本发明公开了一种无质粒、无抗生素抗性筛选标记的基因工程菌的构建方法，该方法以pXKF3T5b质粒为载体，将目的基因转化到宿主细胞中，然后依次通过表达整合酶辅助质粒的去除、整合载体中的卡那霉素抗性基因的去除、三氯生诱导染色体进化和进化菌的...