血清microRNA分子标志物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种血清microRNA分子标志物及作为白癜风检测方面的应用。该血清microRNA分子标志物是hsa-let-7b，miR-15b，miR-16，miR-25，miR-451中任意一个。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物技术与医学领域，涉及一种血清HIiCT0RNA分子标志物及其应用，尤其涉及一种血清microRNA分子标志物及作为白癜风检测方面的应用。
技术介绍
白癜风是一种常见的获得性色素脱失性疾病，临床表现为皮肤粘膜白斑，病理表现为表皮、粘膜或其他组织内黑素细胞的减少或消失。该病发无定处，但好发于颜面等暴露部位，所及之处皮肤色素完全脱失而成瓷白色，严重影响形象美观，甚至毁损患者容貌，给患者带来巨大精神痛苦，青少年多发易感，其造成的“毁容”后果，给患者带来严重的心理问题。黑素细胞破坏的机制迄今尚未完全阐明，以往关于白癜风的发病机制的研究主要有以下几种学说自身免疫学说、黑素细胞自毁学说、氧化应激学说、神经化学因子学说及遗传学说等。然而，以上任何单一的机制均不能完全解释白癜风的发病机理。随着研究和认识 的深入，越来越多的学者认为，黑素细胞受损的启动及其进程是多种遗传学和表遗传学改变积累所致细胞调节和生长失控的多阶段复杂过程，是环境因素和遗传因素共同作用的结果，由于本病的治疗相对困难，疗程长、收效慢、治愈率低，目前尚没有满意的治疗方法。因此，预防和探索个体化的治疗方案是白癜风疾病控制未来的主要方向，与个体罹患白癜风的易感性、治疗反应及与疾病进程和预后相关的分子标志物的研究也日渐成为热点。microRNA (miRNA)是真核生物中一类长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，在病毒、植物和动物中广泛存在且进化保守，通过mRNA降解和转录后翻译抑制两种沉默机制参与基因表达调控。生理状态下，miRNA表达谱和表达水平具有很强的组织特异性和时相性，机体在病理状态下，miRNA表达谱和表达水平的变化，破坏了 miRNA对其靶基因原有的调控强度，这可能是miRNA参与疾病发生的关键。既往的研究发现miRNA和皮肤肿瘤、炎症性皮肤病疾病、皮肤自身免疫性疾病、皮肤创伤愈合等发病有关，但目前关于miRNA在白癜风发病中的机制研究仍处于起步阶段。常规研究多通过检测病变组织miRNA表达谱与正常组织差异探究发病机制，其检测技术复杂、创伤大，难以真正应用于临床诊断，需找简便、快捷的miRNA研究方法，对于大规模、快速筛查白癜风发病相关miRNA显得十分重要。最近研究发现血清/血浆中存在着大量循环的miRNA，不同的疾病状态miRNA表达谱也不同，而在正常人群中血浆miRNA则很稳定，提示血清/血浆miRNA可作为新的疾病标志物，成为疾病发生机制研究的一个新的切入点，有望应用于疾病的患病风险评估、诊断及治疗。
技术实现思路
为了解决
技术介绍
中存在的上述技术问题，本专利技术提供了一种血清microRNA分子标志物及其应用。本专利技术的技术解决方案是本专利技术提供了一种血清microRNA分子标志物，其特殊之处在于所述血清microRNA分子标志物是hsa-let_7b, miR-15b, miR-16, miR-25,miR-451中任意一个；其中hsa-let-7b 的序列是UGAGGUAGUAGGUUGUGUGGUU ；miR-15b 的序列是UAGCAGCACAUCAUGGUUUACA ；miR-16 的序列是UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG ；miR-25 的序列是CAUUGCACUU⑶CUCGGUCUGA ；miR-451 的序列是AAACCGUUACCAUUACUGAGUU。 任何一个血清microRNA分子标志物作为检测白癜风时的应用。任何一个血清mi cr0RNA分子标志物作为制备具有白癜风检测能力试剂盒的应用。