大于2亿/mL，菌株P22的培养液和酵母菌培养液混配后混合菌剂的浓度≥2亿/mL；所述菌株P22的培养液和酵母菌培养液按照体积比为1:1～3:1混合；所述菌株P22保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2010年8月23日，种名：缺陷短波单胞菌(Brevundimonasdiminuta)，保藏号为CGMCCNO.4122。2.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂，其特征在于，所述菌株P22的培养液和酵母菌培养液按照体积比为1:1、2:1或3:1混合。3.根据权利要求2所述的复合微生物菌剂，其特征在于，所述菌株P22的培养液和酵母菌培养液按照体积比为2:1混合。4.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂，其特征在于，所述酵母菌为酿酒酵母。5.权利要求1～4任一项所述复合微生物菌剂在促进烟叶生产和/或提高烟株抗病抗逆性的生物防治方面的应用，其特征在于，是将所述菌剂与水按照1:200的体积比混合后喷施于烟叶叶面。6.权利要求1～4任一项所述复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.分别发酵扩大培养菌株P22和酵母菌，使每个菌种的培养液最终菌浓度大于2亿/mL，得到菌株P22培养液和酵母菌培养液；S2.将菌株P22培养液和酵母菌培养液按...

【专利技术属性】
技术研发人员：李敏，刘永强，邵兰军，谢晓斌，余镜贤，李宙文，黄景崇，冀浩，高卫锴，杜秉海，丁延芹，
申请(专利权)人：广东中烟工业有限责任公司，山东农业大学，
类型：发明
国别省市：