一种具有白癜风检测能力试剂盒，其特殊之处在于所述具有白癜风检测能力试剂盒包括反转录系统、扩增系统以及引物系统；所述反转录系统由E. coli Poly (A) Polymerase (Poly A 加尾酶)、10XPoly(A) Polymerase Buffer (IOXPoly A 加尾反应缓冲溶液)、5XrATP solution (5XATP 溶液)、10 X RT primer (10 X反转录引物)、10 X RT Buffer (10 X反转录缓冲液)、超纯dNTPMixture、RNasin (RNA 酶)、Quant RTase (反转录酶)、RNase_freeddH20 组成；所述扩增系统由2XmiRcute miRNA premix、reverse primer (反向引物)组成；所述引物系统由hsa-let_7b, miR_15b, miR-16, miR-25, miR-451 中的任意一个的扩增引物组成其中hsa-let-7b 的正向引物是5’ -CCTGAGGTAGTAGGTTGTGTGGTT-3’miR-15b 的正向引物是5’ -TAGCAGCACATCATGGTTTACA-3’miR-16 的正向引物是5’ -TAGCAGCACGTAAATAITGGCG-3’miR-25 的正向引物是5’ -GCAITGCACTTGTCTCGGTCTG-3，miR-451 的正向引物是5’ -CGAAACCGTTACCATTACTGAGTT-3’。本专利技术的优点是本专利技术所提供的血清microRNA分子标志物及其应用，该分子标志物包括hsa-let_7b, miR_15b, miR-16, miR-25, miR-451中任意一个，这些分子标志物都能够用于检测白癜风，本专利技术所提供的血清microRNA分子标志物及其应用中，由于血清具有取材方便，无创伤性，并可连续体外检测的优点，因此从血清中寻找生物标志物可以将白癜风的早期筛查和诊断提高至一个新的水平；同时，通过实时荧光定量PCR技术对白癜风临床样本的血清水平miRNA的检测，定量准确，相对于芯片技术或者分子杂交技术，改方法简单快速且经济实用；第三，该疾病标志物可与其他分子指标相结合，为白癜风筛查，诊断，治疗与预后提供新的综合性试剂盒，方便临床应用。附图说明图Ia 是 hsa-let-7b，miR_15b，miR-16, miR-25, miR-451 在白癜风黑素细胞系PIG3V总RNA中的特异性表达电泳图；图Ib 是 hsa-let_7b,miR-15b,miR-16,miR-25,miR-451 在白癒风白斑组织总 RNA中的特异性表达电泳图 Ic 是 hsa-let-7b，miR_15b，miR-16, miR-25, miR-451 在血清总 RNA 中的特异性表达电泳图；图2是本专利技术所提供的血清microRNA表达水平的5 CT值分布图；图3是血清中miRNA的Pearson相关性分析；图4a是本专利技术所提供的hsa-let_7b miRNA白癜风血清样本和正常血清样本经RT-qPCR分析图；图4b是本专利技术所提供的miR_15b miRNA白癜风血清样本和正常血清样本经RT-qPCR分析图； 图4c是本专利技术所提供的miR-16miRNA白癜风血清样本和正常血清样本经RT-qPCR分析图；图4d是本专利技术所提供的miR_25miRNA白癜风血清样本和正常血清样本经RT-qPCR分析图；图4e是本专利技术所提供的miR_451miRNA白癜风血清样本和正常血清样本经RT-qPCR分析图。具体实施例方式本专利技术目的在于提出hsa-l本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种血清microRNA分子标志物，其特征在于：所述血清microRNA分子标志物是hsa？let？7b，miR？15b，miR？16，miR？25，miR？451中任意一个；其中：hsa？let？7b的序列是：UGAGGUAGUAGGUUGUGUGGUU；miR？15b的序列是：UAGCAGCACAUCAUGGUUUACA；miR？16的序列是：UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG；miR？25的序列是：CAUUGCACUUGUCUCGGUCUGA；miR？451的序列是：AAACCGUUACCAUUACUGAGUU。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李春英，石琼，郭森，高天文，李凯，王刚，
申请(专利权)人：李春英，
类型：发明
国别省市：